氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的体外透皮吸收实验研究

王园姬,赵海娇,李慧玲,骆从艳,陈文,

(石河子大学药学院/新疆特种植物药资源重点实验室,石河子832000)

氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的体外透皮吸收实验研究

王园姬1,赵海娇2,李慧玲2,骆从艳2,陈文1,2

(石河子大学药学院/新疆特种植物药资源重点实验室,石河子832000)

为了考察氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷透皮吸收性能的影响,并寻找最佳的促透剂浓度,本文采用Franz扩散池法,进行大鼠皮肤体外透皮吸收实验研究。以接收液中苦杏仁苷含量为检测指标,用HPLC测定不同时间点透过的苦杏仁苷的浓度。实验结果表明,当接收液为生理盐水时,氮酮的最佳促透浓度为4%,透皮速率为15.74μg/(cm2·h);当接收液为甲醇-水(30∶70)时,氮酮的最佳促透浓度为3%,透皮速率为11.26μg/(cm2·h)。证明氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的透皮吸收具有良好的促进作用。

复方斯亚旦生发酊;苦杏仁苷;透皮吸收;氮酮

Abstract:In order to investigate the promotion effect of Azone as an additive in Compound Siyadan Tincture,and find the optimum concentration to promote the transdermal absorption,we used Franz diffusion cell to study the percutaneous absorption with excised rat skin.The amount of Amygdaloside in the received solution was determined by HPLC at different time points.The optimum concentration of Azone was 4%when the reception solution was Sodium Chloride,and the permeation rate was 15.74μg/(cm2·h);the optimum concentration was 3%when the reception solution was MeOH-H2O(30∶70),and the permeation rate was 11.26μg/(cm2·h).The conclusion was that Azone could effectively promote the transdermal absorption rate of Amygdaloside in Compound Siyadan Tincture.

Key words:Compound Siyadan Tincture;Amygdaloside;transdermal absorption;Azone

复方斯亚旦生发酊系维吾尔草药复方,收载于中华人民共和国卫生部药品标准-维吾尔药分册中,由瘤果黑种草子、桃仁、石榴子3味药材组成,具有育发、润发、固发之功效,用于秃发、斑秃、脂溢性脱发以及其它不明原因的脱发[1]。处方中含有桃仁,桃仁具有活血祛瘀、润肠通便等功效[2],其主要成分为苦杏仁苷。

为了考察酊剂的体外透皮吸收情况,本实验以复方斯亚旦生发酊为模型药物,以离体鼠皮为实验材料,采用Franz扩散装置,研究了不同浓度氮酮作为药物透皮吸收促进剂时,对制剂中苦杏仁苷的透皮吸收影响[3-5]。分别考察了在接收液为生理盐水和甲醇-水(30∶70)时苦杏仁苷经皮渗透速率,系统的比较了氮酮浓度及不同接收液对苦杏仁苷透皮性能的影响,为本制剂的透皮吸收行为提供一定的参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

Waters高效液相色谱仪;Rya-6a型药物透皮扩散试验仪(上海黄海药检仪器有限公司,扩散面积为2.8 cm2,接收池容积6.5 mL);Sartorius(BP211D)电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

1.1.2 试药

苦杏仁苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110820-200403);氮酮(天津市福晨化学试剂厂);复方斯亚旦生发酊为自制;水为自制超纯水,甲醇为色谱纯试剂,其它试剂为分析纯试剂。

1.1.3 实验动物

Wistar大鼠,雌雄不限,体重(200±20)g,由石河子大学动物实验中心提供。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件与系统适用性

色谱柱:KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相 :甲醇-水(30∶70);检测波长 :210 nm;柱温:20℃;流速:0.7 mL/min;进样体积 20μL。理论板数按苦杏仁苷峰计约为2000。对照品及接收液的色谱图见图1,苦杏仁苷峰的保留时间约为15 min。

图1 对照品及样品HPLCFig.1 The HPLC chromatogram of reference substance and the sample

1.2.2 供试品溶液的制备

精密移取复方斯亚旦生发酊供试品溶液0.5 mL至10 mL容量瓶中,水浴挥干乙醇,再用甲醇-水(30∶70)稀释至刻度,超声分散10 min,摇匀,过0.22μm的微孔滤膜,取续滤液,即得。

