宫血宁胶囊HPLC指纹图谱研究

何 佳， 李 懿， 韦建荣

（云南白药集团股份有限公司，云南昆明 650032）

宫血宁胶囊HPLC指纹图谱研究

何 佳， 李 懿， 韦建荣*

（云南白药集团股份有限公司，云南昆明 650032）

目的 本研究建立宫血宁胶囊（重楼）的HPLC指纹图谱分析方法，为宫血宁胶囊内在质量评价积累数据。方法

采用 RP-HPLC 方法，以 Agilent Series SB-AQ C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱程序为5～50 min，20% ～42%A；50～70 min，42% ～44%A；70～100 min，44% ～80%A；100～120 min，80% ～95%A；洗脱时间为120 min；检测波长203 nm；体积流量1.0 mL/min；柱温30℃；进样量10 μL，进行指纹图谱研究。结果 建立宫血宁胶囊指纹图谱，以重楼皂苷H色谱峰为参照峰，确定12个共有峰，测定了60批样品，样品指纹图谱相似度均大于0.99。结论 本法操作简便、分离效果好、稳定性高、重现性好，可应用于宫血宁胶囊的质量控制及真伪品鉴别。

宫血宁胶囊；高效液相色谱；指纹图谱

宫血宁胶囊为硬胶囊剂，内容物为浅黄棕色至灰棕色的粉末。其原料为重楼，重楼具有清热解毒、消肿止痛、平喘止咳、凉肝定惊之功效，多用于疔疮痈肿、咽喉肿痛、虫蛇咬伤、跌打伤痛等症［1-2］。宫血宁胶囊味苦。具有凉血止血，清热除湿，化瘀止痛之功效。临床上主要用于崩漏下血，月经过多，产后或流产后宫缩不良出血、子宫功能性出血属血液妄行症者，及慢性盆腔炎之湿热瘀结所致的少腹痛，腰痛，带下增多等症状［1］。现代化学研究表明，重楼属植物主要活性成分为甾体皂苷类，约占总化合物数目的80%，其苷元主要为异螺甾烷醇类的薯蓣皂苷元和偏诺皂苷元［3-6］。

中药指纹图谱的建立及结合指标成分的定量研究，是为了解决药品质量控制和评价、监督这一关键问题，寻求一种新的方法和手段，是一个崭新的课题和研究模式。针对药材的生产、加工、贮存及制剂的原料、中间体、成品、流通产品等各环节进行样品分析，通过相似性和相关性的对比，目的在于全面控制中药药品的质量命脉［7-13］。

宫血宁胶囊自上市以来，广泛应用于妇科、产科、计生科出血性疾病及（亚急性）慢性盆腔炎等疾病的防治。本实验按照国家药品监督管理局对中药材及中成药指纹图谱研究的技术要求，根据宫血宁胶囊主要成分的性质，采用高效液相色谱分析方法，测定了60批样品，建立了宫血宁的HPLC指纹图谱，利用HPLC指纹图谱技术对产品的质量信息进行监控及真伪品鉴别，为产品质量评价累积资料，收集产品的均一性和稳定性数据，确保产品的内在质量。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂 高效液相色谱仪（Agilent 1100），自动进样器，DAD检测器；乙腈为色谱纯，水为三蒸水，其它试剂均为分析纯；重楼皂苷H，购于中科院昆明植物研究所；宫血宁胶囊（云南白药集团股份有限公司）。

1.2 对照品溶液制备 取重楼皂苷H对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.4 mg/mL的对照品溶液。

1.3 供试品溶液制备 取本品20粒的内容物，精密称定，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理40 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，以0.45 μm微孔滤膜滤过，取滤液，作为供试品溶液。

1.4 色谱条件 Agilent Series SB-AQ C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱程序：5～50 min，20% ～42%A；50～70 min，42% ～44%A；70～100 min，44% ～80%A；100～120 min，80% ～95%A，洗脱时间120 min，检测波长 203 nm；体积流量1.0 mL/min；柱温30℃；进样量10 μL。

2 结果与讨论

2.1 系统适应性试验 将宫血宁胶囊（批号20080306）供试品溶液进样10 μL，记录色谱图（见图1），样品出峰总数为21个，达到分离度要求的色谱峰数为15个，对比保留时间确定样品中tR=56.3 min峰（8号峰）为重楼皂苷H色谱峰，重楼皂苷H与相邻峰分离良好且保留时间适中，选作参照峰（S），确定12个共有峰，共有峰数占总峰数比例57%；计算各样品中非共有峰占总峰面积的比值，结果表明，其比值均小于5%。2 h空针色谱图和2 h样品供试液图表明检测系统无其他干扰峰出现，组分在90 min内出峰完全。

