甲硝唑氯化钠注射液中甲硝唑的含量测定(HPLC)

王丽波 任德娟 吴保深

(四平巨能药业有限公司 吉林 四平 136000)

甲硝唑氯化钠注射液属于抗厌氧菌、抗滴虫药[1]。治疗滴虫性阴道炎,细菌性阴道病[2]。采用高效液相色谱法对甲硝唑进行含量测定。同时分别按处方、制法制备阴性对照,结果如下。

1 仪器与试药

大连依利特UV-230+的高效液相色谱仪,P230泵,EC-2000色谱工作站。甲醇为一级色谱纯。甲硝唑氯化钠注射液是四平巨能药业有限公司生产的产品,批号是A1010008、A1010009、A1010010。甲硝唑对照品购于中国药品生物料制检定所,批号是100191-200305。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱是C18(250mm×4.6mm,5μm(Agi1entXDB);流动相:以甲醇-水(20∶80)为流动相;检测波长:320nm;流速:1.2mL/min。

2.2 系统适用性试验

按上述的色谱条件,取甲硝唑对照品适量,加流动相定量稀释制成每1mL中含甲硝唑0.25mg的溶液。精密量取10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,理论板数按甲硝唑峰计算不低于2000,实际塔板数是37129.38n/m,保留时间是7.53min。

2.3 线性关系测定

精密称取甲硝唑对照品适量,加0.9%氯化钠溶液溶解并定量稀释制成每1mL中含甲硝唑0.25mg的溶液,分别精密量取1、5、10、15、20μL注入液相色谱仪,分析测定峰面积,以进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,作图,得回归方程:Y=677.17x-111.23,相关系数R=0.9999,结果表明进样量与峰面积呈良好的线性关系。见线性关系(图1)。

2.4 精密度试验

取上述2.2项对照品溶液,按上述色谱条件测定,精密量取20μL注入液相色谱仪,连续进样6次,峰面积分别是8658.96、8637.00、8643.14、8617.24、8633.92、8625.02,RSD值为0.08%。

2.5 回收率试验:

供试品溶液的制备:取0.9%氯化钠溶液9份,3份为一组,分别添加甲硝唑对照品,添加量分别为80%、100%、120%,按含量测定法项下制备供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液20μL与供试品溶液20μL,注入色谱仪,按上述色谱条件进行测定,计算甲硝唑的含量,平均回收率是99.8%,RSD是0.33%。

2.6 稳定性试验

将同一供试品溶液在室温下放置,每间隔2h测试1次,在上述色谱条件下,测定峰面积,其RSD值为0.11%,结果表明样品在8h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一供试品5份进行重复性试验,按含量测定项下方法制备供试品溶液,计算甲硝唑含量,其RSD为0.09%。

2.8 专属性试验

2.8.1 强光照射试验 将供试品放在照度为(4500±500)1x的光照箱内放置10d,于第5天和第10天取样,按含量测定项下方法制备供试品溶液,照上述色谱条件测定峰面积,其RSD值为0.12%。

2.8.2 高温试验 将供试品在60℃条件下放置10d,于第5天和第10天取样,按含量测定项下方法制备供试品溶液,照上述色谱条件测定峰面积,其RSD值为0.10%。

图1

2.8.3 高湿试验 将供试品在25℃、相对湿度(90±5%)条件下放置10d,于第5天和第10天取样,按含量测定项下方法制备供试品溶液,照上述色谱条件测定峰面积,其RSD值为0.28%。

2.9 样品测定

按上述色谱条件,对三批样品进行含量测定,其RSD值分别为0.07%、0.12%、0.09%。

3 结语

通过以上的试验充分证明,甲硝唑氯化钠注射液可以采用上述的色谱条件对其甲硝唑的含量进行检测。测定法:精密量取本品适量,用流动相定量稀释制成每1mL中约含甲硝唑0.25mg的溶液,摇匀,精密量取10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图;另取甲硝唑对照品适量,精密称定,加流动相溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.25mg的溶液,同法测定。按外标法以峰面积计算,即得。

4 讨论

本试验的流动相流速是1.2mL/min,其保留时间为7.5min,当将其降为1.0mL/min时,其保留时间是9.3min,经过多次试验,确定流速是1.2mL/min时,其分离度和峰形比较好,且减少分析时间。

[1]国家药典委员会,中华人民共和国药典（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]中华人民共和国药典.临床用药须知·化学药和生物制品卷[M].北京：人民卫生出版社，2005：1025.