姜黄素对痴呆小鼠脑组织中MDA含量SOD活性的影响

高峰 张晶莹 宋昕恬 吴晓刚

作者单位：130062 吉林省卫生监测检验中心

老年性痴呆（AD）病因及发病机制迄今尚不清楚，更没有研究出根治AD病的药物，目前在临床上已经使用的治疗药物副作用大，疗效均不能令人满意［1］。姜黄素（curcumin）是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种酚性色素，由于其色泽稳定且毒性很低，目前已广泛应用于食品添加剂和染料中。已有研究发现姜黄素可降低氧化应激、抑制细胞凋亡、抑制NMDA受体介导的［Ca²⁺］内流，进而减轻兴奋性中毒的损伤从而起到细胞保护作用^［2,3］，我们通过观察姜黄素对痴呆小鼠脑组织中MDA含量、SOD活性的影响，初步探讨姜黄素对D-半乳糖所致小鼠脑组织的保护作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物与试剂 清洁级健康雄性ICR小鼠，体重18 g～22 g，购自吉林大学基础医学院动物实验中心，动物许可证号SCXK-（吉）-2007-0003，自由吃食和饮水，室温（20±2）℃。D-半乳糖购自上海蓝季科技发展有限公司（产品批号：070313）；羧甲基纤维素钠购自Sigma公司；姜黄素购自国药集团化学试剂有限公司（产品批号：F20050802）； MDA、SOD及考马斯亮蓝蛋白测试试剂盒均购自南京建成生物工程有限公司。

1.2 仪器与设备 722分光光度计为上海奥普勒仪器有限公司产品；离心机为北京医用离心机厂产品；组织匀浆机为江苏金坛金城国胜实验仪器厂产品；分析天平为北京塞多利斯天平公司产品。

1.3 分组与给药 将50只小鼠按体重随机分为5组，即正常对照组、模型组、预处理组、同时处理组、后处理组，每组10只。对照组：上午颈部皮下注射等量生理盐水，下午给予1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃1次；模型组：上午颈部皮下注射120 mg/kg D-半乳糖，下午给予1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃1次；预处理组：上午姜黄素用1%羧甲基纤维素钠配成混悬液，按200 mg/（kg·d）灌胃给药，下午颈部皮下注射120 mg/kg D-半乳糖；同时处理组：上午颈部皮下注射120 mg/kg D-半乳糖，同时姜黄素用1%羧甲基纤维素钠配成混悬液，按200 mg/（kg·d）灌胃给药；后处理组：上午颈部皮下注射120 mg/kg D-半乳糖，下午姜黄素用1%羧甲基纤维素钠配成混悬液，按200 mg/（kg·d）灌胃给药；连续45 d。

1.4 脑组织中MDA含量、SOD活性检测 处死小鼠，立即取全脑，用冰冷的生理盐水漂洗，除去血液，滤纸拭干，称取组织重量，加9倍量的匀浆液，用匀浆器匀浆（操作要在冰水浴中进行），制成10%匀浆液，3500 r/min离心10 min，取上清液，用考马斯亮蓝显色法测定脑组织蛋白含量。MDA含量测定：MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在532 nm处有最大吸收峰，测吸光度值。SOD测定：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（0），后者氧化胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。

1.5 统计分析 数据采用SPSS11.5 统计软件进行单因素方差分析。方差齐性检验部分，组间比较采用最小显著差异法检验（LSD法）。不齐时，各组间两两比较采用Tamhanes 方法。

2 结果

2.1 姜黄素对痴呆模型小鼠的大脑MDA水平和SOD活性的影响 模型组小鼠大脑MD水平与对照组比较显著增高（P＜0.05），SOD活性与对照组比较有明显降低（P＜0.05）。预处理组和同时处理组与模型组比较，脑组织中MDA水平明显增高（P＜0.05），且前者优于后者；给予姜黄素的各处理组脑组织中SOD活性明显升高与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 姜黄素对AD模型小鼠脑组织MDA水平、

