清清爽牌湿巾的杀菌效果

张春梅，陈羽，丁利伟，齐秀兰*

(1.沈阳鑫卓越药械进出口有限公司，辽宁沈阳110021;2.沈阳药科大学高等职业技术学院，辽宁沈阳110026)

近年来，便捷、清洁消毒的一次性湿巾已成为人们日常生活的必需品，用途也日趋多样化，逐渐成为卫生纸品市场的新宠［1］。湿巾产品从用途上分为普通湿巾和消毒湿巾。普通湿巾主要用于清洁皮肤，使用时清洁、保湿、滋润一次性完成;消毒湿巾主要有2种:一种用于擦伤、割伤和划伤等小伤口及周围皮肤的清洁、消毒，所浸液体主要成分为苯扎氯铵等，清洁、杀菌一次性完成;另一种具有广谱杀菌作用，主要用于皮肤清洁、润肤、消毒和杀菌，也可用于日常用品和卫生洁具等的消毒，能迅速有效杀灭金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、淋病奈瑟菌和铜绿假单胞菌等，所浸液体为纯净水，天然杀菌成分、芦荟、羊毛脂和丙二醇等［2］。鉴于有些消毒湿巾存在作用单一，易质变，长霉菌，存放时间短，效果不稳定等问题［3］，本文对清清爽牌湿巾的杀菌消毒效果进行了实验室研究，为生活中消毒湿巾的合理使用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus ATCC 6538)、大肠埃希菌(Escherichia coli 8099)、白假丝酵母菌(Canidia albicans ATCC 10231)，由沈阳药科大学微生物学与细胞生物学教研室提供。

1.1.2 培养基营养琼脂培养基(g/L):蛋白胨10.0，牛肉膏5.0，氯化钠5.0，琼脂粉14.0;沙堡琼脂培养基(g/L):葡萄糖40.0，蛋白胨10.0，琼脂粉14.0。

1.1.3 缓冲液生理盐水(g/L):氯化钠9.0;磷酸盐缓冲液(g/L):无水磷酸氢二钠2.83，磷酸二氢钾1.36，pH 7.2;中和剂(g/L):硫代硫酸钠5.0，溶解于磷酸盐缓冲液中。

1.2 方法

1.2.1 湿巾中微生物总数检查在无菌条件下，称取10 g清清爽牌湿巾，剪碎后加入200 mL生理盐水中，充分混匀。分别取1 mL稀释液涂布于营养琼脂平板和沙堡平板，恒温培养箱内培养，计算样品中细菌和真菌的菌落总数。湿巾中微生物总数检查的判定标准:细菌菌落总数≤20 cfu/g;真菌不得检出。

1.2.2 菌悬液的制备取5.0 mL磷酸盐缓冲液加入已经活化3代的新鲜斜面培养物试管内，反复吹吸，洗下菌苔。用移液管将洗液移至另一无菌试管中，用涡旋混合器振荡20 s，使菌体悬浮均匀。用磷酸盐缓冲液稀释至所需浓度。浓度要求:用100 μL滴于对照样片上，回收菌数为1×104～9×104cfu/片。

1.2.3 中和剂的考察试验设平行8组试验，以金黄色葡萄球菌为试验菌，按载体定量杀菌试验程序进行［4］。a.染菌样片+5 mL磷酸盐缓冲液，b.染菌样片+5 mL中和剂，c.染菌对照片+5 mL中和剂，d.染菌样片+5 mL中和剂+染菌对照片，e.染菌对照片+5 mL磷酸盐缓冲液，f.磷酸盐缓冲液，g.中和剂，h.培养基。中和剂及其浓度的判定标准:a组无试验菌或仅有极少数试验菌菌落生长;b组有较a组为多，但较c、d、e组为少的试验菌落生长;c、d、e组有相似量试验菌生长，并在1×104～9×104cfu/片之间，且组间菌落数误差率不应超过15%;f、g、h组无菌生长。由此可判定所选中和剂及其浓度适宜。

1.2.4 载体定量杀菌试验取100 μL菌悬液分别均匀滴加在被试样片(2.0 cm×3.0 cm)和对照样片(与被试样片同质材料，同等大小，但不含抗菌材料，且经灭菌处理)上，作用至预定时间。用无菌镊子分别将样片投入含5 mL中和剂溶液的试管内，充分混匀，中和作用10 min。作适当稀释，取该液或其稀释液涂布营养琼脂平板，置于37℃恒温培养箱中培养48 h，白假丝酵母菌涂布沙堡琼脂平板上，置于28℃恒温培养箱中培养72 h，作活菌计数，计算杀菌率。

