电化学发光法测定HBV标志物与荧光定量PCR-HBV-DNA结果的分析比较

高 娅 王 婷

1.河南省嵩县人民医院检验科，河南嵩县 471400；2.郑州大学第二附属医院检验科，河南郑州 450014

诊断是否感染HBV主要依赖血清标志物检测，传统上用ELISA法检测HBV标志物，它主要反映人体对HBV的免疫状态，不同血清标志模式表示不同的临床意义。HBV-DNA定量检测可帮助临床医生判断乙型肝炎患者的带毒状态和疗效观察[1]。本实验采用比ELISA更为准确敏感的电化学发光法检测HBV标志物，与实时定量PCR-HBV-DNA结果进行分析比较，进一步探讨HBV标志物与HBV-DNA的相关性，帮助临床判断乙肝患者体内病毒复制情况及其传染性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2010年9 月～2011年6月在郑州大学第二附属医院诊疗的乙型肝炎患者204人，其中男138人，女66人，男女比例为2.1∶1，年龄19～82岁，平均（40.5±18.7）岁。

1.2 仪器和试剂

HBV标志物的定量检测仪器用Roche cobase 411；试剂为罗氏公司提供的专用试剂；PCR-HBV-DNA的检测仪器用Roche Light Cycler 1.5；乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司提供。

1.3 实验方法

抽取实验对象清晨空腹静脉血并分离血清，用电化学发光法测定HBV标志物，用实时荧光定量PCR方法检测HBVDNA。结果判断：PCR-HBV-DNA检测范围为≥5.0×102拷贝/mL，≥5.0×102拷贝/mL为阳性，＜5.0×102拷贝/mL为阴性。HBsAg的参考值为0～0.9 COI，0.9～1.0 COI为灰区，＞1.0 COI为阳性；HBsAb参考值为0～10 U/L，HBeAg的参考值为0～1 COI，HBeAb参考值＞1.0 COI，HBcAb参考值＞1.0 COI。

1.4 统计学处理

采用SPSS11.5统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差（± s）表示，组间比较采用t检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 HBV标志物检测结果

HBsAg阳性结果5.95～10 490（4 846.7±3 196.7）；HBsAb阳性结果14.29～1 010 （271.4±349.3）；HBeAg阳性结果2.7～1 638（978.1±635.1）；HBeAb阳性结果0.003 ～ 0.798（0.123±0.251）；HBcAb阳性结果0.006～0.956（0.037±0.165）。各种血清学模式见表1。

2.2 HBV-DNA定量结果

在204例血清标本中HBV-DNA阳性者78例，占38.2%，结果为501.4～43 450 000（6 027 900±13 840 000）。与HBV标志物模式的比较见表1。

表2 HBV-DNA阳性患者乙肝五项定量结果与HBV-DNA阴性患者比较（± s）

表2 HBV-DNA阳性患者乙肝五项定量结果与HBV-DNA阴性患者比较（± s）

HBsAg（COI） HBsAb（IU/L） HBeAg（COI） HBeAb（COI） HBcAb（COI）HBV-DNA阳性HBV-DNA阴性P DNA定量与乙肝五项定量相关性4286±3274 2386±3439＞0.05 0.453 2.185±3.683 154.6±292.0＜0.05-0.463 639.2±730.8 70.13±272.4＜0.01 0.713 3.204±3.293 0.913±1.199＜0.05-0.541 0.008±0.003 0.152±0.488＞0.05-0.503

2.3 HBV-DNA阳性及阴性患者乙肝五项定量结果比较

HBV-DNA阳性患者HBsAb、HBeAg和HBeAb的定量结果与阴性患者差异有统计学意义（P＜0.05），而HBsAg和HBcAb差异无统计学意义（P＞0.05）。DNA的定量值与HBsAg、HBeAg的定量值正相关；与HBsAb、 HBeAb 及HBcAb负相关，尤其与HBeAg和HBeAb的相关性最大。见表2。

