早期宫颈癌组织中VEGF-A、VEGF-D的表达变化及意义

姚淑娟,崔秀娟,李 楠,张师前

(1滕州市中心人民医院,山东滕州 277500;2山东大学齐鲁医院)

淋巴结转移是宫颈癌转移的重要途径,且直接与其预后相关。研究表明,血管内皮生长因子(VEGF)-A、VEGF-D在肿瘤淋巴转移中发挥重要作用,但VEGF-A、VEGF-D在早期宫颈癌组织中的表达变化及其在宫颈癌淋巴转移中的作用研究较少。本研究通过观察宫颈癌组织中VEGF-A、VEGF-D及淋巴管密度(LVD)的表达变化,判断其在宫颈癌淋巴转移中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 滕州市中心人民医院 2008年1月～2010年 9月收治的宫颈癌患者 50例,年龄 26～70岁。本组均行手术治疗并留取宫颈癌组织,术前未行放化疗。临床分期(FIGO标准)Ⅰa期20例、Ⅰb期21例、Ⅱa期9例;组织学分型为鳞状细胞癌40、腺癌10例;组织学分级为 G1级 13例、G2级 16例、G3级 21例;有淋巴结转移者 21例、无淋巴结转移者 29例。留取 15例子宫肌瘤手术患者的正常宫颈组织,患者年龄 37～43岁。

1.2 VEGF-A、VEGF-D及LVD检测方法 采用免疫组化SP法。标本4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,5 μm厚连续切片;二甲苯常规脱蜡、水化;微波抗原热修复,3%过氧化氢—甲醇溶液10 min,阻断内源性过氧化物酶;10%山羊血清封闭非特异性抗体;滴加一抗,孵育60min;滴加抗兔生物素化二抗,孵育30min;滴加辣根过氧化物标记链亲和素,孵育 30 min;DAB显色,苏木素复染,中性树胶封片。PBS缓冲液代替一抗作阴性对照,已知乳腺癌切片作阳性对照。VEGF-A、VEGF-D阳性染色为细胞质呈现棕黄色颗粒。参照Jüttner等[1]报道的判断方法,无阳性细胞为阴性,阳性细胞0～5%为+、5%～50%为++、＞50%为+++,+、++、+++均为阳性。以D2-40标记淋巴管,LVD的测算参照Weidner等[2]报道的方法,低倍镜下寻找阳性管腔密集区域,高倍镜观察并计数,以 5个高倍镜视野阳性管腔的平均数表示LVD。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计量资料比较用t检验,计数资料比较用 χ2检验,相关性分析用Spearman等级相关分析法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组织中VEGF-A、VEGF-D的表达 宫颈癌组织中VEGF-A、VEGF-D的阳性表达率分别为66.0%(33/50)、56.0%(28/50),与正常宫颈组织的13.3%(2/15)、6.7%(1/15)相比,P均＜0.05。

2.2 VEGF-A、VEGF-D表达与宫颈癌临床病理参数的关系 见表1。由表1可知,VEGF-A、VEGF-D表达与宫颈癌患者淋巴结转移相关(P均＜0.05),与临床分期、组织学分级、组织学类型无关(P均＞0.05)。

2.3 宫颈癌组织中VEGF-A与VEGF-D表达的关系 宫颈癌组织中VEGF-A与VEGF-D的表达有显著的等级相关关系(P＜0.01),即随着VEGF-A表达的增强,VEGF-D的表达也增强,见表2。

2.4 宫颈癌组织中VEGF-A、VEGF-D的表达与LVD的关系 宫颈癌组织中VEGF-A阳性(33例)与阴性(17例)者的LVD分别为(16.39±3.76)条 /HP、(8.97±2.37)条/HP,两者相比,P＜0.05。宫颈癌组织中VEGF-D阳性(28例)与阴性(22例)者的LVD值分别为(15.31±4.26)条/HP、(7.97 ±2.67)条/HP,两者相比,P＜0.05。

表1 VEGF-A、VEGF-D表达与宫颈癌临床病理参数的关系(例)

表2 宫颈癌组织中VEGF-A与VEGF-D的表达关系(例)

3 讨论

VEGF-A、VEGF-D都是VEGF家族成员。VEGF-A是由肿瘤细胞及炎症浸润细胞所分泌[3]的一种强有力的促肿瘤生长因子。生理情况下, VEGF-A及其受体的表达水平均很低,但在血供丰富、代谢旺盛的组织及多种肿瘤和血管内皮细胞中均有高水平的表达。VEGF-A可通过树突状细胞上的VEGFR-1改变树突状细胞的功能,降低机体对肿瘤细胞的免疫力[3],还可以诱导肿瘤血管生成。VEGF-A在某种特定条件下也可介导淋巴管生成。VEGF-D是一种分泌型二聚体糖蛋白,它和VEGF-C被称为淋巴管生长因子。VEGF-D可诱导多种实体瘤内或瘤周的淋巴管生成和(或)淋巴管扩张,与恶性肿瘤的淋巴道转移密切相关。本研究结果显示,宫颈癌组织中VEGF-A、VEGF-D的表达显著高于正常子宫颈组织,提示二者的高表达可能与宫颈癌生物学行为有关。本研究结果还显示,VEGF-A、VEGF-D的表达与宫颈癌淋巴转移有关,且LVD与VEGF-A、VEGF-D的表达相关,提示宫颈癌组织中VEGF-A、VEGF-D的高表达可能与肿瘤的淋巴管生成及淋巴转移有关。

Achen等[4]研究表明,VEGF-D由癌细胞分泌,并可在血管内皮细胞中检测到,但内皮细胞的VEGF-D mRNA为阴性,所以推测VEGF-D可能是通过旁分泌模式促进了淋巴管的生成并介导了肿瘤的淋巴管扩散及转移。Amioka等[5]报道,VEGF-A可能是通过激活VEGF-C/VEGF-D/VEGFR-3信号系统以间接的方式来实现促肿瘤淋巴管生成这一生物学效应;也有人[6,7]分析可能是 VEGF-A使促血管内皮生长因子受体(VEGFR)-2高表达而发挥促淋巴管生成的作用。本研究结果显示,在宫颈癌组织中随着VEGF-A表达的增强,VEGF-D的表达也增强,提示VEGF-A参与肿瘤淋巴管生成可能与诱导VEGF-D的表达有关。

综上所述,VEGF-A、VEGF-D在宫颈癌组织中表达增强,可能在宫颈癌淋巴转移过程中发挥了重要作用。

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