野菊花药效组分抗炎的生物效应研究

郑璐璐，张贵君，王晶娟，何瑞杰，崔秀梅

（1.北京中医药大学中药学院，北京 100102；2.中国药材集团公司，北京 101300）

野菊花药效组分抗炎的生物效应研究

郑璐璐1，张贵君1，王晶娟1，何瑞杰1，崔秀梅2

（1.北京中医药大学中药学院，北京 100102；2.中国药材集团公司，北京 101300）

[目的]验证和进一步确定野菊花抗炎的药效组分，为建立野菊花与临床疗效对应的质量标准提供科学依据。[方法]在高效液相色谱（HPLC）分析法确定初步药效组分基础上，采用小鼠血管通透性实验和小鼠耳肿胀实验验证抗炎的生物效应,设立了野菊花水煎剂组、五味消毒饮组、模型组进行比较。[结果]野菊花药效组分组与模型组相比，有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01），与水煎剂组和五味消毒饮组相比，无显著性差异（P>0.05）。[结论]野菊花的药效组分（绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和蒙花苷）确实具有抗炎作用，可以作为野菊花抗炎的药效组分。

野菊花；抗炎药效组分；质量标准；生物效应

野菊花功效清热解毒，主治痈肿疮毒、目赤肿痛、眩晕头痛，是常用的一味中药，但是由于一直缺少标准物质（药效组分）[1]，给野菊花及其制剂质量标准的制定带来了一定的困难。本研究在中药药效组分理论的指导下，在由高效液相色谱（HPLC）分析法确定野菊花初步药效组分基础上[2-5]，通过现代药理实验结合疗效确切的经方最终确定了野菊花的抗炎药效组分，为建立野菊花与临床相对应的质量标准提供新的研究思路与方法。

炎症是临床常见的一个病理过程，可以发生于机体各部位的组织和器官，炎症前期主要表现为渗出液增多，后期则以结缔组织增生常见。本研究选用小鼠血管通透性实验及耳廓肿胀实验，以地道产区安徽金寨的野菊花为研究载体，将药效组分与水煎剂进行对比实验，并通过经方和对经方的加减对其进行同步验证，现将实验结果报道如下。

1 实验材料

1.1 动物 ICR小鼠（18～22）g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCX K（京）2006-0009，将其在室温22～25℃、相对湿度为65%的动物室中12h明暗交替照明3～4日，让其自由进食、饮水。

1.2 药品与仪器 阿司匹林肠溶片：北京太洋药业有限公司，生产批号060102。0.9%氯化钠注射液（250mL/瓶）：四川科伦药业股份有限公司。伊文思蓝（化学纯、50 g/瓶）：上海化学试剂公司，批号981016。冰醋酸、二甲苯（500mL/瓶）：北京化工厂。打孔器（直径8mm），JN-B型精密扭力天平，日立U-3010紫外分析仪。

1.3 溶液配置 野菊花水煎液配置：12 g的安徽金寨野菊花，8倍量水煮2次，混合两次滤液浓缩得到。五味消毒饮复方配置：金银花15 g，野菊花6 g，蒲公英6 g，紫花地丁6 g，天葵6 g，8倍量水煮两次，混合两次滤液浓缩得到。五味消毒饮复方减去野菊花再加上药效组分溶液的配置，以下简称“复减野加组分”组：金银花15 g，蒲公英6 g，紫花地丁6 g，天葵6 g，8倍量水煮两次，混合两次滤液浓缩，再加入药效组分（绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、蒙花苷）。药效组分高剂量组的配置：按金寨产野菊花中各药效组分所测含量，配制成每mL含绿原酸0.511mg、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷 0.157mg、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷0.146mg、蒙花苷1.179mg的溶液；药效组分中剂量组是将高剂量组的浓度稀释1倍；药效组分低剂量组是将中剂量组的浓度稀释1倍。

2 实验方法

2.1 小鼠血管通透性实验（急性渗出实验）

2.1.1 分组与给药 ICR小鼠90只（雌雄各半）随机分为9组，每组10只。第1组为空白组(给等量蒸馏水)，第2组为模型组（给等量生理盐水），第3组为阳性对照组[给阿司匹林溶液0.013 g/（kg·d）]，第4组为野菊花水煎液组[1.56 g/（kg·d）]，第5组为野菊花药效组分低剂量组（0.4mL/d），第6组为野菊花药效组分中剂量组（0.4 mL/d），第7组为野菊花药效组分高剂量组（0.4 mL/d），第8组为五味消毒饮组[5.07 g/（kg·d）]，第9组为“复减野加组分”组[4.29 g/（kg·d）]，阳性阿司匹林组只在实验最后一天给药，其他组每天给药1次，连续7 d。

