饲料中添加复方中草药对史氏鲟肝脏保护作用的研究

张盈娇 夏陈 曾晓丹 朱宇 王娟 钟振东

史氏鲟（Acipenser schrenscki Brandt）为鲟形目，鲟科，鲟属，是中国现存鲟鱼中最具有经济价值的优质珍稀鱼类，在黑龙江、乌苏里江、松花江等流域均有分布。但随着养鲟业集约化、规模化的发展，史氏鲟肝脏疾病逐渐增多，尤以脂肪肝和肝性脑病最为严重，影响其生长、肉质和抗病能力，严重时可造成继发传染性疾病的暴发，死亡率达50%以上。目前广泛采用抗生素类药物治疗这类疾病，抗生素起效快，但副作用较大，易产生抗药性。中药制剂由于具有毒副作用小、病原体不易产生抗药性、对环境友好等特点越来越受重视，在水产养殖生产上的应用日益广泛。本实验选用4种中草药复方制剂，以史氏鲟幼鱼为实验对象，测定并分析其生长指标、血液相关生化指标、肝脏组织病理变化，研究中草药复方制剂对史氏鲟肝脏的保护作用，为中草药防治史氏鲟肝脏疾病的实际应用提供参考。

1 材料和方法

1.1 实验鱼与饲养

实验鱼取自成都日兴特种水产实验中心当年繁殖的幼鱼,体重（11.66±0.56）g。实验在玻璃纤维养殖缸中进行，养殖缸规格为57 cm×50 cm×40 cm，水源为曝气后的自来水，保持微流水，供水量为0.5～1 L/min，水温（18±1）℃，溶解氧(8.74±1.54)mg/l，pH值（6.94±0.25）。实验分5组，编号1、2、3、4、5，分别为复方制剂1、2、3、4组和空白对照组。每组设3个平行养殖缸，每个养殖缸饲养15尾鱼。实验前将史氏鲟在养殖缸中驯养7 d。正式实验开始后，以5 g/kg基础饲料的比例添加各复方，第5组不添加。饲料日投喂率为鱼体重的2%，撒布投喂，每10 d调整一次投喂量,实验期50 d。

1.2 实验药品

基础饲料：鱼苗专用微粒子配合饲料，由山东升索渔用饲料研究中心提供（批号：20090312）；复方1由绞股蓝、水飞蓟等组成；复方2由黄芪、党参、当归、泽泻等组成；复方3由茵陈、大黄、郁金、连翘等组成；复方4由山药、黄芩等组成。所有中药材均购于成都荷花池中药材专业批发市场。

1.3 样品采集与指标测定

实验结束后，待鱼空腹24 h后称鱼体重。从每个养殖缸中随机抽取10尾鱼，每组取30尾，逐尾称体重，量体长后尾静脉取血，加肝素抗凝，离心10 min（4 000 r/min），收集上层血清样品冷藏待用，使用美国雷杜公司生产的RT-1904C自动生化分析仪进行血清生化指标的分析。并取出肝脏组织，进行肝细胞HE染色,Olympus IX70光学显微镜观察肝脏组织形态学变化。

增重率(%)=(末质量-初质量)/初质量×100；

相对生长率(%/d)=[(末质量-初质量)/初质量/实验天数]×100。

1.4 数据处理

实验结果采用平均数±标准差（X±SD）表示。数理统计分析应用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析（one-way ANOVA），如有显著差异（P＜0.05），则作Duncan's法多重比较分析。

2 结果

2.1 复方中草药对史氏鲟生长的影响（见表1）

从表1可知，50 d后各组实验鱼的末质量与实验前相比均有大幅度增加，1、3、4组的增重率显著高于第5组（P＜0.05），分别比第5组高50.99%、32.79%、10.82%；1、3组相对生长率显著高于第5组（P＜0.05），分别比第5组高39.32%和32.91%，2、4、5组间相对生长率无显著差异（P＞0.05）。

