密鳞牡蛎的人工繁育*

陈 璐,李 琪,王庆志,孔令锋,郑小东

(中国海洋大学水产学院,山东青岛266003)

密鳞牡蛎的人工繁育*

陈 璐,李 琪**,王庆志,孔令锋,郑小东

(中国海洋大学水产学院,山东青岛266003)

研究密鳞牡蛎(Ostrea denselamellosa)的亲体培育和苗种培育技术;研究盐度、温度、密度和饵料等因子对浮游幼虫生长及存活的影响,首次建立密鳞牡蛎的人工繁育技术。结果表明,排出体外的D形幼体在水温23～25℃,经约28 d出现眼点,进入附着变态阶段;幼虫培育的最佳盐度为30;在24～32℃,幼虫生长速度与温度呈正比,成活率与温度成反比;在培育密度为1,2,3和4/mL 4组中,1/mL组生长最快,但各组间存活率无显著差异;湛江等鞭金藻,50%湛江等鞭金藻+50%扁藻,50%湛江等鞭金藻+50%小球藻和小球藻4种饵料投喂组中,50%湛江等鞭金藻+50%扁藻组的生长显著高于其他组;不同附着基的附苗率依次为:扇贝壳>波纹板>筛绢>网片>聚乙烯薄膜。

密鳞牡蛎;人工繁育;环境因子;附着基

密鳞牡蛎(Ostrea denselamellosaLischke),隶属于瓣鳃纲(Lanellibranchia),异柱目(Anisomyaria),牡蛎科(Ostreidae),牡蛎属(Ostrea),一般栖息于潮下带至水深30 m以内的盐度较高且较稳定的浅海,在我国、朝鲜半岛、日本沿海均有分布[1]。密鳞牡蛎软体部不但富含牛磺酸、高度不饱和脂肪酸,还具有低脂肪、低胆固醇及无机盐、维生素含量高的特点,营养价值较为丰富[3]。但由于密鳞牡蛎在我国沿海分布分散,资源量少等原因,其经济价值尚未被开发利用[4]。

近年来,由于海洋开发以及海区自然环境的不断恶化,密鳞牡蛎的资源量日趋减少。因此,开展密鳞牡蛎的人工繁殖技术研究,对于保护密鳞牡蛎自然资源,开发新的养殖品种具有重要意义。与牡蛎属的其他牡蛎一样,密鳞牡蛎为幼生型种类。性成熟时,密鳞牡蛎雌性个体将成熟的卵子排放到出水腔中,依靠排水孔附近的外套膜和鳃肌的作用,将卵子压入鳃腔中,并在这里受精,胚胎发育成D形幼虫后离开母体,在海水中经过一个浮游阶段,然后附着变态成为稚贝。尽管密鳞牡蛎在我国分布广泛,然而关于其苗种培育的研究迄今未有报道。本文研究盐度、温度、密度和饵料等环境因子对密鳞牡蛎浮游幼体的生长与存活以及不同附着基对幼体附着变态的的影响,旨在为建立密鳞牡蛎人工繁育技术提供基础材料。

1 材料与方法

1.1 亲贝蓄养

人工育苗试验在山东省文登市水产综合育苗实验基地进行。所用种贝为2009年5月采捕于青岛胶南水域的野生个体(平均壳长(11.2±7.3)cm,壳宽(4.1±2.1)cm,体质量(292.1±76.9)g)。将亲贝置于室内人工暂养,暂养期间水温控制在20～23℃;饵料以湛江等鞭金藻(Isochrysis zhanjiangensis)为主,兼投小球藻(Chlorella vulgaris)和扁藻(Platymonas subcordif ormis)。

1.2 幼虫的收集、培育与采苗

亲贝暂养期间,每日观察密鳞牡蛎鳃腔中是否有受精卵。由于密鳞牡蛎干露后,双壳略微张开,肉眼可以直接观察其鳃腔中是否含有受精卵。将鳃腔中含有受精卵的亲贝移于孵化池中待产,直至D形幼虫排放完毕,再将亲贝取出。