3 讨论

本实验用电化学发光法检测HBV标志物，检出21例ELISA法不常见模式（19例模式1和2例模式7），与传统的ELISA法相比前者有如下优点：ELISA法存在HBsAg漏检的情况，电化学发光法检测的灵敏度达0.01～0.04 IU/mL，大大优于前者；Anti-HBc测定由于血清中乙肝核心抗体蛋白的干扰，可出现假阳性，而电化学发光法使用特制的DTT进行标本预处理后，能极大地减少假阳性；HBsAg与Anti-HBc的检测都会受到干扰物质非特异性信号的影响，电化学发光法采用灵敏的标记物和高纯度、高特异性的试剂，有效解决了非特异性信号的干扰[1]。因此电化学发光法测定HBV标志物的灵敏性特异性均优于ELISA，只是试剂价格昂贵，普通患者很难接受。

检测HBV标志物是临床诊断乙型肝炎的依据和指标，但主要反映人体对病毒感染的免疫状态，不能直接反映HBV在体内的复制情况，也不能作为判断患者是否具有传染性的直接证据。而PCR-HBV-DNA定量结果直接检测病毒自身，可以更为准确灵敏地反映病毒复制水平、病程变化和疗效等情况，是反映是否具有传染性的可靠指标，从而利于临床对乙型肝炎的诊断、治疗方案的选择和对疗效的判断[2]。本实验结果显示，模式4的患者HBV-DNA阳性率最高，含量也最高，同时HBeAg与DNA定量结果相关性最大（r=0.713），说明HBeAg存在时，病毒复制活跃并具有传染性，建议在治疗前后进行HBeAg定量检测，有助于预测疗效、优化治疗方案。但随着HBeAg转阴和HBeAb的产生，并不是所有感染者HBVDNA都转阴。在本实验中模式1和2分别有21.1%和47.2%的HBV-DNA阳性率，研究发现乙肝病毒基因突变造成e抗原停止表达，但患者体内HBV-DNA仍在复制并具有传染性，而且变异后的病毒更不易清除，也更容易进展到肝硬化，所以更应该进行HBV-DNA定量检测，以便观察疗效[3]。

HBsAg是乙肝病毒S基因编码的外膜蛋白，其存在只是HBV感染的指标，而不能反映病毒复制情况及有无传染性[4]。本实验HBV-DNA阳性和阴性患者的HBsAg含量差异无统计学意义（P＞0.05），但DNA与HBsAg含量有一定相关性（r=0.453），因此HBsAg定量结果是否反映病毒载量及复制情况需进一步研究。HBsAb产生并不意味病毒复制停止，在本研究模式1中有4例HBV-DNA阳性，这可能是因为HBV-DNA前C区发生突变出现免疫逃逸或者是不同亚型HBV重复感染[5]。单独HBcAb阳性者（模式5）有50% HBV-DNA阳性率，两者存在相关性（r=-0.503），有研究者认为高滴度HBcAb提示HBV复制，但检出率低，低滴度只表示既往感染；另有观点称HBcAb阳性多数情况是免疫记忆，少数存在病毒复制[6-7]。

综上所述，HBV标志物和HBV-DNA既相关又有所不同，应将二者结合起来并相互补充，更加准确地了解患者HBV感染、病毒复制和传染性情况，为临床制定合理的治疗方案、疗效观察和预后评估提供依据。

[1]陶其敏，魏来.我国病毒性肝炎病原学诊断的发展和展望[J].中华检验医学杂志， 2003，26（12）： 723-725.

[2]许铁军， 曹远陆， 乔春格，等.乙型肝炎血清标志物与HBV DNA含量的相关性分析[J].检验医学与临床，2006，3（6）：247-248.

[3]周晖， 江楚文， 钱靖琳， 等.前S1抗原和HBVDNA与血清标志物之间的相关性探讨[J].南方医科大学学报， 2008，28（7）：1184-1186.

[4]石伍华， 王海清， 许艾明，等.荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA方法测定乙肝五项指标相关性分析[J].临床和实验医学杂志， 2009，8（1）：87-88.

[5]林裕龙.乙型肝炎病毒基因前e区热点变异及其意义[J].国外医学（病毒学分册），2001，（8）：59-63.

[6]贾继东.HBsAg和HBV e抗原检测的临床意义[J].中华医学检验杂志，2009， 32（9）：965-966.

[7]窦蓉， 左雪梅，钱方兴，等.定量检测乙肝病毒免疫标志物与HBV DNA之间的关系及临床意义[J].中华医学检验杂志，2010，11（2）：63-64.