表1 复方中草药对史氏鲟幼鱼生长指标的影响（n=3；X±SD）

2.2 复方中草药对史氏鲟血清生化指标的影响（见表2）

由表2可知，1～3组的血清胆固醇(CHOL)含量显著低于第5组(P＜0.05)，1、3组的甘油三酯(TG)含量显著低于第5组(P＜0.05)，1组的CHOL和TG含量最低，分别为（1.73±0.16）mmol/l和（6.24±0.42）mmol/l，分别比5组低27.62%和25.00%，2、4组间及4、5组间CHOL含量均无显著差异(P＞0.05)，1、3组间，2、4、5组间TG含量无显著差异(P＞0.05)；1、3组间血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性无显著差异(P＞0.05)，分别为（91.86±5.64）mmol/l和（88.67±5.73）mmol/l，显著低于其他组(P＜0.05)，分别比5组降低了24.78%和27.39%，2、4组间及4、5组间ALT活性无显著差异(P＞0.05)；1～4组的天门冬氨酸转氨酶（AST）活性均显著低于第5组(P＜0.05)，其中3组的AST活性最低，比第5组低31.51%，第3组的AST活性显著低于其他组(P＜0.05)，2、4组间无显著差异(P＞0.05)；1、2、3组的乳酸脱氢酶(LDH-L)活性显著低于第5组(P＜0.05)，分别比第5组降低了11.61%、10.49%和8.73%，1、2组间及4、5组间无显著差异(P＞0.05)；1～3组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)均显著高于第5组(P＜0.05)，分别比第5组高32.76%、18.23%、33.74%,1、3组间无显著差异(P＞0.05)；1～4组的低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量均显著高于第5组(P＜0.05)，分别比第5组高18.77%、13.33%、23.70%和10.37%，其中第3组最高，1、2、4组间无显著差异(P＞0.05)。

表2 复方中草药对史氏鲟幼鱼血清生化指标和肝脏组织病理学的影响（n=3±SD）

表2 复方中草药对史氏鲟幼鱼血清生化指标和肝脏组织病理学的影响（n=3±SD）

项目胆固醇(mmol/l)甘油三酯(mmol/l)丙氨酸转氨酶(U/l)天门冬氨酸转氨酶(U/l)乳酸脱氢酶(U/l)高密度脂蛋白胆固醇(mmol/l)低密度脂蛋白胆固醇(mmol/l)肝细胞脂肪性病变评分1 1.73±0.16a 6.24±0.42a 91.86±5.64a 810.18±25.12a 1 553.55±35.63a 5.39±0.41a 4.81±0.50ab 0.67±0.62a 2 1.87±0.15ab 7.37±0.79b 103.66±9.10b 880.53±25.24b 1 573.18±36.68a 4.80±0.29b 4.59±0.27b 1.13±0.99ab组别3 1.79±0.15a 6.26±0.50a 88.67±5.73a 740.62±13.21c 1 604.14±26.67b 5.43±0.42a 5.01±0.17a 0.73±0.59a 4 2.19±0.39bc 7.87±0.95b 111.75±9.00bc 896.23±14.25b 1 778.46±33.42c 4.15±0.37c 4.47±0.28b 1.47±0.92bc 5 2.39±0.49c 8.32±1.15b 122.12±12.60c 1 081.34±34.47d 1 757.64±31.99c 4.06±0.23c 4.05±0.22c 2.07±0.96c

2.3 各实验组史氏鲟肝脏组织病理学变化（见图1）

取各实验组史氏鲟的肝组织，中性甲醛固定，石蜡切片HE染色，200倍光镜下每张切片选择5个染色均匀的高倍视野(200个细胞/视野)，观察肝脏组织病理学改变。肝小叶内脂肪沉着面积计分标准：按肝小叶内含脂滴细胞数/总细胞数之比值为0，计分0；比值＜1/3，计分1；比值为1/3～2/3，计分为2；比值＞2/3，计分3；比值≈1，计分4(结果见图1、表2)。

