头孢地嗪钠原料药中聚合物的测定

陶 君，张文彦，王乃浩

（1.河北奥星集团药业有限公司，新乐 050700；2.河北省卫生厅卫生监督局，石家庄 050051）

头孢地嗪钠原料药中聚合物的测定

陶 君1，张文彦2，王乃浩1

（1.河北奥星集团药业有限公司，新乐 050700；2.河北省卫生厅卫生监督局，石家庄 050051）

[目的]建立原料药头孢地嗪钠中聚合物含量的测定方法。[方法]用凝胶色谱柱，采用自身对照外标法，测定头孢地嗪钠原料中聚合物含量。[结果]头孢地嗪缔合物在17.83～178.26 g/L范围内，以及头孢地嗪聚合物在5.237～50.041 g/L范围内，与峰面积呈良好的线性关系。[结论]该方法操作简单，准确，灵敏度高。

头孢地嗪钠；聚合物；凝胶色谱柱；自身对照外标法

多年研究业已证明，由β-内酰胺类抗生素药物所致的速发型过敏反应并非药物本身所致，而与药物中存在的高分子杂质有关，同时高分子杂质还和药物的毒性反应有关[1]。随着现代生产工艺的不断改进和提高，半合成类抗生素的高分子杂质主要是内源性聚合物，所以对内源性聚合物的控制是当前抗生素药物高分子杂质控制的重点。国家食品药品监督管理局标准 WS1－（X－262）－2003Z 中对头孢地嗪聚合物未做规定，日本药典（JP-15）中“头孢地嗪钠”品种项下也未收载此检查项。参照《中国药典》2010年版各β-内酰胺类抗生素高分子聚合物的测定方法[2]，采用以Sephadex G-10为凝胶介质的凝胶色谱法（分子排阻色谱法），对本公司自制的头孢地嗪钠高分子聚合物进行检查，并进行了必要的方法学研究，确定其方法可行，可控制其生产及贮藏过程中产生的高分子杂质的量，为聚合物的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

Lab Alliance高效液相色谱仪。ANSTAR色谱数据工作站。色谱柱：Sephadex G-10凝胶色谱柱（填料Sephadex G-10，柱长30 cm，柱内径1.5 cm，大连依利特分析仪器有限公司）。

头孢地嗪对照品（中国药品生物制品检定所提供）。头孢地嗪钠原料（20090601；20090602；20090603）为本公司自制。上市对照样品（0905059）为山东鲁抗医药股份有限公司生产，蓝色葡聚糖2000（Pharmacia 17-0360-01分装）。磷酸氢二钠、磷酸二氢钠（为分析纯）。

2 方法与结果

2.1 实验溶液的制备 0.1 g/L蓝色葡聚糖2000溶液的制备：取蓝色葡聚糖2000约10mg，置100mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。对照溶液的制备：取头孢地嗪对照品约25mg，精密称定，置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密量取5mL置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备：取本品约0.2 g，精密称定，置10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 流动相的选择

2.2.1 流动相B的选择 分别以水和0.5%葡萄糖溶液为流动相，考察头孢地嗪钠和葡聚糖2000缔合峰的保留时间和塔板数以及托尾因子。实验结果表明，超纯水作流动相时，缔合峰对称性良好，可满足要求，故选择较简单的超纯水作流动相B。

2.2.2 流动相A pH值的选择 在碱性条件下，头孢菌素极易发生聚合反应，测得的高分子聚合物难以反映样品本身的实际含量。在接近中性的pH条件下选取3个水平进行验证，分别选用pH5.8、pH7.0和pH7.8的磷酸盐缓冲液为流动相进行测定。结果表明pH5.8时聚合物与主峰较近，分离不完全。pH7.0时高分子聚合物峰形和pH8.0没有差异，从柱子的耐受性和稳定性方面考虑，故优选pH7.0的磷酸盐缓冲液作为流动相A。

2.2.3 流动相A中盐浓度的选择 流动相的种类及其浓度可以改变主成分的色谱行为，反离子PO4-3明显地改变头孢菌素在Sephadex G-10中的色谱行为[4]。实验中分别利用0.1、0.05、0.01mol/L磷酸盐缓冲液作为流动相，以1.0mL/min的流速进行测定。结果表明0.1mol/L比0.05mol/L的好，聚合物峰和主峰间隔较长，有效分离，且聚合物的峰形基本对称。0.01mol/L时聚合物与头孢地嗪不能有效分离。故选用0.1mol/L磷酸盐缓冲液作为流动相A。

2.3 系统适用性实验 以流动相B为流动相，取0.1 g/L蓝色葡聚糖2000溶液及对照溶液各200μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图。另以流动相A为流动相，取0.1 g/L蓝色葡聚糖2000溶液及供试品溶液各200μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图（见图1～4）。各项参数见表1。

表1 系统适用性实验结果Tab.1 Theexperimental resultsof system ic applicability

1）在流动相A、B中，理论板数以蓝色葡聚糖2000峰计算分别为 1188和 925（＞700），拖尾因子分别为 1.136 和 0.833（＜2.0）；

2）在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值为1.03（在0.93～1.07之间）。在流动相A中，蓝色葡聚糖2000峰与供试品溶液中聚合物峰保留时间的比值为0.99（在0.93～1.07之间）。在流动相B中，蓝色葡聚糖2000峰的保留时间与对照溶液主峰保留时间的比值为0.99（在0.93～1.07之间）。