2.1.2 测定指标 末次给药30min后除空白组外，各鼠均尾静脉注射0.5%伊文斯蓝生理盐水溶液0.2mL，随即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2mL/20 g，20min后脱臼处死，腹腔注射5mL生理盐水，轻揉小鼠腹部，以使腹腔内染料充分溶于生理盐水中并混合均匀，剪开腹部皮肤肌肉，用吸管吸取腹腔洗出液4mL，3 000 r/min离心15min；取上清液于608 nm处比色测定光密度，根据标准曲线计算得出每只小鼠腹腔渗入的伊文思兰含量（g/L）[6]，该数据以均数±标准差（±s）表示，用SAS8.2统计软件包进行统计学处理,独立样本t检验，P＜0.05为有统计学意义。

2.1.3 伊文思兰溶液标准曲线的绘制 将准确配制的0.4987%伊文思蓝溶液稀释成 9.68、7.26、4.84、2.42、1.21mg/L等浓度的溶液，在590 nm处比色测定，根据OD值与浓度，作出标准曲线，回归方程为Y=0.022X+0.0379，r=0.9981。

2.2 小鼠耳缘肿胀实验（慢性肿胀实验）

2.2.1 分组与给药 分组方法和给药剂量同2.1.1。灌胃给药，1次/d，连续7 d。

2.2.2 测定指标 末次给药后1 h，除空白组外，在每只小鼠左耳涂二甲苯50μL，右耳为对照，涂二甲苯45min后处死小鼠，沿耳廓线剪下左右耳，用直径8mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，分别称质量，以左、右耳片质量之差为肿胀度，计算抑制率[6]。计量资料以均数±标准差（±s）表示，用 SAS8.2统计软件包进行统计学处理，正态分布资料的组间比较采用单因素方差分析，偏态分布资料组间比较采用秩和检验对数据进行统计分析。

3 结果

3.1 野菊花药效组分对小鼠血管通透性的影响 实验结果显示：空白组小鼠的腹腔洗涤液颜色几乎为透明，腹腔液渗出染料的OD值很小，模型组小鼠的腹腔洗涤液颜色为蓝色，腹腔液渗出染料的OD值较大，且空白组与模型组腹腔液渗出染料的OD值相比，具有显著性差异（P<0.01），证明造模成功。

各药物组小鼠的腹腔洗涤液与模型组相比颜色浅，经比色测定小鼠腹腔渗出染料量少且具有显著性差异（P<0.05或P<0.01），则各受试药物组均可明显抑制H+所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加。药效组分的低、中、高剂量组，五味消毒饮复方组及“复减野加组分”组，与水煎液组相比均无显著性差异（P>0.05），则证明野菊花的药效组分确实具有急性抗炎作用，其抗炎药效组分为：绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和蒙花苷。实验数据见表1。

表1 对HAc所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响（±s,n＝10)Tab.1 Effecton capillary permeability increasing induced by HAC inm ice（±s,n＝10)

表1 对HAc所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响（±s,n＝10)Tab.1 Effecton capillary permeability increasing induced by HAC inm ice（±s,n＝10)

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

伊文思兰含量（mg/L）空白组 0 0.96×10－2-1.286±0.021 0**模型组 0 16.42×10-2-5.741±0.024 0阳性组 0.013 3.92×10-2-0.059±0.024 0**水煎液组 1.560 13.09×10-2-4.227±0.184 4*药效组分组 低 0.012 9 8.73×10-2-2.245±0.110 0**中 0.006 5 6.12×10-2-1.059±0.069 0**高 0.003 2 4.71×10-2-0.418±0.009 5**五味消毒饮水煎液 5.070 7.11×10-2-1.509±0.067 0**“复减野加组分”组 4.290 8.32×10-2-2.059±0.086 0**组别 剂量（g/kg）OD值（x）

3.2 野菊花药效组分对小鼠耳廓二甲苯致炎的影响 实验结果显示：空白组与模型组相比，肿胀度差异显著（P＜0.01），则证明造模成功。各组受试药物与模型组相比，均有显著性差异（P＜0.05或 P＜0.01），则证明各用药组均可抑制小鼠耳廓肿胀。药效组分组、五味消毒饮组和“复减野加组分”组与水煎剂组相比，无显著性差异（P>0.05），证明药效组分、复方组与水煎液组均可抑制二甲苯引起的肿胀，其中药效组分中剂量组、高剂量组和“复减野加组分”组的肿胀抑制率较高。见表2。