图1 各实验组史氏鲟HE染色肝组织病理改变（×200）

1、2、3组的脂肪性病变评分均显著低于第5组(P＜0.05)，其中第1、3组最低，两组间无显著差异(P＞0.05)。1、3组：组织结构、细胞排列较空白对照组有序致密，细胞内空泡（脂肪滴）少见，也未见炎性细胞聚集。2组：结构尚紧密，肝细胞间隙较大，细胞胞浆内散在空泡（脂肪滴），伴有少量汇管区炎性细胞。4组：肝组织结构相对松散，细胞间质成分减少，脂肪变性改变，可见较多大小空泡（脂肪滴），伴有汇管区炎性细胞浸润。5组：肝细胞排列较紊乱，肝小叶内含脂滴细胞数/总细胞数大于2/3，脂变肝细胞极度肿胀呈圆形，体积较正常明显增加，胞质内充满大量脂肪空泡，汇管区和小叶内可见较多炎性细胞浸润。

3 讨论

3.1 复方中草药对史氏鲟生长的影响

中草药可以保护养殖鱼的肝脏，从而促进其生长，一方面原因是中草药富含的皂苷、氨基酸、生物碱等物质可增强水产动物的肝脏功能，促进营养代谢；另一方面，中草药具有独特的味道,可能对水产动物有诱食作用。本研究中，饲料中添加复方制剂1、3能不同程度地促进史氏鲟生长，复方制剂2、4效果不显著。可能是因为复方制剂2、4中的某些药物与史氏鲟的味觉感受器不一致，或者是由于复方制剂2、4中用药或用量不妥，导致史氏鲟生长速度较其他药物组慢。

3.2 复方中草药对史氏鲟血清生化指标的影响

鱼血清中胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）的含量可间接地反映脂类在肝脏中的代谢情况。LDL-C是将CHOL从肝脏转运到血液的主要脂蛋白，而HDL-C是将肝脏外组织细胞中过剩的CHOL转运到肝脏的脂蛋白，从而维持肝脏和血液中的脂肪代谢平衡。当鱼肝脏发生肝脏病变时，脂蛋白的合成能力不足，肝细胞中的脂肪不能及时运出，就会造成脂肪在肝脏和血液中积聚，血清中CHOL、TG的含量升高。刘伟等的研究表明,CHOL、TG的升高可导致中华鲟幼鱼生长异常。本研究结果显示，饲料中添加复方1～3可促进史氏鲟血清中HDL-C和LDL-C的合成，使CHOL和TG的含量降低，加快血液和肝脏组织细胞中CHOL和TG的转运，减少肝脏中脂肪的积聚，防止肝脏的脂肪性病变。

另外，鱼血清中的丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH-L)等酶类主要分布于肝和肾等组织细胞中，当鱼的肝脏发生病变时，肝细胞内酶大量逸出,导致血清中酶类活性显著增强。已有的研究表明，在鱼饲料中添加中草药,鱼体血清中ALT和AST的浓度都不同程度地得到了降低，这对于保护肝脏有明显的作用。本研究中，与空白对照组比较，饲料中添加复方1～3可显著降低血清中上述三种酶的活性，说明复方1～3能够增强史氏鲟肝细胞的活性，保护肝脏，间接增强史氏鲟的抗病能力。

3.3 复方中草药对史氏鲟肝脏的组织形态的影响

本研究中，HE染色实验结果显示，空白对照组的肝细胞排列较紊乱、肿胀，肝小叶内脂肪含量较高，有较严重的炎性细胞浸润现象。实验结果表明，相对于空白对照组，复方1～3能使肝脏脂肪性病变和炎症减轻,说明复方1～3可促进史氏鲟肝脏的脂类代谢，提高肝细胞的再生修复功能。其中1、3组效果最佳，第4组效果不显著。

综上所述，相对于空白对照组，复方1、3对史氏鲟肝脏的保护作用最佳，复方2次之，复方4效果不显著。说明所选用的几种复方中药对史氏鲟生长指标、血液相关生化指标或肝脏组织具有一定的调节作用，其中有效成分和机理有待将来继续研究。复方中草药作为史氏鲟保护肝脏的药品，其成本低廉、简便易行，功效显著，在实际生产中有一定的开发应用价值。