地锦草提取物对小鼠镇痛作用的实验研究

2011-05-26梁生林李庆耀钟卫华颜峰光李正红

中成药 2011年5期

梁生林，李庆耀，钟卫华，颜峰光，李正红

(1.井冈山大学医学院药理学教研室，江西吉安 343000;2.井冈山大学附属医院功能科，江西吉安 343000)

地锦草为大戟科一年生草本植物地锦Euphorbia humifusaWild的干燥全草。全国各地均有分布，尤以长江流域及南方各省为多，我国江西分布尤多。主要功效为清热解毒、凉血止血［1-2］。课题组在前期研究中发现，地锦草煎剂腹腔注射对小鼠热板法致痛有镇痛作用［3］，但地锦草提取物灌胃给药是否有镇痛作用，水提物和醇提物镇痛作用是否有差异，尚未见报道。本研究探讨地锦草水提物和醇提物灌胃对小鼠热板法和化学刺激法致痛的镇痛作用，旨在为地锦草进一步开发和临床应用提供实验依据。

1 材料

HSS-1B型恒温浴槽(成都仪器厂生产);FA160电子天平(上海天平仪器厂);地锦草2009年9月采于江西吉安;吗啡注射液(沈阳第一制药厂，批号:080701-2，规格:1 mL/10 mg);36%醋酸(上海松江佘山化工厂);昆明种小鼠(体质量18～22 g，雌雄兼备，由南昌大学实验动物中心提供)。

2 方法

2.1 药物配制

2.1.1 地锦草水提物的制备取切段成2～4 cm的干燥地锦草45 g，用蒸馏水浸泡30 min，加10倍量蒸馏水(第1次多加2倍量)用文火煎煮3次，每次0.5 h，合并3次煎出液，静置去渣，浓缩为100 mL，即浓度为45%(0.45 g生药/mL)备用，以此作为大剂量组的给药浓度，再配制小剂量组的给药浓度15%(0.15 g生药/mL)。

2.1.2 地锦草醇提物的制备用回流提取法，将45 g干燥地锦草适度粉碎，用体积分数为80%乙醇浸泡24 h，水浴中加热回流，放冷过滤，第1次回流1 h，第2及第3次各约0.5 h，回收乙醇，浓缩成浸膏状，贮存备用。用蒸馏水配成所需浓度，即大剂量组的给药浓度45%(0.45 g生药/mL)，小剂量组的给药浓度15%(0.15 g生药/mL)。

2.1.3 溶液配制吗啡溶液∶用蒸馏水配成0.1%浓度。醋酸溶液:用蒸馏水配成0.6%浓度。

2.2 地锦草提取物热板法［4-5］镇痛实验

2.2.1 筛选实验动物将小鼠置于镇痛槽内，以舔后爪出现时间作为痛阈的指标。当出现舔后爪时，立即记录时间(即痛阈值)，然后取出小鼠。用此法筛选出痛阈值在5～30 s的雌性小鼠84只供实验用。

2.2.2 动物分组与正常痛阈测定将筛选好的84只小鼠，按随机数字表法分为6组，每组14只:①组为生理盐水对照组;②组为0.1%吗啡溶液组;③组为地锦草水提物大剂量组(质量分数为45%);④组为地锦草水提物小剂量组(质量分数为15%);⑤组为地锦草醇提物大剂量组(质量分数为45%);⑥组为地锦草醇提物小剂量组(质量分数为15%)。将每只小鼠正常痛阈值各测2次，每次间隔5 min，取其平均值为给药前正常痛阈值。

2.2.3 给药 ①组生理盐水;②组0.1%吗啡溶液;③组45%地锦草水提物;④组15%地锦草水提物;⑤组45%地锦草醇提物;⑥组15%地锦草醇提物。小鼠均灌胃给药，灌胃量均为0.1 mL/10 g，连续灌胃5 d，每天1次。末次给药后30、45、60、90 min各测小鼠痛阈值，如果用药后放入镇痛槽内60 s仍无反应，即将小鼠取出，其痛阈值按60 s计算。