1.2.3 离体鼠皮的制备

处死大鼠,先用手术剪将大鼠背部拟用区域的毛剪短,再用理发器将毛剃除干净,注意勿损伤鼠皮。手术剪取下去毛区域的皮肤,剥离皮下组织和脂肪,用生理盐水将皮肤反复漂洗至干净,备用。

1.2.4 体外透皮试验

将皮肤真皮层面向接收室固定在Franz扩散池上,分别精密移取0.5 mL含氮酮依次为0%、1%、2%、3%及4%的复方斯亚旦生发酊入给药室,接收池中加满生理盐水或甲醇-水(30∶70,(37±0.1)℃),使接收液与鼠皮之间无气泡。开启磁力搅拌器,搅拌速度为 300 r/min。分别在 2、4、6、8、10、21 h 吸取接收液1.0 mL,同时补回同温度生理盐水或甲醇-水(30∶70)1.0 mL。取出的接收液立即置于1.5 mL离心管中,12000 r/min离心10 min,并于进样前过0.22μm的微孔滤膜,弃去初滤液,取续滤液20μL,注入高效液相色谱仪,记录苦杏仁苷的峰面积,代入标准曲线方程,求出药物浓度,并按公式(1)计算单位面积累积透皮量Q。

其中,Cn为第n个取样点测得的药物浓度(μg/mL),Ci为第i(i≤n-1)个取样点测得的药物浓度(μg/mL),V为扩散池容积(mL),S为有效扩散面积(cm2)。

利用公式(2)计算累积透过百分率 P。

其中,P为累积透过百分率,Ni为接收池中苦杏仁苷的量(μg),S为释放池中苦杏仁苷的量(μg)。

以单位面积累积透过量(Q)为纵坐标,时间(t)为横坐标,得到经皮渗透曲线如图2。

图2 复方斯亚旦生发酊经皮渗透曲线Fig.2 The transdermal permeation curve of Compound Siyadan Tincture

2 结果

2.1 方法学考察结果

2.1.1 线性关系考察

称取苦杏仁苷对照品适量,加甲醇配制成浓度为0.324 mg/mL的对照品溶液。精密吸取此对照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 5 mL 容量瓶中,甲醇-水(30∶70)稀释至刻度。分别精密吸取20μL,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以峰面积 Y为纵坐标,苦杏仁苷的浓度C(μg/mL)为横坐标,绘制标准曲线,得到苦杏仁苷高浓度的回归方程:Y=28413×C+6708.1(r=0.9990),表明苦杏仁苷在6.48～64.8μg/mL范围内线性关系良好。

精密移取11.96μg/mL苦杏仁苷对照品溶液0.05、0.1、0.5、1.0、2.0 于 10 mL 容量瓶中 ,甲醇-水(30∶70)稀释至刻度。分别精密吸取20μL,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以峰面积 Y为纵坐标,苦杏仁苷的浓度C(μg/mL)为横坐标,绘制标准曲线,得到苦杏仁苷低浓度的回归方程:Y=29398×C+674.89(r=0.9999),表明苦杏仁苷在0.0598～11.96μg/mL范围内线性关系良好。

2.1.2 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液(浓度为9.72μg/mL)20μL,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积,RSD为0.97%(n=6)。

2.1.3 稳定性试验

取同一供试品溶液在 0 h、2 h、5 h、7 h、24 h 分别测定苦杏仁苷的含量,其峰面积RSD为1.5%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.1.4 重复性试验

取同一批样品,精密移取5份,按“1.2.2”项下处理,分别测定苦杏仁苷的含量,RSD为1.7%(n=5)。

2.1.5 加样回收率试验

分别精密移取同一批号本品6份,各0.1 mL至10 mL容量瓶中,加入0.2 mL苦杏仁苷对照品(0.598 mg/mL),按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液,测得苦杏仁苷的平均回收率为99.90%,RSD为3.0%。

2.2 体外透皮吸收实验结果

表1给出了酊剂在两种接收介质中、不同浓度氮酮时的实验结果。当接收液为生理盐水、氮酮浓度为4%时,21 h的单位面积累积透过量最大(269.8μg/cm2),透皮速率为15.74μg/(cm2·h);当接收液为甲醇-水(30∶70)、氮酮浓度为3%时,21 h的单位面积累积透过量最大(222.7μg/cm2),透皮速率为11.26μg/(cm2·h),且加入各浓度氮酮后21 h单位面积累积透过量显著高于不加促透剂时(P<0.05)。