1.2.5 模拟现场试验将一只手用灭过菌的棉拭涂抹采样，置于中和剂中振荡80次，作活菌培养计数，视为消毒前。另一只手用清清爽牌湿巾擦拭数次，待1 min后用灭过菌的棉拭涂抹采样，放入中和剂中振荡80次，作活菌培养计数，视为消毒后。观察消毒前后的杀菌效果。

1.2.6 稳定性试验将清清爽牌湿巾原包装置于37℃恒温培养箱中存放90 d，之后进行载体定量杀菌试验，计算杀菌率，考察该湿巾的稳定性是否符合GB 15979-2002的规定。

2 结果

2.1 湿巾中微生物总数检查

称取10 g清清爽牌湿巾，剪碎后加入到200 mL生理盐水中，将1 mL稀释液分别涂布于营养琼脂平板和沙堡平板上，恒温培养箱内培养，没有检测到细菌和真菌，符合湿巾中微生物总数检查的判定标准。

2.2 中和剂的考察试验

以金黄色葡萄球菌为试验菌，按载体定量杀菌试验程序对中和剂进行考察。经检测，用质量浓度为0.5 g/L的硫代硫酸钠可有效中和清清爽牌湿巾的杀菌作用，中和剂及中和产物对试验菌及培养基无影响(见表1)。

表1 湿巾的中和剂试验Table 1 The result of neutralizer test for wet tissue

2.3 载体定量杀菌试验

取100 μL菌悬液分别均匀滴加在被试样片和对照样片上，作用2 min，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌的杀菌率分别为99.98%、99.76%和99.20%;作用5 min，对3种试验菌的杀菌率分别为100%、99.97%和99.99%，杀菌效果显著(见表2)。

表2 湿巾的载体定量杀菌试验Table 2 The result of carrier quantitative germicidal test for wet tissue

2.4 模拟现场试验

将一只手用清清爽牌湿巾擦拭数次，待1 min后用灭过菌的棉拭涂抹采样，作活菌培养计数，与未经湿巾擦拭的手的活菌计数结果进行对照。试验结果表明:清清爽牌湿巾对手的杀菌率达到99.99%，起到了明显地杀菌消毒效果。

2.5 湿巾稳定性试验

表3 湿巾放置90 d后载体定量杀菌试验Table 3 The result of carrier quantitative germicidal test for wet tissue after 90 days

将清清爽牌湿巾原包装置于37℃恒温培养箱中存放90 d，经观察无霉斑，无气味、颜色等异常变化。取100 μL菌悬液分别均匀滴加在被试样片和对照样片上，作用2 min，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌的杀菌率分别为99.86%、99.72%和99.13%;作用5 min，对3种试验菌的杀菌率分别为100%、99.91%和99.40%(见表3)，符合GB 15979-2002的规定。

3 结论

采用载体定量杀菌试验，对清清爽牌湿巾的杀菌消毒效果进行了实验室研究。研究结果表明:清清爽牌湿巾对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌作用2 min，杀菌率分别达到99.98%、99.76%和99.20%;作用5 min，杀菌率分别为100%、99.97%和99.99%。之后进行了模拟现场试验，清清爽牌湿巾对手自然菌杀菌率达到99.99%，具有杀菌速度快、无刺激性气味、手感舒适等特点，适合用于家居生活消毒。将清清爽牌湿巾原包装置于37℃恒温培养箱中存放90 d，从实验结果看，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白假丝酵母菌的杀菌效果虽然符合GB 15979-2002的规定，但杀菌率还是略有下降，为了保证湿巾最佳杀菌效果，建议产品在有效期内低温保存。

［1］ 梁明生.小心一次性湿巾“病从口入”［J］.上海标准化，2008，12:22-24.

［2］ 刘娜，徐亚民，魏天柱.湿巾产品的应用及质量概况［J］.中国化纤，2008，2:68-69.

［3］ 丘静，张静涛.复方氯己定消毒湿巾杀菌效果实验室观察［J］.中国消毒学杂志，2004，21(2):135-137.

［4］ 丘静，张静涛，苏丽.多功能消毒湿巾杀菌效果试验观察［J］.中国公共卫生，2003，19(11):1345-1346.