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反相高效液相色谱法测定磷酸川芎嗪片的含量

2011-03-06

中国药业 2011年3期
关键词:川芎嗪容量瓶磷酸

(浙江省丽水市人民医院,浙江 丽水 323000)

川芎嗪是从伞形科植物川芎中提取的一种生物碱单体,具有抑制自由基产生、清除氧自由基、抑制血小板聚集等药理活性,临床用于高血压、胰腺炎等的治疗[1]。在2005年版《中华人民共和国药典(二部)》中,磷酸川芎嗪片的含量测定方法为紫外分光光度法[2],笔者采用反相高效液相色谱法,取得较好效果,现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪;紫外检测器。磷酸川芎嗪对照品(中国药品生物制品检定所,批号为110817-200305);磷酸川芎嗪片(北京燕京制药公司,批号分别为070401,070608,080104);甲醇、乙腈均为色谱纯,水为二次重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:XDB-C18分析柱(150.0 mm×4.6 mm,6μm);流动相:甲醇-1%醋酸溶液(35∶65);流速:1.0 mL/min;检测波长:295 nm;柱温:室温;进样量:10 μL。在此色谱条件下,磷酸川芎嗪的理论板数为2 600,保留时间为6.82 min,供试品溶液色谱中川芎嗪峰与其他各峰分离度大于1.5,分离度良好,符合规定。磷酸川芎嗪对照品溶液、空白对照品溶液和供试品溶液的色谱见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液配制

精密称取磷酸川芎嗪对照品12.5 mg,置25 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得质量浓度为0.5 g/L的对照品贮备液;取对照品贮备液0.4 mL,置10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。取磷酸川芎嗪片20片,精密称定,研细,精密称取适量(相当于磷酸川芎嗪片50 mg),置100 mL容量瓶中,用甲醇适量超声处理30 min使溶解,并稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,取0.4 mL置10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。按处方组成量取除磷酸川芎嗪外的其余辅料,按工艺要求制备缺磷酸川芎嗪的空白对照样品,并按供试品溶液制备方法制成空白对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验:精密吸取对照品溶液、空白对照品溶液、供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图(图1)。结果供试品溶液色谱中,在与对照品溶液同一位置有相同的峰,空白对照品溶液在同一位置无峰出现,表明空白对照品对试验无干扰。

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 0.1,0.2,0.4,0.5,0.6,0.8 mL,分别置 10 mL 容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下分别进样10 μL测定峰面积。以峰面积(A)为纵坐标、对照品质量浓度(C)为横坐标进行线性回归,得回归方程 A=0.046 C+0.051 4,r=0.999 8(n=6)。结果表明,磷酸川芎嗪质量浓度在5~40 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL进样,重复5次。结果峰面积值的 RSD为1.12%(n=5),表明方法精密度良好。

重复性试验:精密称取同一批(批号为070401)样品5份,按样品测定方法操作。结果的 RSD为0.98%(n=5),表明方法重复性较好。

稳定性试验:取同一批(批号为070401)样品按供试品溶液制备方法制备溶液,分别于0,2,4,6,8 h时进样测定含量。结果的RSD为1.04%(n=5),表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:精密称取同一批(批号为070401)样品(含磷酸川芎嗪约45 mg)6份,置100 mL容量瓶中,稀释成20 μg/mL,取10 mL,分别加入 20 μg/mL 的磷酸川芎嗪对照品溶液 2.5,10,20 mL,测定含量,计算加样回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3个批号的磷酸川芎嗪片,按供试品溶液配制方法制备溶液,分别进样10 μL,测定峰面积,计算磷酸川芎嗪片标示量的百分含量,同时按2005年版《中国药典(二部)》方法测定,结果见表2。

表1 磷酸川芎嗪加样回收试验结果(n=6)

表2 样品含量测定结果

3 讨论

配制溶液时,加入适量甲醇并超声处理30 min,可加速磷酸川芎嗪片溶解完全。在选定的色谱条件下,参照文献[3-4],考察了甲醇和1%醋酸溶液的比例,当比例为35∶65时,磷酸川芎嗪片与溶剂杂质峰分离好、柱压低,对照品溶液与供试品溶液峰形好,理论板数超过所要求的1 500。用选定的波长295 nm测定,磷酸川芎嗪回收率、精密度和线性关系都令人满意,且无其他干扰峰。

药典收载的紫外分光光度法操作具有简单、省时、快捷的优点,而高效液相色谱法则可有效分离多组分、排除杂质或辅料干扰。比较了两种测定方法测定磷酸川芎嗪含量的准确性,3批样品的测定精密度相对偏差均小于1.1%,表明反相高效液相色谱法同样可作为磷酸川芎嗪片的含量测定方法。

[1]张廷伟.盐酸川芎嗪的药理作用及其临床应用[J].医药导报,2006,25(11):1 179-1 180.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社,2005:869.

[3]张 伟,林 凯.HPLC测定舒胸胶囊中盐酸川芎嗪的含量[J].中成药,2006,28(6):920-921.

[4]李 雅,郭建生.高效液相色谱法测定川麻颗粒中川芎嗪的含量[J].湖南中医药导报,2004,10(1):51-52.

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