米尔贝霉素肟对小鼠的急性毒性试验

徐倩倩,李继昌,曲明丽,张耀腾,于晓蕾

(东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030)

米尔贝霉素肟(milbemycin oxime)为大环内酯类抗体内外寄生虫药物,是米尔贝霉素A3和A4的肟衍生物,主要通过增强虫体的抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)的释放使虫体麻痹死亡[1-2]。通常用于预防恶丝虫病,控制线虫、钩虫引发的犬、猫疾病及犬的鞭虫病。米尔贝霉素肟毒性很低,LD50在临床推荐用量的2 000倍以上[3],但关于急性毒性研究的详细数据未见报道。由于专利限制,从上世纪80年代发现至今,中国大陆缺乏研究和应用,随着专利到期,米尔贝霉素肟作为一种新型抗体内外寄生虫药越来越受到重视,为评价其毒副作用,指导临床合理用药,本文进行了米尔贝霉素肟对昆明系小鼠的急性毒性试验。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级昆明系小鼠,体重18～22 g,雌雄各半。由哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心提供。动物观察7 d后用于试验,饲养环境为清洁级,自由采食全价颗粒料,自由饮水。

1.2 受试药物 米尔贝霉素肟原料药,淡黄色结晶性粉末,含量≥98%,4℃避光保存,由浙江海正药业股份有限公司提供,临用时用0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制成适当浓度的混悬液。

1.3 动物试验

1.3.1 预试验 取昆明系小鼠40只,雌雄各半,按序贯法进行预试验[4],发现米尔贝霉素肟对雌性和雄性小鼠毒性不同,LD 0和LD 100分别为300 mg/kg体重和 1 500 mg/kg体重、1 000 mg/kg体重和3 000 mg/kg体重。

1.3.2 正式试验 米尔贝霉素肟在雄性小鼠的半数致死量(LD50)测定 取健康昆明系雄性小鼠80只,按体重进行随机区组试验设计分组,每组10只。给药前禁食不禁水16h,给药组和对照组分别给予1 000 mg/kg,1 240 mg/kg,1 540 mg/kg,1 900 mg/kg,2 360 mg/kg,3 000 mg/kg和溶媒,组距为0.09。各剂量组采用等体积灌胃单剂量给药,给药体积为0.2 mL/10 g。观察记录14 d内各组动物临床表现、中毒症状和死亡情况。对死亡动物进行剖检,肉眼观察病理变化,采用孙氏改良寇氏法计算LD50[5]。

米尔贝霉素肟在雌性小鼠的半数致死量(LD50)测定取健康昆明系雌性小鼠70只,按体重进行随机区组试验设计分组,每组10只。给药组和对照组分别给予300 mg/kg,414 mg/kg,571 mg/kg,788 mg/kg,1 088 mg/kg,1 500 mg/kg药物和溶媒,组距为0.14。各剂量组采用等体积灌胃单剂量给药,给药体积为0.2 mL/10 g。观察记录14 d内各组动物临床表现、中毒症状和死亡情况。对死亡动物进行剖检,肉眼观察病理变化,采用孙氏改良寇氏法计算LD50[5]。

2 结果

给药剂量越大,小鼠中毒症状出现时间越早,症状也越明显。一般于给药后3 h开始出现,死亡病例按照给药时间顺序逐渐表现为呼吸急促,震颤,共济失调;拱背,盲目运动;卧伏不动,心跳减弱,呼吸缓慢,阵发性抽搐;死亡。转归病例仅出现一过性的呼吸急促,活动增多,共济失调。剖检发现死亡小鼠胃肠极度臌胀,充满气体。肝脏有小出血点。14 d后对剩余小鼠剖检,未发现病理变化。各剂量组动物死亡率见表1和表2。

经孙氏改良寇氏法计算米尔贝霉素肟对雄性和雌性小鼠的LD50分别为1 832 mg/kg和727 mg/kg,95%可信限为1 637.57～2 022.08 mg/kg和603.95～868.96 mg/kg。

表1 雄性小鼠灌服米尔贝霉素肟后的死亡时间分布及死亡率

表2 雌性小鼠灌服米尔贝霉素肟后的死亡时间分布及死亡率

3 讨论

文献报道米尔贝霉素肟对Crj：CD-1(ICR)小鼠的经口 LD50为：雄性 946 mg/kg,雌性 722 mg/kg[6];而本试验中米尔贝霉素肟对昆明系小鼠的LD50为：雄性 1 832 mg/kg,雌性 727 mg/kg。两者均显示出小鼠急性经口毒性雌性比雄性更敏感,然而本试验中雄性动物LD50明显高于文献报道,有研究者针对实验动物的性别和品系对外源化学物的反应进行详细研究,结果显示,动物性别和品系对某些外源化学物反应有很大差异[7-9],本试验与文献中出现的性别和品系的敏感性差异可能源于此,米尔贝霉素肟对不同品系小鼠的毒性有待于进一步研究。

雄性小鼠开始出现毒性反应的给药量是雌性小鼠的3倍以上(雄性1 000 mg/kg,雌性 300 mg/kg),但毒性均主要表现为神经症状,与其作用机制有关,症状出现较为缓慢,如果及时治疗可完全恢复。半数致死量在500 mg/kg以上(临床常用剂量0.25mg/kg的2 000倍以上),与文献报道一致[3],所以临床不容易产生毒副反应。米尔贝霉素肟对小鼠毒性呈现性别差异,这对临床用药有一定的指导意义。

试验中存活小鼠剖检未发现有病理变化,说明米尔贝霉素肟对内脏器官无损伤或损伤很小可恢复。

总之,米尔贝霉素肟对小鼠的急性毒性作用很小,有待于进一步研究开发利用。

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