D形幼虫收集完毕后,将其移至15 m3水池中蓄养,密度2～3/mL。培育用水为二级砂滤海水并经350目筛绢过滤,盐度30,水温24～25℃。D形幼虫时期日换水1/3,至后期壳顶幼虫日换水1/2以上,每10 d倒池一次。密鳞牡蛎D形幼虫的开口饵料为湛江叉鞭金藻,壳顶幼虫之前只投喂金藻,密度为5 000/mL;壳顶幼虫时期开始加喂适量扁藻,金藻量调整为3×104/mL,眼点出现前加至5×104/mL。每日观察、测量幼虫的生长和摄食情况。

当幼虫生长至约350μm×320μm时,开始出现眼点和足。眼点幼虫比例达20%时开始投放采苗器。采苗器采用栉孔扇贝贝壳,用1∶10的盐酸溶液浸泡以除去表面污物,并用清水冲洗浸泡备用。125～150片扇贝壳串成一吊,垂悬于培育池中供幼虫附着。每片扇贝壳附着15～20个牡蛎苗后取出,移另池培养4～7 d后出池。幼虫附着期间,加大充气量和投饵量。

1.3 环境因子对幼虫生长与存活的影响

采用5 L容器,分别研究温度、盐度、密度及饵料对浮游幼虫的生长和存活的影响。温度实验的温度梯度为24、26、29和32℃,盐度为30;盐度实验的盐度梯度为18、22、26、30,温度为24℃;密度实验的密度梯度为1、2、3、4/mL,温度为24℃,盐度为30;饵料实验的实验组为:1)湛江等鞭金藻(107/mL);2)50%金藻(0.5×107/mL)+50%扁藻(106/mL);3)50%金藻(0.5×107/mL)+50%小球藻(5×107/mL);4)小球藻(5×107/mL)。温度、盐度和饵料实验的幼虫初始密度均为1/mL。各实验梯度均设3个重复,每2 d取样1次,测定生长和密度,连续观测13 d至幼虫开始附着为止。

1.4 附着基对幼虫附着变态的影响

采用10 L容器,眼点的幼虫密度为1/mL,分别投放扇贝串,波纹板,筛绢(80目),网片(20目)和聚乙烯薄膜5种附着基,观察密鳞牡蛎浮游幼虫的附着情况,每组试验均设置3次重复。投放附着基6 d后,统计不同附着基的幼虫附着数量,并计算单位面积(cm2)的幼虫附着量。

1.5 统计分析

利用统计软件SPSS(16.0)对实验数据进行单因素方差分析(ANOVA),检验处理间的差异显著性,当P<0.05时认为差异显著。

2 结果

2.1 浮游幼虫的培育

密鳞牡蛎从受精卵至D形幼虫的排放平均需要2 d。刚排出体外的D形幼虫平均壳高(133±2.1)μm,壳长(149.3±1.4)μm。

在幼虫培育密度为0.5～1/mL时,浮游幼虫前期(1～14 d)生长速度较慢,平均日增长为(5.6±0.7)μm;当壳长达到(180±2.3)μm时,进入壳顶幼虫期,生长速度明显加快,日均增长达到(12±1.3)μm(见图1);浮游幼虫经28 d生长,壳长约(320±1.1)μm时,幼虫开始出现眼点。壳高(H)与壳长(L)回归方程:H=1.074L-26.706(r=0.977)。

图1 密鳞牡蛎浮游幼虫的生长Fig.1 Shell height and length ofO.denselamellosalarvae

2.2 环境因子对幼虫生长与存活的影响

2.2.1 盐度对浮游幼虫生长与存活的影响 如图2所示,从第3d开始,幼虫在不同盐度下的生长开始出现差异,其中盐度18下幼虫生长最为缓慢,并于第7天开始显著低于盐度22,30和26组(P<0.05);盐度30下幼虫平均日增长量最大。盐度18实验组幼虫的存活率较其他海水盐度组低,但差异不显著(P>0.05)。

图2 不同盐度对幼虫生长和存活的影响Fig.2 The growth and survival rates ofO.denselamellosa at different salinities

