刺五加质量分析研究进展

闫丽丽 邱友红 宫宏斌 刘广凤

（1、黑龙江完达山药业股份有限公司，黑龙江 密山 158306 2、黑龙江省八五八农场职工医院，黑龙江 虎林 158419）

刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus (Rupr.et Maxim)Harms的干燥根、根茎及茎。其性温，味微苦、辛，具有益气健脾、补肾安神的功能，原用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦[1]。随着对刺五加化学成分和现代药理作用研究的不断深入，刺五加中总黄酮、紫丁香苷、刺五加总苷、异嗪皮啶等化合物被证实为其有效成分，具有多种药理作用。现对其近年来报道的刺五加各类化学成分分析方法研究进展进行综述，为刺五加深度研究利用提供文献线索。

1 紫丁香苷的测定方法

1.1 薄层层析--紫外分光光度计法

将样品粗粉置索氏提取器中，加无水乙醇回流提取，吸取50μl 提取液点于硅胶GCMC 板上，用氯仿-甲醇（8∶2）展开，紫外灯下定位，切下紫丁香苷暗蓝色荧光部分，置试管中，另至薄层板上切取空白硅胶为对照，分别准确加甲醇5.0ml，充分搅拌溶解，离心，取上清液在266 ±1nm 处测吸收度，丁香苷线性范围是 5～25μg/ml[2]。

1.2 光密度计法

用乙醇和氯仿-乙醇（5∶1）从粉碎试样中萃取苷，用Silufol层TLC 分析萃取液，氯仿-甲醇-水（61∶33∶7）作展开剂，与 254nm 辐射检测刺五加苷B[2]。

1.3 高效液相色谱法

1.3.1 样品中的甲醇提取液进样测定，以氯仿-异辛烷-甲醇-冰醋酸（30∶15∶2∶3）为流动相（1.0ml/分钟），YWG-80 硅胶为固定相，270nm 为检测波长，外标法定量[2]。

1.3.2 样品加甲醇，超声处理（功率250W，频率 33kHz）30 分钟，放冷，提取液进样测定；以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（20∶80）为流动相；检测波长为265nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于2000[1]。

1.3.3 样品用60%甲醇作提取溶剂，超声波提取1.5h,提取温度为 55℃；检测波长 266 nm；流动相为甲醇-水（28∶72）；流速（1.0ml/min）；柱温 25℃,进样量为 10μl[3]。

1.3.4 样品使用乙醇为提取剂，采用超声萃取技术提取，用高效液相色谱法测定丁香苷的含量。色谱柱为C18（4.16mm×150mm，5μm），流动相为乙腈-水（1∶4），检测波长266nm，流速 1.0ml/min；柱温 25℃[4]。

2 异秦皮啶的含量测定

2.1 比色法

异秦皮啶在碱性溶液中下色反应1小时，在400nm 处测吸收度，计算含量。

2.2 薄层层析-比色法

精密称定生药粗粉，置索氏提取器中加乙醇回流提取，抽取100μl 滤液，点于硅胶G-CMC 板上，用己烷-乙酸乙酯-甲醇（24∶12∶3）展开，紫外灯下定位，切下，置试管中，另自薄层板上切取空白硅胶对照，分别加0.5%氢氧化钾70%乙醇溶液5.0ml，充分搅拌溶解，离心，取上清液在400nm 测定吸收度，异秦皮啶的线性范围为 0.84～6.72μg/ml。

2.3 薄层扫描法

样品的氯仿提取液点于硅胶G 板上，以环己烷-氯仿-95%乙醇（4∶2∶1）展开，将异秦皮啶与其它成分分离后，再用岛津CS-910 型双波长薄层扫描仪进行荧光扫描测定，激发波长为365nm，发射宝成为500nm[2]。

2.4 高效液相色谱法

2.4.1 利用色谱柱为PhenomenexeC18 柱（4.6mm ×150mm，5μm）， 流 动 相 ： 乙 腈 -0.05mol/l 一磷酸二氢钾（5∶85），流速：0.9ml/min，检测波长：344nm，进样量：20u1 测定了刺五加药材中总异秦皮啶含量[5]。

2.4.2 利用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)为流动相，检测波长343nm，理论板数按异秦皮啶峰计算应不低于1500，测定了刺五加原药材中异秦皮啶含量[6]。

3 刺五加苷B、E(丁香苷和紫丁香树脂苷)的测定

3.1 样品用50%甲醇作提取溶剂回流提取，色谱柱：YMC C18；流动相：A 为 0.1%磷酸水溶液，B 为乙腈，梯度洗脱：0 min：B(10%)，15 min：B(10%)，30 min：B(16%)，40 min：B(16%)，40.1 min：B(10%)；检测波长:220nm；柱温：35℃[7]。

3.2 样品使用50%甲醇处理，色谱柱：diamonsil(250mm×4.6mm，5μm)；大连物化所保护柱；流动相：乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱：乙腈由13%等度2 min，再10min 内线性变化到21%，然后在21min 中内线性变化到22%。柱温：40℃；流速：1ml/min；检测波长刺五加苷B 为265nm，刺五加苷E 为271nm。进样量2Oμl[8]。

4 总黄酮的含量测定

4.1 以芸香甙为对照品，绘制标准曲线。取生药粗粉，用石油醚除色素，干燥。精密称量样品，乙醇热回流提取，稀释一定倍数，使用721 型分光光度计在420nm 波长测定吸收度，根据标准曲线，计算总黄酮百分含量[9]。

4.2 以芦丁为对照品,采用分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量，以甲醇为溶剂连续回流提取。使用UV-7530 紫外分光光度计于510nm 处测定吸收度，按浓度与吸收度相关关系求得回归方程为A=9.4000C-0.0320，R=0.9998（n=5），样品平均回收率为98.77%，RSD 为1.34%[10]。

[1]国家药典委员会：中华人民共和国药典.化学工业出版社，2005.143-144

[2]郑虎占等：中药现代研究与应用.学苑出版社，1999

[3]张艳华等：HPLC 法测定黑龙江省不同地区刺五加紫丁香苷的含量.植物研究，2005，25（4）：123-125

[4]曹建国等：刺五加丁香苷和总黄酮含量及其季节动态.植物学通报，2006，23（3）：269-274

[5]周国平等.刺五加中游离型和结合型异皮定的高效液相色谱法研究.药物分析杂志，2001，21(3)：180

[6]郑伟然.HPLC 法测定中药材刺五加中异嗪皮啶的含量.现代中药研究与实践，2003，17(1)：29

[7]杨敬芝等：HPLC 法测定不同产地的刺五加中刺五加苷B 和E 含量.中药材，2005，28（8）：669-670

[8]孟祥才等；刺五加不同药用部位及不同组织有效成分含量比较研究.时珍国医国药，2009，2O（8）：1899-1900

[9]王雨亭等：刺五加与临床.吉林科技出版社，1990，14-15

[10]王丽英等：分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量. 时珍国医国药，1999，10（12），884