保健品欣源通胶囊安全性的初步评价

2010-11-27卢梦

长江大学学报(自科版) 2010年2期

关键词：灌胃阴性小鼠

卢梦

(长江大学动物科学学院，湖北荆州 434025)

杨文祥

(湖北省疾病预防控制中心，湖北武汉 430079)

保健品欣源通胶囊安全性的初步评价

卢梦

(长江大学动物科学学院，湖北荆州 434025)

杨文祥

(湖北省疾病预防控制中心，湖北武汉 430079)

采用小鼠急性经口毒性试验、二项致突变试验(小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验)和30 d喂养试验，评价了欣源通胶囊作为保健品的安全性。结果表明，欣源通胶囊对2种性别的SPF级昆明种小鼠急性经口毒性试验，24 h 2次灌胃量达20.0 g/kgBW，2周观察期内动物未见明显中毒症状，亦无动物死亡。按急性毒性分级标准评价，该受试样品属无毒级；二项致突变试验结果均为阴性。30 d喂养试验结果表明受试样品各剂量组对Wistar大鼠体重、进食量、食物利用率、血液学、血液生化、脏器重量、脏/体比值以及病理组织学等指标与正常对照组比较，均无显著性差异，未发现该受试物有明显的毒性作用。可见，欣源通胶囊作为保健品是安全的，可以通过一、二阶段的毒理学安全性评价。

欣源通胶囊；安全性评价；保健品

欣源通胶囊是由某公司研制的内容物为棕色粉末的一种保健品[1]，主要功能是提高缺氧耐受力[2]，主要适用于在高原、高山、高空、井下等缺氧环境工作或生活的人群[3]，也适用于在缺氧环境中短期工作或海拔高度一般在3 000 m以上旅游参观的人员。为确定欣源通胶囊作为保健品的安全性，笔者对欣源通胶囊进行了一、二阶段的安全性评价。

1 材料与方法

1.1 材料

受试欣源通胶囊来源于某药业公司研制，先将受试样品粉末用蒸馏水配制成相应浓度的均匀混悬液，供试验用。SPF级昆明种小鼠、Wistar大鼠及饲料均由湖北省实验动物研究中心提供。实验动物及饲料生产许可证号：SCXK(鄂)2003～0005。大、小鼠分别饲养于湖北省实验动物研究中心SPF级大、小鼠实验室，实验动物使用许可证号：SYXK(鄂)2003～0014。动物体重依各项试验要求而定，实验室温度20～24 ℃，湿度40%～70%。

1.2 方法

(1)小鼠急性毒性试验参照文献[4]选用SPF级昆明种小鼠，体重为18～22 g，雌雄各10只，灌胃前16 h 动物禁食不禁水，将先期配制好的浓度为0.5 g/mL的受试样品充分摇匀后进行灌胃，灌胃容量为0.2 mL/10 gBW，分2次进行，间隔4 h，累计总剂量为20 g/kgBW。灌胃当天连续观察，以后每天观察2次直至第14天，并记录动物中毒症状及死亡数，试验结束时未死亡动物。

(2)遗传毒性试验参照文献[5]小鼠骨髓细胞微核试验：选用体重为25～30 g的昆明种小鼠，雌雄各25只，随机分成5组，每组雌雄各5只。设A组为阴性对照组、E组为环磷酰胺阳性对照组，小鼠灌胃剂量为40 mg/kgBW； B、C、D组为受试样品组，受试样品剂量分别为2.5、5.0、10.0 g/kgBW。受试样品采用蒸馏水配制成0.125、 0.250、0.500 g/mL的浓度，环磷酰胺用蒸馏水配制成0.002 g/mL的浓度，各组小鼠灌胃容量均为0.2 mL/10 gBW，阴性对照组灌胃给予等容量蒸馏水。各试验组小鼠均采用30 h试验法，即2次给予受试物间隔24 h，于第2次给予受试物后6 h处死动物，取股骨骨髓涂片，自然干燥后甲醇固定，Giemsa染色。每只动物油镜下观察1 000个嗜多染红细胞(PCE)，记录出现微核的嗜多染红细胞数，其微核发生率以含微核的PCE千分率计，并用χ2检验进行统计；计数200个嗜多染红细胞数，同时计数成熟红细胞数，并计算PCE占红细胞(RBC)总数的百分比[PCE个数/(PCE个数+成熟红细胞个数)]。

小鼠精子畸形试验:参照文献[6]选用体重为25～30 g的雄性昆明种小鼠25只，随机分成5组，每组5只。设A组为阴性对照组，E组为环磷酰胺阳性对照组，小鼠灌胃剂量为40 mg/kgBW；B、C、D组为受试样品组，受试样品的剂量分别为2.5、5.0、10.0 g/kg BW。受试样品采用蒸馏水配制成0.125、0.250、0.500 g/mL的浓度，环磷酰胺用蒸馏水配制成0.002 g/mL的浓度，按0.2 mL/10 gBW灌胃给予，阴性对照组小鼠灌胃给予等容量蒸馏水。各试验组小鼠均连续5 d给予相应的受试物后再继续喂养30 d。在首次给受试物后的第35天处死动物，取两侧附睾置于0.5 mL生理盐水中，用眼科剪将附睾纵向剪1～2刀，用4层擦镜纸过滤后涂片，空气干燥后，甲醇固定，再用1%伊红染色。每只动物高倍镜下观察1 000个精子，记录畸形精子数，计算畸形精子发生率(以千分率计)，并进行统计处理。