SOD活性的影响（x±s，n10）

注：与模型组比较，^＊P＜0.05；与后处理组比较，^△P＜0.05

3 讨论

到目前为止，老年性痴呆（Alzheimers diaease，AD）病因及发病机制尚不清楚，众多研究者从不同角度提出了各种发病假说、胆碱功能低下假说、炎症或免疫假说、基因突变假说、淀粉样蛋白假说、氧化应激假说、凋亡假说等。AD是以近期记忆障碍为主要临床表现，以老年斑、神经元纤维缠结为主要病理改变的进行性神经衰退性疾病。Yankner等人［4］研究证明Aβ具有沉积和神经毒性作用，引起脑神经细胞退化和凋亡，并伴有学习认知障碍和记忆减退，是AD各种病理和临床表现的始发因素。D-半乳糖对学习记忆能力的影响在于其代谢产物半乳糖醇在体内不能被进一步代谢而堆积在细胞内，影响渗透压，导致细胞肿胀、代谢紊乱、体内活性氧水平升高，细胞膜脂质受损，出现脑神经元退行性变化，包括神经元数目减少，脑组织脂质过氧化增加，产生过量的MDA，使脑中的MDA水平增加，细胞的合成能力降低，使SOD活性显著下降。而表现学习记忆能力的下降。本次实验中AD模型小鼠脑组织中SOD活性降低、MDA含量增加，说明其脑组织内发生了过氧化反应，与文献结果相符^［5,6］。

姜黄素是从植物姜黄中提取的一种植物多酚，安全性很高，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗辐射等多种药理作用 其中抗脂质过氧化、抗自由基损伤作用已得到证实［7］。姜黄索可抑制自由基生成并加强其清除，抑制缺血再灌注大鼠脑组织MDA和亚硝酸盐含链的升高，同时姜黄素还可影响与氧化、抗氧化有关的酶类而发挥强大的抗氧化保护作用，保护生物大分子免遭自由基的毒性作用，从而保护机体组织器官［8］。研究表明，姜黄素能改善双侧颈总动脉永久性结扎所致的学习记忆减退，减少自由基的产生以及减少神经细胞死亡［9］。本实验结果显示，不同给药方式的姜黄素对D-半乳糖所致的学习记忆障碍有所改善作用，其作用机制可能是：可使脑组织脂褐质含量下降，使SOD活性增高，有效清除了过量的自由基，使脑组织免受伤害，从而提高学习记忆能力。同时，姜黄素除了抗氧化这一作用外，还有其他很多药理活性，包括酶、炎性介质、调节因子等，还可能涉及其他机制，尚需进一步研究。

参考文献

［1］ 肖增平，吉爱国.老年痴呆的发病机制及治疗的研究进展.中国老年学杂志，2008，28（1）：95-97.

［2］ Ahuja KD，Kunde DA，Ball MJ，et al.Efects of capsaicin，dihydrocapsaicin，and curcumin on copper-induced oxidation of human serum lipids.JAqric Foos Chem，2006,54（17）：6436-6439.

［3］ Kang HC，Nan JX，Park PH，et al.Curcumin inhibits colagen synthesisand hepatic stelatecel activation in vivo and in vitro.PharmPharnmol，2002,54（1）：119-126.

［4］ Yankner BA，Duff LK，Kirsctmer DA.Neurotrophlc and Neurtoxic Effects of Amyloid βProtein：Reversal by Tachykin in Neu-ropeptides.Science，1990，250：279-282.

［5］ 余资江，康朝胜，李宏伟.D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆行为改变及对海马神经发生的影响.中国老年学杂志，2009,29（7）：1672-1673.

［6］ Lu J，Zheng YL,Wu DM.Ursolic acid ameliorates cognition deficits and attenuates oxidative damage in the brain of senescent mice induced by D-galactose.Biochem Pharmacol，2007,74（7）：1078-1090.

［7］ Joe B，Vijaykunlar M，Lokesh BR.Biological properties of cureumin cellular and molecular mechanisms of active.Crit Rev Food SeiNutr，2004，44（2）：97-111.

［8］ Manikandan P，Sunlilra M，Aishwarya S，et al.Curcumin modulates free radical quenching in myocardial is chemia in rals.Int J Biochem Cell Biol，2004,36（10）：1967-1980.

［9］ 张书刚，胡梅，周其，等.姜黄素对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响.南京医科大学,2006,26（4）：246-248.