高效液相色谱法测定尼可刹米注射液的含量

姜锋卫河南省焦作市药品检验所，河南焦作 454000

尼可刹米注射液为中枢兴奋药，临床上用于中枢性呼吸抑制及各种原因引起的呼吸抑制。为《中国药典》（2010年版）二部所收载，检测方法为分光光度法[1]，文献报道的分析方法有GC[2]、磷光分析[3]。本研究用高效液相色谱法测定注射液中尼可刹米的含量，为控制药品质量，提供一种简单、灵敏、快速准确的检测方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪（包括G1322A在线脱气机、G1311A四元泵、G1329A进样器G1314B VWD检测器）；92SM-202A电子天平。尼可刹米原料（天津药业焦作有限公司提供，含量为99.3%）；尼可刹米注射液，规格1.5 mL∶0.375 g（北京市永康药业有限公司，10060224；天津药业焦作有限公司，批号10052322、10071922）；色谱纯乙腈，纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Eclipse DCB-C18（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相[4-5]为乙腈-水（20∶80）；检测波长263 nm，流速1.0 mL/min，柱温30℃，进样量10μL。

2.2 对照品溶液

用天平称取尼可刹米原料0.553 g，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释释至刻度，摇匀；得对照品溶液（5.490 mg/mL）。

2.3 供试品溶液的制备

取供试品5支，混匀。精密量取2 mL，置200 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液（2.5 mg/mL）。

2.4 空白对照试验

依据该药的处方取辅料适量，按供试品溶液制备方法制备不含尼可刹米的空白对照溶液。分别取对照品溶液10μL、供试品溶液20μL、空白对照溶液10μL进样。

从色谱图上看出，在该色谱条件下，供试品溶液和对照品溶液中均出现相应的尼可刹米色谱峰，而空白对照溶液未见色谱峰，表明空白样品不干扰测定。结果见图1。

图1 尼可刹米的色谱图

2.5 线性关系考察

精密量取浓度为5.490 mg/mL的对照液10 mL置100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.549 mg/mL的对照液，分别取浓度为0.553 mg/mL的对照液10μL，20μL，30μL；浓度为 5.490 mg/mL的对照液5μL，10μL，20μL注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=3595.7C-8.6，r=0.9993；表明在浓度为0.549～10.980 mg/mL的范围内进样，样品量与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

取供试品溶液（2.5 mg/mL），按上述色谱条件重复进样6次，每次进样10μL，测定峰面积，RSD=0.8%（n=6）。

表1 回收率实验结果（n=6）

2.7 重复性试验

取同一批号样品，照供试品溶液制备方法制作供试品溶液6份，分别测定，测得供试品中尼可刹米的平均含量为100.3%，RSD=1.3%（n=6），表明方法的重复性良好。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液，分别于 0，3，6，9，12 h 进样 10 μL，测定峰面积，结果RSD为0.95%（n=5），说明供试品溶液至少在12 h内稳定。

2.9 加样回收率试验

精密量取供试品溶液（2.5 mg/mL）5 mL，置于10 mL容量瓶中；精密量取对照品溶液（5.49 mg/mL）2 mL，加入上述容量瓶中，加水至刻度，混匀。依此法平行制备6份，依次进样，测定含量，结果见表1。

2.10 样品含量测定

分别精取对照品溶液和供试品溶液各10μL注入色谱仪，按外标峰面积法计算尼可刹米含量。见表2。

表2 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

取尼可刹米原料适量用流动相溶解，在200～400 nm的波长范围内进行扫描。结果在263 nm处有最大吸收，故选用263 nm为本方法的检测波长。

作者试验过程中，曾比较用乙腈-磷酸盐流动相和乙腈-水流动相，结果显示乙腈-水系统完全可以满足本实验的要求，主峰的峰形较好，考虑到减化操作，故采用乙腈-水系统。

分别用药典方法和本实验方法测定上述10052322、10060224、10071922三个样品，结果药典法分别为99.8%、96.9%、97.0%；本方法分别为100.3%、97.1%、96.9%，显示本方法与药典方法无明显差异，可用于尼可刹米注射液的含量测定。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010：224.

[2] 候一斌.尼可刹米及其代谢产物的气相色谱/质谱法检测[J].质谱学报，1992，1（13）：57-60.

[3] 黄如衡，周东，何长清.尼可刹米经犬气道给药后的药物动力学与药效学[J].中国药理学报，1994，15（3）：271.

[4] 徐帆，冯恩富，徐贵丽，等.氨茶碱、多巴胺、尼可刹米注射液配伍稳定性研究 [J].中国药业，2009，18（23）：12-14.

[5] 郑希林，吴瑞良.尼可刹米注射液的稳定性考查[J].中国药师，2000，3（6）：380.