p16蛋白及Ki-67在所谓肺硬化性血管瘤细胞中的表达及意义

齐凤杰，赵树鹏

(1辽宁医学院，辽宁锦州121001;2辽宁医学院附属第一医院)

所谓肺硬化性血管瘤(PSH)是一种迄今未能确定其组织来源及性质的少见肺肿瘤。多年来PSH的组织发生及生物学行为一直是人们争论的焦点［1，2］。虽然大多数学者认为该肿瘤是“良性肿瘤”，有着较好的临床经过，但一些学者观察到部分肿瘤患者术后多年出现复发和转移［3，4］，因此对于该肿瘤的起源及生物学行为做进一步探讨具有重要意义。p16基因是比p53基因更重要的一种新型抑癌基因，其缺失突变参与肿瘤的形成，并与疾病的临床进展及预后密切相关［5］。Ki67抗原是目前检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标，它存在于细胞周期中除G0期以外的所有阶段。且Ki67有可能作为确定癌前人群中高危个体的生物学标志物［6］。本实验将探讨p16蛋白及Ki-67在PSH组织两种主要细胞中的表达及意义。

1 材料与方法

1.1 材料 收集辽宁医学院附属第一医院1998～2008年病理诊断为PSH的病变及病变旁正常肺组织蜡块标本30例、肺炎性假瘤10例。30例PSH中，女28例、男2例。其中12例无自觉症状，为体检时发现;18例有症状，分别表现为胸痛、咳嗽、痰中带血。X线胸片或胸部CT显示均为孤立性肿块，多位于肺周边，边缘光滑，呈圆形、卵圆形高密度影，无毛刺及分叶状改变。肿块位于右肺18例，左肺12例。未发现多发病灶及转移病例。

1.2 免疫组化 将蜡块标本制成4 μm连续切片，经脱蜡、脱苯、水化后进行HE和SP法免疫组化染色。以已知阳性组织为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗为阴性对照。每张切片随机选取5个高倍视野，每个高倍视野计数100个瘤细胞。p16及Ki-67的判断标准为:无着色及阳性细胞数≤5%为(-)，阳性细胞数＞5%为(+)。

2 结果

2.1 组织学观察结果PSH瘤组织主要由两种细胞组成，肺泡上皮细胞和上皮下间质中圆形或卵圆形核的多角形细胞，两种细胞构成多样结构:乳头状、实性区、海绵状血管瘤样区和硬化区。4种结构之间相互移形、混合存在。肿瘤细胞常发生透明变，泡沫细胞和淋巴细胞浸润，含铁血黄素沉积，并见钙化和骨化等现象。其中1例PSH瘤组织与周围正常组织界限不清，有向周围间质浸润倾向。但肿瘤细胞无明显异型，未见核分裂像。

2.2 免疫组化结果PSH组织中p16蛋白仅1例多角形细胞呈阳性表达，而立方细胞均无表达;Ki-67在5例PSH多角形细胞阳性表达，立方细胞无表达;肺炎性假瘤中的肺泡Ⅱ型上皮细胞p16蛋白及Ki-67均阴性表达。其中瘤组织向周围间质浸润的PSH中，p16及Ki-67在多角形细胞中均呈阳性表达，两种细胞中p16及Ki-67的阳性率无统计学意义。

2.3 随访结果 患者均采用电话或门诊随访方式，时间为患者手术日期至2010年5月31日，具体为28～148个月，目前均健在，无一例出现复发及转移现象。

3 讨论

PSH由于组织学形态的多样性及细胞成分的混杂，曾被认为是一种非肿瘤性增生性病变。直至1999年WHO才把PSH从非肿瘤性病变修改为真性肿瘤。PSH的组织起源曾有多种学说，目前多数学者认为PSH是一种来自原始呼吸道上皮的真性肿瘤，间质内的多角形细胞和衬覆在乳头和腔隙内表面的立方细胞是肿瘤的主要成分，一些学者应用激光捕获显微切割技术及克隆性分析技术证实了这两种细胞具有相同的起源［7］，但两种细胞的形态及免疫表型存在显著差异。Nakatani等［8］认为PSH组织中的多角形细胞与表面立方细胞上的差异是由于这两种细胞处于不同的分化阶段所致，表面立方细胞分化较成熟，所以上皮抗原表达强，而多角形细胞分化较差，处于过渡阶段，所以一些抗原表达较弱。

本研究发现，PSH组织中p16蛋白在多角形细胞中仅见1例阳性表达，Ki-67也仅在5例多角形细胞阳性表达，两种蛋白在表面立方细胞均呈阴性表达，提示PSH组织中多角形细胞增殖活性高，尽管两者无统计学意义。在瘤组织向周围间质浸润的1例PSH组织中，p16及Ki-67在多角形细胞中均呈阳性表达。结合本实验小组以前的研究结果［9］，PSH组织多角形细胞的p53基因突变率高于表面立方上皮细胞，提示多角形细胞可能比表面立方上皮细胞更具有侵袭潜能，这也有助于解释为什么在转移灶中出现的大部分是多角形细胞，而非表面立方上皮细胞。多角形细胞在PSH的生物学行为中可能起一定的决定作用。尽管随访的所有患者目前健在，无1例出现复发及转移现象，但本组病例随访时间短，研究的指标也较单一，PSH的生物学行为有待今后增加研究指标和病例数及延长随访时间以进一步探讨。

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［9］齐凤杰，张秀伟，张永兴，等.p53蛋白表达和基因突变在所谓肺硬化性血管瘤组织中的意义［J］.中国肺癌杂志，2006，9(2):147-151.