2.2.2 温度对浮游幼虫生长与存活的影响 如图3所示,从第3天开始,幼虫在不同温度下的生长开始出现差异,其中24℃组幼虫生长最为缓慢,并且显著低于温度32℃组(P<0.05);第7天开始,24℃组幼虫的平均日增长量显著低于29℃和32℃组(P<0.05);第13天开始,24℃组幼虫的平均日增长量显著低于26℃组(P<0.05)。第5天开始,不同组别的幼虫存活率开始出现差异;第7天,29℃和32℃组的幼虫存活率明显低于24℃组(P<0.05);第11天时,各组存活率依次为:24℃组>26℃组>29℃组>32℃组。

图3 不同温度对幼虫生长和存活的影响Fig.3 The growth and survival rates ofO.denselamellosa at different temperatures

2.2.3 密度对浮游幼虫生长与存活的影响 如图4所示,从第5天开始,不同密度组幼虫的生长开始出现差异,其中3/mL和4/mL组幼虫生长最为缓慢,并且显著低于1/mL组(P<0.05)。但各密度组之间的幼虫存活率差异不显著(P>0.05)。

图4 不同密度对幼虫生长和存活的影响Fig.4 The growth and survival rates ofO.denselamellosa at different destinies

2.2.4 饵料对浮游幼虫生长与存活的影响 如图5所示,从第3天开始,不同饵料组幼虫的生长开始出现差异,其中金藻+扁藻投喂组的幼虫生长最为迅速,第7天始显著高于小球藻投喂组(P<0.05);第9天时,各组生长率依次为金藻+扁藻组>金藻+小球藻组>金藻组>小球藻组。但投喂不同的饵料对幼虫的存活率影响不显著(P>0.05)。

图5 不同种饵料对幼虫生长和存活的影响Fig.5 The growth and survival rates ofO.denselamellosa at different diets

2.3 附着基对幼虫附着变态的影响

投放附着基6 d后,波纹板、聚乙烯薄膜、筛绢、扇贝壳和网片5种附着基的单位面积平均附苗量分别为0.67,0.08,0.30,1.77和0.01/cm2。扇贝壳的附苗数量显著高于其他附着基。

图6 密鳞牡蛎幼虫各附着基附着情况Fig.6 The settling rates ofO.denselamellosa for five substrates

3 讨论

许多贝类在繁殖季节,亲体将成熟的精子和卵子排出体外,精子和卵子在海水中受精,称为卵生型;相反,有部分贝类在繁殖时,亲体将成熟的卵子排放到出水腔中,依靠排水孔附近的外套膜和鳃肌的作用,将生殖细胞压入鳃腔中,并在这里受精,胚胎发育成D形幼虫后离开母体,在海水中经过自由浮游阶段,然后附着变态成为稚贝,称为幼生型[5-6]。牡蛎属为幼生型,如密鳞牡蛎,欧洲牡蛎(Ostrea edulis),希腊牡蛎(Ostrea lurida)[6-7]。密鳞牡蛎亲贝体内的受精卵发育到D形幼虫期后,排到海水中进行浮游生活,然后附着变态成稚贝,营固着生活。在水温23℃时,密鳞牡蛎的受精卵经2 d左右发育成D形幼虫,而太平洋牡蛎受精卵仅需20～22 h便可发育成D形幼虫[8];密鳞牡蛎D形幼虫经过28 d左右的培育,平均壳长达320μm时,幼虫开始出现眼点,而太平洋牡蛎D形幼虫仅需20 d左右,幼虫平均壳长可达280μm时,幼虫出现眼点[8]。

密鳞牡蛎的浮游期为28 d,大大超过一般双壳贝类的浮游时间,如太平洋牡蛎浮游期为18～20 d[8],泥蚶浮游期为10 d左右[9],菲律宾蛤仔为9～10 d[10],文蛤为5～8 d[11],青蛤为5～6 d[12]。因此,密鳞牡蛎的育苗难度也相对加大,对水质的要求更高。由于6～7月海水中轮虫、挠足类等浮游动物的卵较多,一旦其进入幼虫培育水体,孵化的轮虫、挠足类则会与浮游幼虫竞争,影响幼虫生长。所以防止轮虫、挠足类的卵子进入育苗水体对于密鳞牡蛎幼虫培育的成败尤为重要。

