三七胶囊含量测定方法的改进

何选林， 王群英

(湖南省永州市药品检验所，湖南永州425100)

三七胶囊由三七细粉制成的胶囊，具有散瘀止血，消肿定痛，用于咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛，跌扑肿痛，原发性血小板减少性紫癜［1］。三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、Re、Rb1是三七的主要活性成分［2］。关于三七胶囊的含量测定只测定人参皂苷Rg1［3］。本试验采用高效液相色谱法同时测定三七胶囊中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量［4-8］，为该产品质量控制提供方法依据和参考。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱系统1525泵，2996紫外检测器(美国)，Empowers工作站。三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所，批号110745-200415)，人参皂苷Rg1对照品(中国药品生物制品检定所，批号110703-200726)，人参皂苷Re对照品(中国药品生物制品检定所，批号110754-200822)，人参皂苷Rb1对照品(中国药品生物制品检定所，批号110704-200921)，三七胶囊样品(规格0.3 g/粒，A 公司生产批号为090301、090501、100201、3 批产品);乙腈为色谱纯、重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Ultimate XB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-水为流动相，按表 1 进行梯度洗脱，检测波长为203 nm;柱温:室温，进样量:10 μL［9-11］。

在该色谱条件下，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1的保留时间分别为 32.8 min、36.5 min、37.2 min、61.5 min，理论塔板数分别为 1.2 ×105、1.2×105、1.5 ×105、5.0 ×105，人参皂苷 Rg1与 Re分离度为1.9，见图1。

表1 梯度洗脱程序Tab.1 Gradient elution

2.2 对照品溶液贮备液和对照品溶液的制备 精密称取三七皂苷R1;人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品分别为 5.32 mg、20.10 mg、5.42 mg、20.11 mg 置25 mL量瓶中，用甲醇适量振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品贮备液。再精密吸取贮备液5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品0.6 g，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超声30 min，放冷后，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 取溶剂作为阴性对照溶液。

2.5 线性关系考察 精密量取混合对照品贮备液1，2，3，5，10 mL 溶液分别置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，求回归方程，三七皂苷R1、人参皂苷 Rg1、Re、Rb1的回归方程和相关系数分别为:Y=165.8+259 122.1X，r=0.999 96;Y=1 804.7+1 441 035.6X，r=0.999 92;Y=147.1+218 035.3X，r=0.999 90;Y=685.16+842 120.8X，r=0.999 96，结果表明，当进样量为10 μL时，三七皂苷 R1、人参皂苷 Re在 20～200 μg/mL，人参皂苷 Rg1、Rb1在80 ～800 μg/mL 浓度范围内，呈良好的线性关系。

2.6 精密度考察 取2.2项下的溶液，按2.1项下色谱条件测定，记录连续5次的峰面积，三七皂苷R1:RSD=0.60%;人参皂苷Rg1:RSD=0.35%;人参皂苷 Re:RSD=0.95%;人参皂苷 Rb1:RSD=0.77%。

2.7 重复性试验 取2.11项下同一份样品测定5次，含三七皂苷R1为0.81%(RSD=1.06%);人参皂苷Rg1为3.27%(RSD=1.18%);人参皂苷 Re为1.07%(RSD=1.48%);人参皂苷Rb1为3.10%(RSD=0.80%);结果表明重复性好。

2.8 稳定性试验 取同份样品分别在0、4、8、12、16 h测定三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量，含三七皂苷R1为0.80%(RSD=1.10%);人参皂苷Rg1为3.29%(RSD=1.15%);人参皂苷Re为1.06%(RSD=1.38%);人参皂苷Rb1为3.15%(RSD=0.84%);结果表明稳定性好。

2.9 阴性对照试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按本文条件进样为10 μL，色谱图见图1，在本文条件下阴性对照无干扰。

图1 高效液相色谱Fig.1 HPLC chromatograms

2.10 回收率试验 精密取已知含量的同一批样品6份，分别精密加入三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品适量，按样品测定项下制备供回收用的溶液，依法测定即得回收率，结果见表2。

2.11 含量测定 分别吸取2.3项下供试品溶液与2.2项下对照品溶液各10 μL，照2.1项的色谱条件，记录色谱图见A、B，按外标法以峰面积计算，含量结果见表3。

表2 加样回收率测定结果Tab.2 Results of recovery test

表3 样品的含量测定结果(n=3)Tab.3 Result of sample determination(n=3)

3 讨论

3.1 三七胶囊由三七纯中药制成，但三七成分复杂未知，本实验选取的梯度系统，能够满足系统适应性并保证各成分分离的重现性，可对三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1同时准确定量，能有效地监控三七胶囊的内在质量。

3.2 在处理样品时，曾参考《中国药典》三七的含量测定的处理方法，但从实验结果发现，三七中4种成分的含量偏低，本试验样品直接用甲醇超声处理，样品中4种指标成分HPLC达到基线分离。

［1］新药转正标准第22册［S］.2002:646.

［2］王 雁，毕开顺.三七HPLC指纹图谱的建立［J］.中国中药杂志，2003，28(4):316-320.

［3］国家中成药标准汇编内科气血津液分册［S］.2002:19.

［4］中国药典［S］.一部.2010:11.

［5］冯 中，李晓燕，刘 波，等.HPLC测定不同厂家复方丹参片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量［J］.中成药，2009，31(1):71-74.

［6］柯金虎，孙玉琴，马 妮，等.HPLC法测定三七保肝胶囊中皂苷的含量［J］.中国科技杂志，2004，(3):40-42.

［7］粟晓黎，王宝琹.三七及复方丹参片含量测定方法的研究［J］.中成药，1990，12(3):10.

［8］邸 峰，孙毅坤，管庆霞，等.高效液相色谱法测定复方丹参片中三七皂甙R1的含量［J］.中国中药杂志，1996，21(11):672.

［9］何夏秋，杨 蕾，贺建华，等.用HPLC法测定三七及益尿通胶囊中人参皂苷Rg1的含量［J］.中国中药杂志，2001，26(1):37.

［10］王 强，江英桥，马世平，等.高效液相色谱法测定三七中三七皂苷 R1的含量［J］.中国中药杂志，2000，25(10):617.

［11］权丽辉，赵淑平，薛 岚，等.HPLC测定鑫森脑泰粉针剂中三七皂苷 R1的含量［J］.中草药，2001，32(6):502.