菊叶中多糖的含量测定方法研究

卫 强， 孙晓燕

(安徽新华学院药学院，安徽合肥230088)

随着中草药资源的深入研究，对药材有效部位的开发已经呈现较好的应用前景，如益心酮片来源于山楂叶，七叶神安片来自三七叶［1］。国内外研究了菊花中总黄酮、黄酮苷、挥发油和微量元素等有效成分的提取分离及应用［2-7］，对菊叶的研究文献较少。菊叶是菊的有效应用部位，其化学成分与菊花相似。菊叶资源蕴藏量十分丰富，如贡菊和杭菊年产量在5 000吨左右［8］，采收菊花时丢弃菊叶造成很大的浪费。菊叶与菊花功效相似，可以治疗疮、痈疽、头风、目眩等病症［9］，菊叶提取液有抗菌、抗氧化、保护心肌缺血作用［10］。国内目前已经对菊花和茎、叶中总黄酮成分进行了提取工艺研究［11-12］，本文研究了菊叶中多糖的含量测定方法，以期为研究其有效成分提供基础。

1 仪器与试药

电热鼓风恒温干燥箱(厦门德仪设备有限公司);SHZD(Ⅲ)型防腐台式循环水真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);FA1004型电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);722型可见分光光度仪(天津市托普仪器有限公司);滁菊开发有限公司提供菊叶，安徽科技学院刘汉珍副教授鉴定为滁菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的茎上叶;葡萄糖(购于中国药品生物制品检定所，批号040310);所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2 实验部分

2.1 样品溶液的制备

菊叶阴干后，置于干燥箱中50℃干燥12 h，粉碎成细粉。精密称取菊叶粉末5 g，量取100 mL石油醚，索氏提取至无色;样品不变，依法再用乙醚、乙酸乙酯、95%乙醇、50%乙醇索氏提取各3 h，弃去提取液。取提取样品，挥干溶剂，一部分置于烧杯中，加入蒸馏水200 mL超声提取5 h，另一部分加入蒸馏水200 mL进行回流提取5 h。将上述提取液浓缩，应用Sevag法(正丁醇-氯仿-样品=1∶5∶25)除去蛋白质4次，再加入10%双氧水60℃脱色12 h，趁热抽滤，浓缩，滤液加入乙醇至醇浓度90%进行醇沉，放入冰箱中4℃静置24 h，抽滤，用少许95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚淋洗，低温烘干，即得。精密称取以上精制多糖50 mg，蒸馏水溶解，定容至50 mL，待测。

2.2 标准曲线的绘制

精密称取干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL量瓶中，加水至刻度，使其葡萄糖浓度为1 mg/mL。

将上述葡萄糖溶液稀释成100 μg/mL，精密吸取4、6、8、10、12 mL置25 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。分别吸取上述不同浓度溶液2 mL，另吸取蒸馏水2 mL作空白对照，移入20 mL具塞刻度试管，依次加入5%苯酚溶液1 mL、浓硫酸5 mL振摇，于100℃水浴中加热15 min，冷却30 min，定容至10 mL，再冷却至室温后置紫外分光光度仪下490 nm波长测定吸光度值。得到 A=30.85C－0.437 7，r=0.999 02，n=5。结果表明，在 8～24 μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2.3 菊叶中多糖的含量测定

精密吸取2.1项下样品溶液各2 mL，分别置于25 mL量瓶中，定容。按照2.2项下“加水至刻度……”起进行操作，测定吸光度值，计算菊叶中多糖的含量。结果见表1。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度实验 取浓度为100 μg/mL的葡萄糖标准溶液4 mL，按照2.2项下“加水至刻度……”起进行操作，测定吸光度值，按此方法平行做5个样，得RSD=1.34%。

表1 菊叶中多糖的含量(n=4)

2.4.2 稳定性实验 精密量取样品溶液2 mL，按2.2项下的方法测定吸光度，每隔30 min测1次，结果表明样品溶液在2 h显色稳定，RSD=0.78%。

2.4.3 重现性实验 精密称取同批菊叶样品5份各5 g，按2.1项下的方法(后续处理运用回流提取法)同时制取5份样品溶液，按2.2项下的方法测定吸光度，计算多糖的含量。结果表明，平均含量为7.56%，RSD=2.21%。

2.4.4 回收率实验 取样品溶液2 mL，置于25 mL量瓶中，吸取1 mL，加入浓度为0.1 mg/mL葡萄糖对照品溶液1 mL，按标准曲线法操作，平均回收率为96.32%，RSD=3.02%(n=5)。

3 讨论

3.1 比较了超声提取［13］和水浴回流提取两种方法，结果表明，水浴回流提取的多糖含量比超声提取高2.14%。超声提取后的多糖颜色呈浅棕色，水浴回流提取后多糖呈褐色。

3.2 本实验采用10%过氧化氢［14］脱色，脱色时间较长，其对多糖的影响有待进一步考察。

3.3 本实验初步建立了菊叶中多糖的含量测定方法，方法简便、可靠、稳定性好，为菊叶的研究开发提供了一定基础。

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