FHIT、survivin、PTEN在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

宣樟标 洪丽华

卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一，它的病死率居女性生殖系统恶性肿瘤首位。上皮性卵巢癌占全部卵巢原发性恶性肿瘤的85%～90%，恶性程度高、病情发展快、预后差，大部分上皮性卵巢癌发现于晚期，5年生存率仅为30%～40%，已成为严重威胁妇女健康和生命的主要肿瘤[1]。卵巢癌的发生是多基因、多步骤的复杂过程，癌基因的激活、抑癌基因的失活、细胞周期调节紊乱均可导致卵巢癌的发生发展。FHIT基因是一种与组氨酸三联体(HIT)蛋白具有高度同源性抑癌基因，主要通过参与细胞周期调控和凋亡发挥作用。生存素(survivin)是近年来发现的一种凋亡抑制基因，具有调节细胞分化、抑制细胞凋亡的功能;PTEN是一种具有磷酸酶活性的抑癌基因，在调控细胞生长和凋亡过程中发挥重要作用;研究采用免疫组织化学S-P法检测了脆性组氨酸三联体蛋白(FHIT)、survivin和PTEN在上皮性卵巢癌中的表达并分析三者在上皮性卵巢癌发生发展及预后中的作用，以期为上皮性卵巢癌的治疗、预后判定提供有价值的分子检测指标。

资料与方法

1.对象:2008年1月～2010年6月笔者医院住院妇科切除手术标本经病理科确诊为上皮性卵巢癌60例和正常上皮来源卵巢组织52例作为对照组。上皮性卵巢癌分类按国际妇产科联盟(FIGO，2000年)标准进行手术-病理分期:Ⅰ期23例、Ⅱ期19例、Ⅲ期11例、Ⅳ期7例;60例上皮性卵巢癌患者中，每例均有详细的临床资料、手术记录，所有病人均无远处转移，术前均未接受化疗和放疗。

2.方法:(1)免疫组织化学S-P法:FHIT、survivin、PTEN鼠抗人单克隆抗体，SP试剂盒，DAB显色剂均购自北京中杉公司。用已知阳性切片作阳性对照，用PBS液代替一抗做阴性对照，实验步骤参照试剂盒说明书。(2)阳性结果判断标准:survivin阳性染色主要定位于卵巢上皮细胞质，PTEN和FHIT阳性物质主要定位于细胞核，三者的阳性物质均呈棕黄色颗粒，阳性判定方法:于高倍镜下随机取10个不同视野，各记数100个细胞，结果进行半定量分析。对阳性细胞染色强度进行评分(无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分);再对阳性细胞所占百分比进行评分(阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分;)。PTEN和FHIT结果取两者评分之乘积，染色强度与阳性细胞百分比的乘积＞3分判为免疫阳性，乘积为0～3分判为阴性。survivin评分略改动，只记为阴性与阳性，乘积＜1分为阴性，其余均为阳性。

3.统计学分析:采用的SPSS 16.0软件分析，数据采用均数±标准差()表示，P＜0.05为差异有统计学意义。计量资料组间比较采用完全随机设计的t检验，组内比较采用配对t检验;计数资料采用率描述，率的比较采用χ2检验;相关分析用Pearson相关分析。

结 果

1.FHIT、survivin和PTEN蛋白在不同卵巢组织中的阳性表达结果:60例卵巢癌组织中FHIT蛋白阳性表达率为51.7%(31/60)与正常卵巢上皮组织之间阳性表达率84.6%(44/52)比较差异有统计学意义(χ2=13.671，P ＜0.01);survivin蛋白阳性表达率为73.3%(44/60)与正常卵巢上皮组织之间阳性表达率15.4%(8/52)比较差异有统计学意义(χ2=31.610，P＜0.01);PTEN蛋白异常表达率为53.3%(32/60)与正常卵巢上皮组织之间阳性表达率76.9%(40/52)比较差异有统计学意义(χ2=6.752，P＜0.01)(表1)。

表1 FHIT、survivin和PTEN在不同卵巢组织中的表达(n)

2.FHIT、survivin和PTEN蛋白在卵巢癌组织中表达及与卵巢癌患者临床病理特征的关系:随着卵巢癌临床分期增高、分化程度减低、有淋巴结转移survivin表达呈上升趋势，而FHIT、PTEN表达呈下降趋势(表2)(因为未、低分化统计没有意义，中、高分化统计也没有意义，故将其合并;临床病理分期情况也是一样)。

