正交试验法优选消痹颗粒的提取工艺

高锦成 石敏娟 蒙麦侠 张 红 苗 彦 陕西省中医药研究院(西安 710003）

正交试验法优选消痹颗粒的提取工艺

高锦成 石敏娟 蒙麦侠 张 红 苗 彦△陕西省中医药研究院(西安 710003）

目的:优选消痹颗粒的水提取工艺。方法:以淫羊藿苷为指标,再配合干膏率,以煎煮时间、加水量、煎煮次数为考察因素,应用正交实验法筛选最佳的水提工艺条件。结果:最佳提取工艺为药材加水煎煮2次,第一次加水8倍量,煎煮2h,第二加水6倍量,煎煮2h。所得浸膏得率和淫羊藿苷含量均较高。

消痹颗粒由淫羊藿、威灵仙等十余味中药材组成,主要用于治疗肝肾两虚型痹证。生地、熟地、淫羊藿等八味药材作为水提工艺的主要药物,淫羊藿苷作为淫羊藿的主要代表成分。为了有效的控制该工艺,我们通过正交工艺设计,对消痹颗粒水提工艺采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量,结合干膏量两个指标,确定最佳工艺。

1仪器与试药1.1 试药 淫羊藿等八味药材购于陕西省药材公司;淫羊藿苷购于中国药品生物制品鉴定所(批号0774-9904）;甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯;水为蒸馏水。

1.2 仪器 岛津LC-2010高效液相色谱仪;BP211D型电子分析天平(德国塞多利斯天平有限公司）d=0.01mg;LXJ-Ⅱ型台式离心机(南京第一医疗器械厂）;DK-98-ⅡA型水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司）。

2方法与结果2.1 水提工艺正交设计 通过多因素的正交试验,优选水提取工艺的各项参数。以水提干浸膏得率及淫羊藿苷提取量作为指标,以选择最佳的工艺参数。影响水提取的主要因素有加水量、提取时间和提取次数,故我们选择正交方式进行设计。为了系统考察水提取的工艺参数,我们设计的因素与水平。见表1。

表1 煎煮工艺条件正交试验因素水平表

三因素三水平,不考虑交互作用,故选择L9(34）正交表进行正交试验。按比例称取1/5处方量,称取生地、熟地、制附片、川断、桑寄生、淫羊藿、补骨脂各20g,威灵仙30g。共计170g,平行9份,随机取样编为1～9个试验号。按正交表L9(34）中每个试验号要求进行,合并提取液,滤过,滤液供以下试验备用。

2.2 出膏量的测定 干浸膏得率测定:精密量取离心滤过后的滤液100mL,置已干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,于105℃干燥3h,置干燥器中冷却0.5h,迅速称重,按下式计算干浸膏得率,结果见表2。

2.3 淫羊藿苷的测定[1]色谱条件LC-2010高效液相色谱仪,色谱柱:C18柱(250mm×4.6mm,5μm）;检测波长:λ=270nm,以乙腈-水(30:70）为流动相。柱温40℃。流速:1.0mL。理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。

2.3.1 对照品的制备:精密称取对照品3.60mg,置25mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(制成每1mL含淫羊藿苷0.144mg的溶液）。

2.3.2 样品供试液的制备:按淫羊藿药材0.2g量计,精密量取离心(3000转/min）滤过后的滤液适量,置蒸发皿中,水浴蒸干,残渣用稀乙醇20mL转移至三角瓶中,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率20kHz）1h,放冷,称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm）滤过,取续滤液,即得。

2.3.3 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算含量,结果见表2。

2.4 结果

表2 生地、附片、淫羊藿等水提正交试验

将正交试验结果方差分析,结果见表3、表4。

表3 浸膏得率方差分析

表4 淫羊藿苷含量方差分析

F0.1(2.2）=9.00;F0.05(2.2）=19.00;F0.01(2.2）=99

以干浸膏得率为指标,表2中极差R值大小显示,各因素作用主次为C＞A＞B,方差分析因素C有显著影响,因素A、B影响不显著,最佳工艺是A3B3C3;以淫羊藿苷含量为指标,各因素作用主次为C＞B＞A,方差分析结果表明,因素C有较大影响,且三因素中K2、K3均很接近,表明A2B2C2工艺组淫羊藿苷已经可以提取完全,为节省工时,降低能耗,确定最佳工艺组合为A2B2C2。即药材加水煎煮2次,第一次加水8倍量,煎煮2h,第二加水6倍量,煎煮2h。

2.5 验证试验 由于优选的工艺不在试验的9次试验中,故对其进行了验证试验,用同批药材,按处方量1/20量取药材,平行3份按照A2B2C2进行试验,测定干膏率和淫羊藿苷含量,见表5。

表5 验证试验结果

由上表可见,以干浸膏得率和淫羊藿苷得量为评价指标,数据较稳定,且干膏得率和含量均较高。故确定A2B2C2为最佳工艺,即药材加水煎煮2次,第一次加水8倍量,煎煮2h,第二加水6倍量,煎煮2h。

3讨 论本实验研究淫羊藿等八味药材的水提工艺,因其主要有效成分为淫羊藿苷,故本实验以干膏率及淫羊藿苷为考察指标,通过正交试验结合方差分析进行优选,结果表明,水提影响干膏得率和淫羊藿苷得率的主要因素均是煎煮次数。为节省工时,降低能耗,确定最佳工艺组合为A2B2C3。即药材加水煎煮2次,第一次加水8倍量,煎煮2h,第二加水6倍量,煎煮2h。

[1] 国家药典委员会.中国药典[M].北京:化学工业出版社,2005:229.

@消痹颗粒/提取工艺

R541.61

A

1000-7369 (2011）01-0090-03

△西安碑林药业(西安710048）

(收稿2010-08-09;修回2010-09-15）