高效液相色谱法测定润降利膈颗粒中柚皮苷含量＊

董军伟 ，王华新，李国川，彭安堂，张桂侠 ，吉朝锋

(1.河北省石家庄市中医院制剂室，河北 石家庄 050051;2.河北省石家庄市第一医院药剂科，河北 石家庄 050011;3.河北医科大学中医学院，河北 石家庄 050091)

润降利膈丸是石家庄市中医院的注册制剂(注册号为冀药制字Z20051118)，具有养阴益胃、顺气开郁的功效，对胃阴不足、肝气犯胃所致胃气上逆、吞咽不利、胸闷烧心、胃噪杂、反胃、腹胀等有良好的治疗效果，用于治疗食道炎、胃炎效果显著。为更加方便患者应用，已将剂型改进为颗粒剂，但原制剂质量标准中无含量测定项目。为进一步控制制剂质量，笔者采用高效液相色谱法测定了润降利膈颗粒中柚皮苷含量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC-10AT型高效液相色谱仪，SPD-10A型紫外检测器，N2010色谱工作站。润降利膈颗粒由石家庄市中医院提供;柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110722-200309);乙腈、甲醇、浓磷酸均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:KromasilC18柱(200mm×4.6 mm，5 μm);柱温:室温;流速:1.0 mL/min;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)，等度洗脱;检测波长:283 nm;进样量:20 μL。理论板数按柚皮苷计不低于3 000，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备[1－2]

精密称取柚皮苷对照品6.61mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，得每1 mL含264.50 μg的对照品溶液。精密称取样品5.014 g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50 mL，回流提取2h，取出放冷，离心，取上清液浓缩至5mL，移至25mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，静置，过 0.22 μm微孔滤膜，即得供试品溶液。取不含枳壳的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察[3-4]:取对照品溶液，以甲醇溶液分别配制成质量浓度为 264.50，132.25，66.13，33.06，26.45，13.23 μg/mL 的对照品溶液，各进样20 μL。以进样质量浓度为横坐标(X)、峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，得回归方程 Y=14 477.828 7 X+25 249.230 5，r=0.999 5(n=6)。结果表明，柚皮苷质量浓度在13.23～264.50 μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液20 μL，连续重复进样，记录峰面积。结果的 RSD为2.372 5%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，按照上述色谱条件在0，2，4，6，8 h时进样测定峰面积，结果的 RSD值为1.789 8%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

重现性试验:取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果的 RSD为1.513 7%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:精密称取同一批样品粉末2.502 1 g，共6份，加入一定量柚皮苷对照品，按照供试品溶液制备方法制备溶液，进样测定。结果见表1。

表1 柚皮苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取样品3批，依法制成供试品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，按2.1项下色谱条件测定，照外标法计算样品中柚皮苷含量。结果批号为20100416，20100417，20100418的3批样品中，柚皮苷含量分别为 0.464 5，0.465 0，0.463 9 mg/g(n=3)。

3 讨论

在对本制剂的提取中发现，超声提取1 h和回流提取2 h效果差别较大，甲醇超声结果不太明显，而回流提取效果较好。因此，确定以甲醇回流提取2 h为样品提取方法。参照文献报道，取柚皮苷对照品溶液适量，在200～400 nm波长范围内扫描，结果在283 nm波长处有最大吸收，故选283 nm波长作为检测波长。用本法测定润降利膈颗粒中柚皮苷的含量作为定量指标，方法相对简便、快速、准确可靠。

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