表2 卵巢癌组织中FHIT、survivin和PTEN的表达与临床病理特症的关系[n(%)]

3.FHIT蛋白表达与survivin和PTEN蛋白表达的关系:卵巢癌组织中FHIT的阳性表达与survivin呈负相关(r=-0.624，P ＜0.01)，与 PTEN 呈正相关(r=0.719，P ＜0.01)(表3)。

表3 FHIT与survivin、PTEN表达的相关性

讨 论

由于卵巢深居盆腔，卵巢癌早期症状没有特异性且不明显，卵巢上皮性癌发展迅速，易于转移和广泛播散，就诊时超过70%的患者处于Ⅲ/Ⅳ期，且多见有腹腔积液及盆腹腔广泛的种植转移，使之始终占据卵巢恶性肿瘤病死率的首位;而且近年来发病率呈上升趋势，因此研究上皮性卵巢癌发生的分子机制、寻找新的有效的治疗靶点具有重大的现实意义。目前认为抑癌基因FHIT、PTEN和癌基因survivin在卵巢上皮肿瘤中的表达异常，与卵巢上皮肿瘤的发生和发展具有重要作用，是卵巢癌发生的重要原因之一。

脆性三联组氨酸(FHIT)基因是Ohta M等[2]于1996年用差异显示分析探针和外显子捕获法确定的一个候选抑癌基因，它定位于人类染色体3p14.2。FHIT基因结构及表达的异常见于多种类型的肿瘤细胞株和原发瘤组织，卵巢上皮性肿瘤中FHIT基因或表达的异常已有少量研究。有研究发现，FHIT异常表达是卵巢恶性、交界性肿瘤的重要特征，正常FHIT表达丧失与卵巢癌的进展密切相关[3]。本实验结果显示，FHIT在上皮性卵巢癌中出现特异性表达丧失，丢失率为48.3%，远高于正常卵巢上皮组织的13.0%，与Hong FZ等[3]研究结果相符，这提示FHIT的特异性表达丧失可能与上皮性卵巢癌的发生发展有关。为进一步探讨FHIT蛋白在上皮性卵巢癌进展中的作用，我们还分析了FHIT的表达与临床病理参数间的关系。结果表明FHIT蛋白在组织分型组卵巢癌中阳性表达率差异无显著性，但与卵巢癌的病理分级、临床分期及有无淋巴结转移呈显著性相关，本实验结果提示FHIT蛋白是与上皮性卵巢癌的恶性进展相关的重要抑癌蛋白，其失表达预示肿瘤恶性程度高、病人预后不良。

survivin是新近发现的一种结构独特的哺乳类凋亡抑制蛋白(IAP)，广泛表达于人类各种肿瘤组织，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重作用，选择性地表达于一般的人类肿瘤，正常成人组织中不表达。survivin蛋白是一种位于细胞核-质之间的穿梭蛋白，在上皮性卵巢癌中表达上调，与细胞增生关系密切，对上皮性卵巢癌的发生发展中起重要作用，survivin的细胞核高表达与上皮性卵巢癌患者的预后不良密切相关[4]。本实验研究表明，survivin蛋白在上皮性卵巢癌组织中过表达，阳性表达率为73.3%，显著高于正常卵巢组织中的15.4%(P＜0.01)。Liguang Z等[5]检测114例上皮性卵巢癌组织中survivin的表达阳性率为73.0%，明显高于正常卵巢组织的19.0%，与我们的研究结果大致相符。临床病理分析显示，survivin蛋白表仅与临床分期、分化程度和有无淋巴结转移相关，而与组织分型无明显相关性，据此可推断，上皮性卵巢癌分期越晚、组织分化恶性度越低、有淋巴结转移时survivin的表达越强，检测survivin的表达水平对于判断上皮性卵巢癌的恶性程度及预测预后具有一定的临床参考价值。