透皮速率以生理盐水组明显大于甲醇-水(30∶70)组,21 h的单位面积累积透过量也是生理盐水组较高。可能是后者更接近于生理环境,更有利于苦杏仁苷透过皮肤进入接收液中,故确定以生理盐水为接收液。结合图2可以看出,在两种接收介质中,苦杏仁苷从酊剂中释放、透过大鼠皮肤、进入接收液的速度在开始阶段较快,随着透皮时间的增加,透过速率减慢[6]。

由表1的实验结果可以得知,酊剂中的苦杏仁苷在大鼠皮肤上可维持21 h的持续释放,其经皮渗透过程符合 Higuchi方程的扩散模式。

表1 体外透皮吸收的实验结果Tab.1 The experimental results of transdermal permeation

3 讨论

外用制剂中,常用的渗透促进剂有薄荷脑、冰片、丙二醇、氮酮和萜类物质等。氮酮以使用浓度低、促透效果好、无毒无刺激性等而广泛使用。氮酮对疏水性和亲水性成分均有较好的促进作用,适用于有效成分较多而复杂的中药制剂[7]。本实验结果显示,氮酮能够明显地促进复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的透皮吸收过程,且以其浓度为3%～4%时促透效果最好。文献报道中也大多使用低浓度(0.5%～5%)的氮酮作为透皮促进剂进行研究,可能是考虑到氮酮本身具有的潜在生理毒性作用。

本实验建立了 HPLC考察复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的透皮释药情况,此方法灵敏度高,分离效果好,专属性高。实验中考虑到以甲醇-水(30∶70)作为接收液时,与液相方法的流动相系统一致,实验结果也显示以甲醇-水(30∶70)作为接收液时,色谱图的溶剂峰小、峰形好,且分离度优于以生理盐水作为接收液时[8]。

临床外用制剂多为一天多次用药,而本实验为了获得酊剂中苦杏仁苷的最大透过量,将体外透皮吸收试验延长到21 h,但还是未达到释药的平台期。根据经皮渗透曲线可以看出,试验后期的药物释放量将逐渐减小,趋于释药平台期。

此外,在体外透皮试验操作过程中,大鼠皮肤与扩散池内接收液之间易出现气泡,形成一层屏障,这将阻碍苦杏仁苷透过皮肤进入接收液中。故在每次取样后加入新的接收介质时,都应注意保持接收液与鼠皮的良好接触,这是本试验各组结果重现性的关键。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准-维吾尔药分册[M].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1998:173.

[2]国家药典委员会.中国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2005:196.

[3]彭松,白琳,牟光敏.氮酮对雷公藤透出液中雷公藤甲素的体外透皮促进作用[J].时珍国医国药,2000,11(5):391-392.

[4]高金波,侯艳秋,周海瑞.氮酮对盐酸环丙沙星透皮吸收影响的研究[J].黑龙江医药科学,2009,32(1):1-2.

[5]马平勃.水溶性氮酮在生发灵酊剂中对阿魏酸体外透皮吸收的促进作用研究[J].第一军医大学学报,2002,22(1):56-58.

[6]卢闻.白川降压透皮剂的吸收特征及剂型研究[D].西安:西安交通大学,2003:17.

[7]杨芳芳,张永萍.盐酸川穹嗪透皮贴剂体外透皮速率测定和体外释放研究[J].淮海医药,2009,27(2):155-156.

[8]苏小妹,王芳江,国华,等.生姜凝胶贴剂的制备及其体外透皮吸收的研究[J].江西中医药,2009,40(31):61-63.

Promotion of Amygdaloside Transdermal Absorption by Azone in Compound Siyadan Tincture

WANG Yuanji1,ZHAO Haijiao2,LI Huiling2,Luo Congyan2,CHEN Wen1,2
(College of Pharmacy,Shihezi University/Key Laboratory of Xinjiang Phytomedicine Resources,Shihezi 832000,China)

R284.2

A

1007-7383(2010)05-0596-04

2010-01-13

国家科技支撑计划项目(2007BAI48B00)

王园姬 (1984-),女,硕士生,专业方向为药物新制剂与新剂型。

陈文(1967-),男,教授,从事药物新制剂与新剂型研究;e-mail:chen-wen2000@126.com。