(3)30 d喂养试验参照文献[4]选体重65～85 g Wistar大鼠共80只，雌雄各半，随机分成1个阴性对照组和3个剂量组，每组雌雄各10只大鼠，饲养方法为单笼喂养。各组受试样品剂量分别为0.0、1.5、3.0、6.0 g/kgBW(其中，低、中、高剂量组分别相当于人群推荐日摄入量0.03 g/kgBW的50、100、200倍)。受试样品先配制为0.1、0.2、0.4 g/mL的浓度，再按1.5 mL/100 gBW经口灌胃给予，连续饲喂30 d。

试验前后测量体重、记录进食量，并计算总食物利用率，测量脏器重量，计算脏/体比值。试验结束时测定血红蛋白(HB)，计数红细胞(RBC)、白细胞(WBC)，并测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶 (AST)、血清尿素氮(BUN)、总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、肌酐(Cr)、血糖(GLu)、血清白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)等指标[7]。

1.3 数据处理

试验数据采用Microsoft Excel 2003进行处理，其中计量资料采用t检验，计数资料采用非参数统计法，并按动物性别分别统计。

2 结果与分析

2.1 小鼠急性经口毒性试验

在2周观察期内，动物未见明显中毒症状，亦无动物死亡，按急性毒性分级标准[4]评价，该受试样品属无毒级。

2.2 遗传毒性试验

(1)小鼠骨髓细胞微核试验由表1可知，阳性对照组雌雄小鼠微核率与阴性对照组比较有极显著差异(Plt;0.01)，而受试样品各剂量组雌雄小鼠微核率与之比较均无显著性差异(Pgt;0.05)，表明在本实验剂量范围内，该受试样品对骨髓细胞微核试验结果为阴性[5]。受试物各组未成熟红细胞占红细胞总数的比例(PCE/RBC总数)均不少于阴性对照组的20%。

(2)小鼠精子畸形试验由表2可知，阳性对照组小鼠精子畸形发生率与阴性对照组比较有极显著差异(Plt;0.01),而受试样品各剂量组与之比较均无显著性差异(Pgt;0.05)，表明在本试验剂量范围内,该受试样品精子畸形试验结果为阴性[6]。

2.3 30 d喂养试验

经过30 d的饲喂，受试样品各剂量组大鼠总食物利用率及增重与阴性对照组比较均无显著性差异(Pgt;0.05，表3)。各剂量组大鼠血液常规指标,血清ALT、AST、BUN、TCH、TG、Cr、GLu、Alb、TP等与阴性对照组比较也均无显著性差异(Pgt;0.05)，且均在正常值范围内(表4，表5)。各剂量组大鼠脏器重量及脏/体比值与对照组比较也无显著性差异(表5)。

病理组织大体解剖肉眼可见，各剂量组雌雄性大鼠的心、肝、脾、肾、胃肠与正常对照组比较，其外观颜色和脏器大小正常，均未见明显渗出、增生、水肿、萎缩等病变。镜检查结果也表明，与对照组比较,各剂量组结果均在正常形态学范围内,未见明显中毒性病理改变。

表1 小鼠骨髓细胞微核试验结果Table 1 Micronucleus test results of bone marrow cells in mice

注：**为与阴性对照组比较结果(Plt;0.01)，表2同。

表2 小鼠精子畸形试验结果Table 2 Sperm deformity test results of mice

表3 各组大鼠增重及总食物利用率Table 3 The weight increase and food utilization ratio of each rat group

3 小结

本研究结果表明，欣源通胶囊对2种性别的SPF级昆明种小鼠急性经口毒性试验,累计2次灌胃剂量达20 g/kgBW(相当于人群推荐日摄入量0.03 g/kgBW的667倍)，在14 d的观察期内动物未见明显中毒症状和死亡，依据急性毒性分级评价标准规定,该受试样品属无毒级；二项致突变试验(小鼠骨髓细胞微核试验和精子畸形试验)结果均为阴性。将受试样品按1.5、3.0、6.0 g/kg BW剂量(分别相当于人群推荐日摄入量1.8 g/60 kgBW，即0.03 g/kgBW的50、100、200倍)对SPF级Wistar大鼠连续给予30 d，动物未见明显的中毒症状和死亡。受试样品各剂量组大鼠体重、进食量、食物利用率、血液学、血液生化、脏器重量、脏/体比值以及病理组织学等指标与阴性对照组比较，均无显著性差异，未发现该受试样品有明显的毒性作用。由此表明，欣源通胶囊作为保健食品是安全的[5],可以进行进一步的功能研究。