PTEN基因是迄今发现的第一个具有特异性磷酸酶活性抑癌基因，在细胞生长发育、信号转导和凋亡中起重要作用，其突变失活与人类多种恶性肿瘤的发生密切相关。PTEN在不同肿瘤中如子宫内膜癌、卵巢癌和乳腺癌等经常变异调节。PTEN可通过多种途径抑制肿瘤细胞的浸润和转移，PTEN发挥作用的主要途径是脂质磷酸酶活性，每种导致PTEN蛋白丧失功能的突变同时都伴随有脂质磷酸酶活性的丧失。这表明脂质磷酸酶活性对于细胞生长起重要作用。PTEN蛋白通过使PIP3去磷酸化，拮抗了PKB/Akt信号系统，从而阻断了Akt及其下游激酶的活性，抑制了细胞分裂增殖，诱导细胞凋亡，从而发挥抑癌作用[6]。

目前关于PTEN与卵巢癌的确切关系，研究结果不一。Kurose等[7]认为卵巢上皮性癌中存在PTEN基因突变，但该基因突变在卵巢上皮性癌的发生发展中无重要作用。而Saito等[8]的研究结果提示PTEN蛋白表达缺失可能在卵巢癌的发病中是一个晚期事件。本研究发现，PTEN蛋白在正常卵巢组织和上皮性卵巢癌中的阳性表达率呈逐渐下降趋势(P＜0.01);推测PTEN蛋白表达可能是正常卵巢组织生长的必要因素之一，而PTEN蛋白表达下降或缺失可能使卵巢组织生长失控，最终导致癌变的发生。通过分析PTEN蛋白表达与上皮性卵巢癌临床病理指标的关系表明，PTEN在上皮性卵巢癌的失表达与临床病理分期、分化程度和有无淋巴转移有关，而与组织学分级无关，与Qiao等[9]研究相一致。由此可见，PTEN蛋白表达与否能够预示上皮性卵巢癌患者的预后。

FHIT和survivin均参与细胞周期调控和细胞凋亡，但生物学效应相反。本研究结果提示，survivin的表达在正常卵巢组织和上皮性卵巢癌中有逐渐上升的趋势，PTEN的表达有逐渐下降的趋势，FHIT和survivin表达呈负相关;而FHIT和PTEN表达呈正相关，在所检测的卵巢组织中 PTEN基因表达随着FHIT基因表达降低而下降。因此，推测FHIT可能通过协同PTEN转录而参与卵巢癌的发生及演进，它们可能协同在卵巢上皮性癌中发挥作用。因此，联合检测卵巢癌组织中FHIT、survivin和PTEN基因，将有望为卵巢癌的早期诊断、早期治疗及预后判断提供必要的理论依据，并制定合理的治疗方案。

1 丰有吉，沈铿.妇产科学.6版，北京:人民卫生出版社，2005:330-343

2 Ohta M，Inoue H，Cotticelli MG，et al.The human FHIT gene，spanning the chromosome 3P14.2fragile site and renal cell carcinoma associated translocation breakpoint，is abnormal in digestive tract cancer[J].Cell，1996，84;587-597

3 洪凡真，王波，李晓明，等.上皮性卵巢癌组织脆性组氨酸三联基因甲基化和3p14的等位基因丢失[J].中华病理学杂志，2005，34(5):257-261

4 Wang JJ，Zheng Y，Yang F，at al.Survivin small interfering RNA transfected with a microbubble and ultrasound exposure inducing apoptosis in ovarian carcinoma cells[J].Int J Gynecol Cancer，2010，20(4):500-506

5 Liguang Z，Peishu L，Hongluan M，et al.Survivin expression in ovarian cancer[J].Exp Oncol，2007，29(2):121-125

6 Downes CP，Perera N，Ross S，et al.Substrate specificity and acute regulation of the tumour suppressor phosphatase，PTEN[J].Biochem Soc Syrmp，2007，74(1):69-80

7 Kurose R，Zhou XP，Araki T，et al.Frequent loss of PTEN expression in linked to elevated phosphorylated Alt levels，but not associated with p27 and cyclin D1 expression，in primary epithelial ovarian carcinomas[J].Am J Patholo，2001，158(6):2097-2106

8 Saito M，Okanoto A，Kohno T et al.Allelic imbalance and mutations of the PTEN gene in ovarian cancer[J].Int J Cancer，2000，85:160-165

9 乔玉环，程佳，郭瑞霞，等.卵巢上皮性癌组织中磷酸化蛋白激酶B和PTEN蛋白的表达及其意义[J].中华妇产科杂志，2007，42(5):325-329