结果表明：上述各项参数均符合系统适用性实验的要求。

2.4 进样重复性实验 以流动相B为流动相，精密量取对照溶液200μL，连续进样5次，记录峰面积和保留时间，测定结果表明，连续进样5次，峰面积的相对均数标准偏差（RSD）为0.60%（＜5.0%），保留时间的RSD为0.50%，表明本系统进样重复性良好，符合系统适用性实验的要求。

2.5 缔合物峰线性实验 精密称取头孢地嗪对照品25.15mg，置50mL量瓶中，加水适量溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准贮备液，精密量取标准贮备液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0mL，分别置 25mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得5个浓度的系列标准工作液。以水为流动相，分别精密量取上述标准工作液各200μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以头孢地嗪溶液浓度（C）为横坐标，以缔合物峰的峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得线性方程：A=240 101 327.61C+212 542.59，相关系数r=0.999 97。结果表明，头孢地嗪对照溶液浓度在17.83～178.26 g/L范围内，溶液浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 高分子聚合物峰线性实验 精密称取头孢地嗪钠样品 100、200、300、400、500mg 和 50 g 分别置10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得6个浓度的工作液，立即精密量取各工作液200μL，以流动项B为流动相，注入液相色谱仪，记录色谱图，以样品浓度（C）为横坐标，以聚合物峰的峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得线性方程：A=40 112 647.51C－349 464.80，相关系数 r=0.999 6。实验表明，头孢地嗪样品浓度在5.237～50.041 g/L范围内，溶液浓度与聚合物峰面积呈良好的线性关系。

2.7 高分子聚合物测定重复性实验 取头孢地嗪钠样品，由同一分析人员平行制备6份供试品溶液，照上述测定法分别测定聚合物，记录色谱图，结果表明，由同一分析人员重复测定6次的相对标准偏差为2.56%，表明本方法测定高分子聚合物具有良好的重复性。

2.8 供试品溶液稳定性实验 取头孢地嗪钠供试品，制备供试品溶液，分别于1、2、3 h测定聚合物的含量。结果表明，在溶液状态下，高分子聚合物的形成是一个动态的过程，聚合物的含量会随时间延长而增大，故测定聚合物的含量时应在供试品溶液制备后立即测定。

2.9 供试品中头孢地嗪聚合物的测定 取3批供试品及上市对照样品，照上述测定法分别测定其头孢地嗪聚合物，结果见表2。

表2 头孢地嗪聚合物测定结果Tab.2 Polymers in Cefodizime determ ination result%

结果表明，结合文献报道以及本厂3批供试品头孢地嗪聚合物含量，暂定本品聚合物限度为0.5%，且本厂3批与上市产品无明显差异。

3 讨论

流动相A进行色谱系统选择时，分别选用pH5.8、pH7.0 和 pH7.8 的磷酸盐缓冲液和 0.1、0.05、0.01mol/L磷酸盐缓冲液为流动相对样品进行分离，结果0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）的分离聚合物的效果为佳。流动相B的色谱过程中，纯水和0.5%葡萄糖溶液没有区别。配好5 000mL流动相A，用已装好的葡聚糖凝胶柱子，先测系统实验，符合要求，再测对照线性，最后测供试品，由于测供试品时间长，1 d进3针样，连测2 d完成供试品的精密度试验，结果RSD=2.0%较好。

由于本品易吸湿，称完样立即将剩余的样品用胶布封好放在装有干燥剂的瓶里并保存在冰箱内（2～10℃）。这样才能保证同一瓶样品先后称两次测得的聚合物含量一致。用此方法测本品聚合物含量，条件不改变，即使先测对照品，隔6、7 d再测样品，供试品中聚合物峰保留时间与对照品峰保留时间比仍符合要求，且RSD较好。说明用方法测此本品聚合物准确、重现性较好。

本品属第3代注射用头孢菌素，其高分子聚合杂质引发过敏反应，控制其聚合物限量是极其重要的。根据本实验对本品制剂聚合物的检测数据其限量控制在小于0.7%是安全、合理的。

[1]金少鸿.β-内酰胺类抗生素过敏反应研究进展[J].中国新药杂志,1994，3（4）：38-41.

[2]国家药典委员会.中国药典·二部 [S].北京：中国医药出版社，2010:附录 35,附录H.

[3]胡昌勤.高效液相色谱法在抗生素质控分析中的应用（下册）[M].北京：北京气象出版社，2001：191－195.

[4]陈 星.凝胶色谱法测定头孢替唑钠的聚合物[J].海峡药学.2004，16（2）：45－46.

Determination of the polymers in Cefodizime Sodium for crude drugs

TAO Jun1,ZHANGWen-yan2,WANGNai-hao1
（1.HebeiAoxing Group PharmaceuticalDevelopment Limited Company,Xinle 050700,China;2.Health DepartmentofHealth Supervision Bureau ofHebeiProvince，Shijiazhuang 050051,China）

[Objective]To establish themethod for determination of the polymers in Cefodizime Sodium in crude Drugs.[Methods]The polymers analyzer was used with Sephadex G-10 column.The self control external standard method was used for quantitative analysis.[Results]The linear rangesof theassociationsin Cefodizimeand the polymersin Cefodizimewere17.83～178.26 g/Land 5.237～50.041 g/L.[Conclusion]Themethod is simple,accurate and sensitive.

Cefodizime Sodium;polymers;Gelfiltratrion chromatograpy;externalstandardmethod

R283.6

A

1672-1519(2011)03-0248-03

陶 君（1975－），男，工程师，主要从事新药工艺研究和分析检验研究。

2011-01-19）