图1 宫血宁胶囊（批号20080306）HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of Gongxuening Capsules

2.2 精密度试验 取同一批供试品溶液，连续进样6次，记录色谱图，考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，结果显示各共有峰相对保留时间的RSD为0.35% ～2.97%，相对峰面积比值的RSD为0.82% ～2.64%，结果表明方法精密度良好。

2.3 稳定性试验 取同一批供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、24、30、36、40、48 h 进样分析，考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，各共有峰相对保留时间 RSD为0.44% ～3.01%，相对峰面积比值的 RSD为 0.71% ～2.97%，结果表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

2.4 重复性试验 取同一批的供试品，分别制备供试品溶液6份，进样分析，考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，各共有峰相对保留时间的RSD为0.31% ～2.94%，相对峰面积比值的RSD为0.88% ～2.72%，结果表明方法重现性良好。

2.5 指纹图谱的建立及相似度分析

2.5.1 测定了连续5年的60批宫血宁胶囊，建立指纹图谱。通过参照峰计算各共有峰的相对保留时间及RSD，得到各共有峰的相对保留时间RSD均小于3.0%，结果见表1。

2.5.2 相似度是评价中药指纹图谱一个最常用的参数，通常利用指纹图谱的相似度数据来研究中药质量是否可控、稳定。本研究采用《中药指纹图谱相似度评价系统A版》软件来评价相似度，通过与系统建立共有模式比较，得到各批样品的相似度数据，结果见表2。

表1 60批宫血宁胶囊共有峰的相对保留时间Tab.1 The relative retention time of common peaks of 60 batches of samples

续表1

表2 60批宫血宁胶囊指纹图谱相似度数据Tab.2 Similarity data of Gongxuening Capsules by HPLC fingerprint

3 讨论

3.1 样品处理条件的选择 比较了甲醇、乙醇（分别为30%，50%，60%，70%，100%）共10种提取溶剂对样品的提取率。结果显示，提取率：无水甲醇＞无水乙醇＞含水甲醇＞含水乙醇，确定提取溶剂为无水甲醇。

3.2 流动相系统的选择 比较了乙腈-水的多种不同梯度洗脱溶剂系统。结果显示，流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱程序为：5～50 min，20% ～42%A；50～70 min，42% ～44%A；70～100 min，44% ～80%A；100～120 min，80% ～95%A，洗脱时间120 min，该梯度洗脱溶剂系统所得图谱的峰型和分离度较好，故确定该梯度洗脱溶剂系统为流动相系统。

3.3 本研究建立的宫血宁胶囊指纹图谱分析方法，方法可靠，精密度、重现性、稳定性良好，指纹图谱具有一定的特征性，能反映宫血宁胶囊的特征，可用于宫血宁胶囊的质量控制及真伪品鉴别。

3.4 利用本方法对不同批次的宫血宁胶囊进行指纹图谱研究的结果显示，连续5年的60批胶囊指纹图谱相似度较高，从指纹图谱共有峰的峰位和峰型看，分离效果好，同时也在一定程度上反映了宫血宁胶囊安全稳定、质量可靠的产品品质。

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HPLC fingerprint of Gongxuening Capsules

HE Jia， LI Yi， WEI Jian-rong*
（Yunnan Baiyao Group Co.，Ltd，Kunming 650032，China）

AIMTo establish the HPLC fingerprint of Gongxuening Capsules（Paris polyphyllaSmith var.yunnanensis（Franch.）Hand.-Mazz）and accumulate data for evaluation of its quality.METHODSThe chromatographic fingerprints were determined with reversed-phase HPLC on an Agilent Series SB-AQ C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）with the gradient solvent system consisting of acetonitrile（A）and water（B），5－50 min，20% －42%A；50－70 min，42% －44%A；70－100 min，44% －80%A；100－120 min，80% －95%A，The flow rate was 1 mL/min，the detection wavelength was set at 203 nm，and the column temperature was maintained at 30℃.To deal with the data by“similarity of software of Chinese traditional medicine fingerprints”.RESULTSBased on the peaks of paris saponin H as reference peaks，measured value of sixty batches revealed that there were twelve common peaks and high similarity between samples of fingerprints.CONCLUSIONThis method is easy to handle and has good separation effect，reproducibility and high stability，and can be applied to quality control and product identifieation of Gongxuening Capsules.

Gongxuening Capsules；HPLC；fingerprints

R944.5

A

1001-1528（2011）07-1098-04

2010-10-28

何 佳（1980—），女，工程师，主要从事中药质量标准化控制与研究工作。Tel：（0871）4121231，E-mail：armor118@sina.com

*通信作者：韦建荣，男，硕士，正高级工程师，Tel：（0871）8324130，E-mail：jrwei@126.com