不同处理方式对银杏叶活性成分的影响

秦俊哲， 高存秀

(陕西科技大学生命科学与工程学院， 陕西 西安 710021)

0 引 言

银杏树是现存种子植物中最古老的孑遗植物，集食用、药用、材用为一体，具有较高的综合利用价值.银杏叶中含有170多种生理活性物质，具有改善血管循环、控制周围血管失调、拮抗血小板活化因子等作用，银杏叶系列产品已被广泛开发应用[1].然而银杏叶中含有毒副成分—银杏酸，具有致过敏、致突变等不良反应，其安全性已引起高度重视，国际EGB质量标准规定银杏酸含量必须小于5 μg/g[2,3].

目前国内外针对银杏酸的脱除均在银杏叶提取物的基础上采用化学提纯方法[4]，未见直接采用银杏叶脱除银杏酸的报道.为此本实验探索了萎凋与干燥方式对银杏叶活性成分的影响，以期降低银杏酸含量，提高银杏叶产品的食用安全性.

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

材料：新鲜银杏叶，2010年6月采摘于陕西科技大学银杏园林银杏树枝干的中下部；大孔吸附树脂(D101-1,DA201,DM301,DS401)，安徽三星树脂有限公司.

试剂：对照品银杏酸(C15∶0,C17∶1,C13∶0,C15∶1,C17∶2)，芦丁：中国药品生物制品检定所.正己烷，乙醇，无水甲醇等均为分析纯.

仪器与设备：索氏提取仪，北京中西远大科技有限公司；高速万能粉碎机FW100型，天津市泰斯特仪器有限公司；电热鼓风干燥箱CS101-2A型，中国重庆银河试验仪器有限公司；紫外可见分光光度计SP-752(PC)型，上海光谱仪器有限公司；层析柱(20 mm×400 mm)，江苏省高邮市亚泰科教仪器厂.

1.2 实验方法

1.2.1 标准曲线的绘制[5]

准确称取一定量银杏酸用甲醇溶解定容至25 mL，分别吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL用无水甲醇定容至5 mL容量瓶，摇匀，在波长307 nm处测定吸光度.以银杏酸浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，线性回归得标准曲线方程：A=8.715C+0.040 7，R2=0.999 4,线性范围为：0.009～0.093 mg/mL.

准确称取一定标准品芦丁，用70%的乙醇定容至50 mL容量瓶溶解，移取0、1、2、3、4、5、6、7、8 mL加到10 mL容量瓶内，加1 mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀放置6 min,加入10%的硝酸铝溶液1 mL摇匀放置6 min,加入4%的氢氧化钠溶液4 mL,然后用70%的乙醇溶液稀释到刻度摇匀,静置15 min.在510 nm处测定吸光度，用最小二乘法将芦丁标准液浓度与所得吸光度值做一元线性回归分析，得标准曲线方程为A=11.54C-0.001 2,R2=0.999 7.

1.2.2 不同处理方式对银杏叶的预处理

采摘成熟度相同的新鲜银杏叶，流水洗净，称取等量银杏叶，铺成面积同等，在不同条件下萎凋一定时间，然后放置烘箱一定温度下热风烘干，粉碎过60目筛制成银杏粉，密封保存备用.

1.2.3 粗提取液的制备

准确称取1.00 g银杏粉，加入150 mL正己烷，85 ℃下索氏提取3 h，过滤，浓缩，定容，即得银杏酸粗提取液.

准确称取1.00 g银杏粉，加入80%乙醇，70 ℃下冷凝回流提取，过滤，冷却定容，得银杏黄酮提取液.

1.2.4 银杏酸粗提取液的纯化

大孔树脂DA201经预处理后，湿法装柱，以1～2 mL/min上柱，然后用90%乙醇以2 mL/min速度洗脱，收集洗脱液，计算银杏酸得率.

2 结果与讨论

2.1 光线对银杏叶活性成分的影响

由图1可见，在30 ℃下萎凋5 h后，银杏叶在阳光直射下银杏酸含量大幅度下降，银杏黄酮含量呈现缓慢下降趋势，可能原因是银杏酸具有抗胁迫作用，长时间高强度的阳光照射可使银杏酸的结构遭到破坏.

2.2 温度对银杏叶活性成分的影响

由图2可见，4种萎凋方式中银杏酸含量变化趋势相似，均是先降后升，在30 ℃时银杏酸含量达到最低 .由图3可以看出，银杏黄酮随着温度的增加，含量渐下降，在25～30 ℃中变化比较小，银杏黄酮得率比较高，可能原因是此条件下有利于银杏叶内部发生一系列生物氧化等反应，银杏酸与银杏黄酮分解或转化为其他物质,因此选择在30 ℃阳光下萎凋.

2.3 干燥温度对银杏叶活性成分的影响

由图4可见，新鲜银杏叶在不同温度下干燥时，银杏酸与银杏黄酮含量先上升后下降，银杏黄酮在70 ℃时含量达到最高，银杏酸含量很低.可能原因是温度较低时，银杏叶内的酶类没有立刻失活，仍然可进行生物氧化反应，降低银杏酸与银杏黄酮的含量；当温度逐渐升高时，酶逐渐失活，反应停止，银杏黄酮与银杏酸含量较高；温度过高时，银杏黄酮对高温具有一定抗性，含量变化不大，但是银杏酸的热稳定性较差，开始急剧下降.因此选择70 ℃干燥.

2.4 验证性实验

银杏叶在30 ℃阳光下萎凋5 h后，置于烘箱中于70 ℃热风干燥20 h，银杏酸得率为0.58%，银杏黄酮得率为1.62%，对照性实验新鲜银杏叶在60 ℃热风干燥，银杏酸得率为1.85%，银杏黄酮得率为1.78%，由此可见银杏黄酮含量下降了9%，银杏酸含量下降了69%.

3 结 论

新鲜银杏叶分别采用黑暗下、紫外灯下、玻璃下、阳光下4种方式并且在不同温度下萎凋5 h，然后在不同温度下干燥20 h,结果表明在30 ℃阳光下萎凋5 h，于70 ℃干燥时，银杏黄酮得率为1.62%，银杏酸得率为0.58%，银杏酸含量下降了69%，大大提高了银杏叶产品的使安全性.

参考文献

[1] 周建钟,赵琦君.银杏叶化学成分提取状况及其开发利用[J].食品科学,2009,(3)：35-37.

[2] 何静仁.银杏酸的变应原性及致过敏机制研究[D].武汉:华中农业大学硕士学位论文，2003.

[3] 袁云增.服用银杏茶从小剂量开始[N].健康报,2010-04-28.

[4] 刘 新,饶海丽.银杏叶制剂中毒性物质-银杏酸[J].内蒙古中医药,2008,(3)：45，46.

[5] 仰榴青，吴向阳.银杏酸的分光光度法测定[J].分析化学,2004，5(32)：661-664.