4 讨论

小鼠血管通透性和小鼠耳缘肿胀的动物模型是研究抗炎作用的经典模型，本实验中野菊花水煎剂、药效组分及经方五味消毒饮均能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，以及醋酸所造成的小鼠腹腔毛细血管通透性增高。有研究表明野菊花具有抗菌消炎的作用[7]。本课题组研究得到的药效组分与水煎剂相比，在抗炎方面均差异不显著（P>0.05），并在经方五味消毒饮中得到验证。即：绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和蒙花苷为野菊花的抗炎药效组分。

表2 对小鼠耳廓二甲苯致炎的影响（±s,n＝10)Tab.2 Theeffecton xylene-induced inflammation of m iceears（±s,n＝10)

表2 对小鼠耳廓二甲苯致炎的影响（±s,n＝10)Tab.2 Theeffecton xylene-induced inflammation of m iceears（±s,n＝10)

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

抑制率（%）空白组 0 0.3±0.68** -8.3模型组 0 1.2±0.66 -阳性组 0.013 0.4±1.26** 66.67水煎液组 1.56 0.8±0.63** 33.33药效组分组 低 0.0129 1.0±0.37* 16.67中 0.0065 0.8±0.14* 25高 0.0032 0.6±0.15** 50五味消毒饮水煎液 5.07 0.9±0.19 25“复减野加组分”组 4.29 0.7±0.20** 41.67组别 剂量（g/kg·d）肿胀度（mg）

本研究同时设立了空白组和模型组，以期通过空白和模型的比较证明造模的成功，而且在通过经方进行验证时，将复方中的野菊花药材换成野菊花药效组分进行验证，进一步证明了本实验室所筛出的野菊花药效组分确实与临床疗效有一定相关性。

[1]张贵君，罗 容，王奕洁.中药药效组分理论与中药组分学[J].中药材，2007，30（2）：125-126.

[2]吴明侠，张贵君.HPLC测定野菊花中两种黄酮类药效组分的含量[J].中国现代中药，2008，10（2）：20-22.

[3]吴明侠，张贵君.HPLC测定野菊花70%乙醇提取物中两种有机酸类药效组分的含量[J].中医药学报，2007，35（6）：33-35.

[4]吴明侠，张贵君.HPLC测定野菊花水提取液中有机酸类药效组分的含量[J].中国现代药物应用，2008，2（12）：10－12.

[5]张春晖，张贵君，杨晶凡，等.中药黄金菊汤剂君药的6种抗炎药效组分含量测定[J].中国现代中药，2009，11（7）：15-17.

[6]徐淑云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学［M］.北京:人民卫生出版社，2003：17-27.

[7]李风丽，李 进，陈 涛，等.野菊花微型灌肠液提取工艺的研究[J].天津中医药，2007，24（2）：159-160.

Biologicalanti-inflammatory effects in active com ponents of FlosChrysanthem i Indici

ZHENG Lu-lu,ZHANGGui-jun,WANG Jing-juan,etal
（Chinese Herb College,Beijing University of TCM,Beijing100102,China）

[Objective]To verify the active components of anti-inflammatory effectand provide the scientific basis date for the clinical curative effect of quality standards in Flos Chrysanthemi Indici.[Methods]On the basis of determining the active components of the classic prescription by HPLC analysis the biological anti-inflammatory effectswas demonstrated bymice vascular permeability test and auricle tumefaction test.The FlosChrysanthemi Indicidecoction group andWuweiXiaodu decoction groupwereestablished and compared with themodelgroup.[Results]Compared withmodelgroup,Flos Chrysanthemi Indiciactive components group had significant difference(P<0.05 or P<0.01).Therewasno significantdifference between Flos Chrysanthemi Indicidecoction group and the“WuweiXiaodu drinking” group(P>0.05).[Conclusion]The active componentsof Flos Chrysanthemi Indici(Chlorogenic acid,Luteolin-7-O-β-D-glucoside,Apigenin-7-O-β-D-glucoside and Buddleoside)really have obviouseffectsofanti-inflammation,so they are the active componentsof anti-inflammatory effectof Flos Chrysanthemi Indici.

FlosChrysanthemi Indici;active componentsofanti-inflammatory effect;quality standards;biologicaleffects

R284.2

A

1672-1519(2011)03-0251-03

郑璐璐（1984-），女，硕士研究生，主要研究方向：中药药效组分及中药药效组分质量标准研究。

张贵君。

2010-11-22）