2.3 地锦草提取物醋酸扭体法［4-5］镇痛实验

取昆明小鼠84只，雌雄各半，随机分为6组:生理盐水对照组、盐酸吗啡组、地锦草水提物大剂量组、地锦草水提物小剂量组、地锦草醇提物大剂量组、地锦草醇提物小剂量组。小鼠均灌胃给药，灌胃量均为0.1 mL/10 g，连续灌胃5 d，每天1次。末次给药30 min后，各鼠均腹腔注射0.6%醋酸0.1 mL/10 g(醋酸溶液临用前配制)。观察并记录20 min内各组出现的扭体反应(腹部内凹、伸展后肢、臀部抬高)次数。

2.4 统计学分析

3 结果

3.1 地锦草提取物对热板法所致小鼠疼痛的影响

给药前各组痛阈值比较无显著性差异(P＞0.05);0.1%吗啡溶液组、45%地锦草水提物组和醇提物组给药后与生理盐水对照组比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05);15%地锦草水提物组给药后30、45、60 min与生理盐水对照组比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05);15%地锦草醇提物组，给药后30 min与生理盐水对照组比较有非常显著性差异(P＜0.01)。

与自身给药前比较，生理盐水对照组无显著性差异(P＞0.05);0.1%吗啡溶液组、45%地锦草水提物组、15%地锦草水提物组、45%地锦草醇提物组给药后与给药前比较均有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05);15%地锦草醇提物组，给药后30、45 min与给药前比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)。结果见表1。

表1 地锦草提取物对热板法所致小鼠疼痛的影响 (±s，n=14)

注:与生理盐水对照组比较，*P ＜ 0.01，＊＊P ＜ 0.05;与自身药前痛阈比较，△P ＜ 0.01，△△P＜0.05。

12.21 ±3.23 0.1%吗啡溶液组 10.95±2.52 18.49 ±5.65＊△ 19.52±4.40＊△ 21.19 ±5.19＊△ 19.33 ±5.91＊△45%地锦草水提物组 12.26±4.59 20.02 ±7.82＊△ 21.51±8.49＊△ 20.67 ±6.32＊△ 17.89 ±6.37＊＊△△15%地锦草水提物组 10.06 ±2.80 14.98 ±4.54＊△ 14.54 ±3.81＊＊△ 15.08±6.22＊＊△ 14.12 ±4.81△△45%地锦草醇提物组 12.62 ±3.37 26.18 ±6.03＊△ 26.16 ±5.51＊△ 26.50 ±6.31＊△ 29.81 ±6.41＊△15%地锦草醇提物组 10.9 ±3.32 15.38 ±4.23＊△ 13.98±3.98△△30 min 45 min 60 min 90 min生理盐水对照组 11.14 ±3.19 10.16 ±2.89 11.4 ±4.01 11.21 ±2.98组别给药前痛阈值/s 给药后痛阈值/s 11.87 ±3.78 10.59 ±3.24

3.2 地锦草提取物对醋酸扭体法所致小鼠疼痛的影响

0.1%吗啡溶液组与生理盐水对照组比较有非常显著性差异(P＜0.01);45%、15%地锦草水提物和醇提物组与生理盐水对照组比较均有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)。结果见表2。

表2 地锦草提取物对醋酸扭体法所致小鼠疼痛的影响( ± s，n=14)

注:与生理盐水对照组比较，*P ＜0.01，＊＊P＜0.05。

组别扭体反应数/次44.14 ±20.25 0.1%吗啡溶液组 1.36 ±3.47*45%地锦草水提物组 21.71 ±16.2*15%地锦草水提物组 30±12.47＊＊45%地锦草醇提物组 21.14 ±17.38*15%地锦草醇提物组 25±21.09生理盐水对照组＊＊

4 讨论

地锦草具有清热解毒、止血活血、利湿退黄等功效，现代药理研究表明地锦草具有抗菌［6］、抗病毒、抗真菌［7］、止血［6］、抗氧化［8-12］、保肝［13-14］、保肾［9］等作用。民间及临床广泛用于上呼吸道感染，急慢性咽喉炎，急性扁桃体炎，气管炎，肺炎，急性肠胃炎，小儿腹泻，细菌性痢疾，病毒性肝炎，肾盂肾炎，咳血、尿血、便血，外伤所致出血、瘀血、肿痛，各种体癣等。

本实验研究表明，大剂量地锦草水提物和醇提物可显著提高热板法所致的小鼠痛阈值和减少醋酸扭体法所致的小鼠扭体次数，与生理盐水对照组比较和自身给药前比较有显著差异，醇提物镇痛作用好于水提物，为其综合开发利用提供了实验依据。其镇痛有效成份及机制有待进一步研究。

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