在密鳞牡蛎幼虫培育过程中,各环境因子对幼虫发育影响显著。试验表明,在盐度26～30下幼虫生长速度较快,盐度18时,幼虫死亡率并没有明显高于其它盐度梯度,但通过观察,发现低盐下幼虫活动缓慢,胃不饱满,对外界刺激反应迟钝。幼虫生长速度与温度关系密切,在23～32℃之间生长速度随温度的升高而加快,但32℃时幼虫死亡率明显高于其它温度梯度。随着夏季水温的升高,密度对幼虫培育的影响更加显著。在密度梯度为1,2,3和4/mL的4个组别中,密度越高,生长率越低,但各组之间死亡率并没有明显差距。就贝类而言,单一饵料的营养不够全面均衡,而2种以上的饵料,则可充分的供给所需的养分[12-14]。从实验结果看,混合投喂的效果明显好于单一饵料,即使像小球藻这种效果差的饵料,经混合搭配后,幼虫生长效果也较好。密鳞牡蛎育苗期正值盛夏,金藻培养难度大,饵料的混合投喂有效的解决了这个难题,满足了幼虫生长发育的需要,保障育苗的顺利进行。

当密鳞牡蛎幼虫即将结束浮游生活变态附着时,即生长至约350μm×320μm时在软体部中央生出一个黑点,称眼点。密鳞牡蛎的眼点较太平洋牡蛎的眼点大,眼点形成后幼虫游泳能力减弱,相继形成足,足伸出体外匍匐寻机分泌足丝附着,因此眼点的出现,是投放附着基时机的标志。由于幼虫生长发育速度有所差异,出现眼点时间也有早有晚,因此应在眼点幼虫比例达1/3以上时开始投放附着基。投放过早,因附着基上沉降浮泥污物,影响附苗,同时也不便管理;如果投放过晚又将错过附着机会。因此,附着基的投放时间对幼虫的附着变态尤为重要。

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Techniques of Artificial Breeding of the Oyster Ostrea denselamellosa

CHEN Lu,LI Qi,WANG Qing-Zhi,KONG Ling-Feng,ZHENG Xiao-Dong
(College of Fisheries,Ocean University of China,Qingdao 266003,China)

Broodstock conditioning and larval rearing were for the first time investigated in the oysterOstrea denselamellosa.The effects of salinity,water temperature,density and diets on growth and survival rates ofO.denselamellosalarvae were also examined.After larval rearing of about 28 days,the larvae developed to the stage of metamorphosis characterized by the appearance of eye spot in 28～30 psu at 23～25℃.As the temperature changed from 24℃through 32℃,the growth rate of the larvae was positively correlated to temperature,while the survival rate negatively correlated.For the four experimental groups with stocking densities of 1,2,3 and 4 larvae mL-1,larvae reared at the lowest density had the largest mean size,but there is no significant difference in survival rate.Compared with two monoalgal diets ofIsochrysis zhanjiangensisandPlatymonas subcordif ormisand a mixed diet ofI.zhanjiangensisandChlorella vulgaris,the highest growth rate was achieved with the mixed diet ofI.zhanjiangensisandP.subcordif ormis.The setting rates of the oyster larvae varied depending on the type of substrate used.The scallop shell had the highest setting rate of larvae,followed by plastic sheet,screen mesh,monofilament nylon and plastic film.

Ostrea denselamellosa;artificial breeding;environmental factors;substrates

S917.4

A

1672-5174(2011)03-043-05

国家高技术研究发展计划项目(2006AA10A409)资助

2009-12-07;

2010-03-29

陈 璐(1983-),男,硕士生。E-mail:aludibaby@163.com

**通讯作者:Tel:0532-82031622;E-mail:qili66@ouc.edu.cn

责任编辑 于 卫