HPLC测定牛黄解毒片中大黄素的含量

高卫东，李翠玲

（佛山市药品检验所，广东 佛山 528000）

HPLC测定牛黄解毒片中大黄素的含量

高卫东*，李翠玲

（佛山市药品检验所，广东 佛山 528000）

目的：建立高效液相色谱法测定牛黄解毒片中大黄素含量的方法。方法：采用Hypersil C18色谱柱，流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），检测波长：289 nm，流速：1.0 mL·min－1，柱温：30℃。结果：大黄素在0.025～0.25μg线性关系良好，r＝0.999 9，平均回收率为97.25%，RSD＝1.1%（n＝6）。结论：该方法快速简便，准确可靠，可用于牛黄解毒片的质量控制。

高效液相色谱法；牛黄解毒片；大黄素

牛黄解毒片现收载于 《中国药典》2010年版（一部），由人工牛黄、石膏和大黄等8味中药组成。具有清热解毒的功能，用于火热内盛，咽喉肿痛，牙龈肿痛，口舌生疮，目赤肿痛等［1］。原标准的含量测定项仅对黄芩中黄芩苷的含量进行了测定，而没有对方中用量最大的大黄进行含量测定。大黄素是大黄的主要活性成分，具有良好的抗微生物、抗炎、抗肿瘤活性和免疫抑制等作用，与牛黄解毒片的功效主治接近，为了更加有效地控制该产品内在质量，完善和提高其质量标准，本文建立了高效液相色谱法测定制剂中大黄素含量的方法，该方法简单、准确、重现性好。

1 仪器与试药

HP1100型系列高效液相色谱仪（美国），AE-240电子分析天平（瑞士Mettler）。大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110756-200110）；牛黄解毒片（江西心诚药业有限公司，批号20081101，20081104，20081209），甲 醇 为 色 谱 纯 （德 国Merck），水为超纯水（韩国 Power Iplus超纯水系统），其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil ODS2（4.6 mm×200 mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；检测波长：289 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱温：30℃。进样量：10μL。在此条件下，方中其他成分对大黄素测定无干扰，对照品和制剂样品在相同的保留时间处有吸收峰，而阴性样品无吸收峰，见图1。

图1 牛黄解毒片HPLC图

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含25μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片（包衣片除去包衣），精密称定，研细，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%盐酸溶液10 mL，超声处理10 min，再加三氯甲烷10 mL，加热回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备

照处方比例制备缺大黄的牛黄解毒片，照2.3项下操作，制备阴性样品溶液。

2.5 线性关系的考察

精密吸取大黄素对照品溶液1，2，4，6，8，10 mL分别置6个10 mL的量瓶中，加甲醇稀释至刻度。分别吸取上述6种溶液各10μL，测定。以测得的峰面积为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程为Y＝7 996.7X＋1.945 7，r＝0.999 9，说明大黄素进样量在0.025～0.25μg呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

取同一供试品溶液，连续6次进样，测定峰面积积分值，计算RSD＝0.72%。

2.7 稳定性试验

同一对照品溶液10μL，按上述色谱条件分别测定6次，每次间隔4 h，记录峰面积积分值，计算RSD＝0.87%，结果显示溶液20 h内稳定。

2.8 重现性试验

取同一批号的供试品6份，依法制成供试品溶液进行测定，平均含量为1.12 mg·g－1，RSD＝1.78%，结果表明重现性良好。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的样品6份，分别精密加入一定量的大黄素对照品溶液，照含量测定方法测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.10 样品测定

取20081101，20081104，20081209 3批样品，按供试品溶液制备项下方法制备，按上述色谱条件测定其中大黄素的含量，结果3批样品的大黄素含量分别为 1.18，1.12，1.24 mg·g－1。

表1 大黄素加样回收率

3 结论和讨论

大黄作为牛黄解毒片中用量最大的一味药，且其功能主治与牛黄解毒片相近，应该对其进行质量控制，本文选择大黄中主要活性成分大黄素作为指标成分进行含量测定，以求更好地控制牛黄解毒片的内在质量。

参照 《中国药典》2010年版收载的大黄药材中大黄素的含量测定方法［2］，来确定本制剂大黄素含量测定的色谱条件和供试品制备方法。本方法相对简单、准确、重现性好，可为 《中国药典》提高本品种的质量标准提供依据和参考。

［1］国家药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：566-567.

［2］国家药典委员会.中国药典.（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：22-23.

Determination of Emodin in Niuhuangjiedu Tablets by HPLC

GaoWeidong，Li Cuiling
（Foshan Institute for drug control，Foshan Guangdong528000，China）

Objective：A HPLC method was established for determination of emodin in Niuhuangjiedu tablet.Methods：A Hypersil C18column was used with methanol and 0.1%phosphoric acid solution（85∶15）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min－1at30℃ and the detector wavelength was 289 nm.Results：The relationship between the concentration and the peak area of emodin was good linear relation.The calibration curve of emodin was at the range of 0.025～0.25μg（r＝0.999 9），and the average recovery was 97.25%and RSD＝1.1%（n＝6）.Conclusion：The method was rapid，sensitive and accurate，and could be used for the quality control of this preparation.

HPLC；Niuhuangjiedu tablet；Emodin

*高卫东，E-mail：weidonggw＠163.com

2010-04-08）