5株奶牛乳房炎链球菌的鉴定

■ 贾保中 王建军 包头市家畜改良工作站

奶牛乳房炎是奶牛乳房的乳腺组织或腺体发炎而形成的乳房疾病，是危害奶牛养殖业的主要疾病之一。北京、上海、广州、兰州等城市的调查结果显示，乳房炎是奶牛场最严重的疾病之一，发病率达20%～70%。乳房炎可造成奶牛产奶量下降，原料奶品质降低和废弃。由于国内不少奶牛场滥用抗生素，耐药菌株不断出现，很多抗生素失去了治疗作用，使乳房炎的发病率居高不下。

引起奶牛乳房炎的原因有物理因素、化学因素、机械因素、微生物的感染等。在引起乳房炎的各种因素中，微生物的感染又占相当大的比例，微生物又可分为细菌、病毒等。其中链球菌是主要细菌之一。目前，链球菌属共有30多种，比较常见的有10多种，其中，无乳链球菌为奶牛乳房炎最常见的致病菌。该菌能引起婴儿败血症、脑膜炎和肺炎等，人医临床上对该菌以B群链球菌相称。该菌感染牛、山羊、绵羊发生乳腺炎，不产生明显的免疫，目前也无可靠的多价疫苗。本实验对送检的奶样进行了分离，对其中分离到的5株链球菌生物学特性进行了研究。

1 实验材料

1.1 乳样

由奶牛场工作人员无菌操作，采集乳样送至实验室待检。

1.2 药敏纸片

由包头市动物疫病预防控制中心化验室提供。

1.3 标准菌株

葡萄球菌1株（呈β－溶血），由内蒙古农业大学动物科学与医学院提供。

1.4 实验动物

绵羊、小白鼠，由包头市动物疫病预防控制中心化验室提供。

图1 实验步骤

2 实验步骤与方法

2.1 实验步骤

本实验的步骤如图1所示。

2.2 实验方法

2.2.1 形态学检查

将乳样进行涂片，革兰氏染色之后，置显微镜下观察细菌的形状、排列和染色特性，初步判断样品中是否含有链球菌。

各层次、各专业的职业教育均是以职业能力的培养为核心，并按照核心岗位的需求来构建课程体系，[2]这就要求中高职在市场调研的基础上共同协商统筹专业课程。但当前中高职衔接过程中关于课程设置的问题较为突出。文化课方面，中职坚持“简单、够用”，高职则强调“深度、广度”。因此，中职学生进入高职院校后，学习文化课普遍感到吃力，尤其在高等数学和大学英语等级考试方面的能力较差，较难完成专业培养目标要求。②专业课程方面。中高职在专业课程方面存在的最大问题是课程重复现象严重、课程先后顺序不合理、课程内容层次不分明。

2.2.2 分离培养

根据所要研究的链球菌的培养特性以及生长特性，选择血液琼脂培养基进行分离培养，获得5株细菌。

2.2.3 细菌的培养特性及生长特性检查

主要进行细菌培养特性检查（营养物质、氧气与CO2需要、温度要求、pH值及对氯化钠耐受性），细菌生长表现检查（如菌落、生长表现等）及生化物性检查（如糖代谢实验、特征性生化实验——CAMP实验）。

2.2.4 细菌对抗菌药物的敏感实验

将细菌接种于血清肉汤培养基中，培养24h后，进行无菌操作，用无菌吸管吸取肉汤0.1mL，滴于血液琼脂培养基平皿中。用推棒先沿一个方向涂布，然后反方向涂布，使其涂布均匀，之后加盖放置。待平皿稍干，用灭菌的镊子将药片贴于已经平均分成若干份、标记且已涂布的平皿上，并轻压使其贴在培养基表面，药敏片一旦接触平板就不要移动。药敏片之间的距离应适当，避免互相影响，之后置37℃培养24h，观察结果。测量抑菌圈直径，按其大小报告敏感、中度敏感或耐药。

2.2.5 细菌致病性实验——动物实验

3 实验结果

3.1 形态

各样品涂片、染色镜检可观察到革兰氏阳性菌长短不一的、链状排列的球形或卵圆形的细菌，初步判断为链球菌。

3.2 培养特性

营养要求比较高，普通琼脂上生长不良，血液琼脂上呈细小、灰白色、圆而微凸的菌落，有光泽，湿润、闪光，呈露滴状。血液琼脂斜面上生长量中等，呈现类似一层灰白色的膜，将琼脂斜面全部覆盖，且边缘整齐；无其它气味，血液琼脂无其它颜色或其它变化。从培养特性上看符合链球菌的所有培养特性。

3.3 生化特性

3.3.1 糖类代谢

根据糖类实验结果（表1）可知，此5株菌接近于无乳链球菌。

3.3.2 CAMP实验

实验结果表明，5株细菌在交接处出现箭头型溶血，可确定5株菌均为无乳链球菌。

3.3.3 药物敏感性

此5株菌的药物敏感性实验结果如表2所示。

3.3.4 致病性

小白鼠1周之内没有死亡，致病性不强。

4 讨论与小结

4.1 经实验鉴定，5株链球菌均为无乳链球菌，属于革兰氏阳性菌，是B群链球菌的成员，呈α溶血。从培养特性可知，无乳链球菌营养要求高，在普通琼脂营养基中生长不良，5%血液培养基上生长也不是太好。实验时要考虑加大血液培养基中血液的比例。糖类实验中，5株无乳链球菌的结果并不完全一致，可能是因为5株无乳链球菌抗原构造不同而使结果不一致。此5株无乳链球菌未产生很强的耐药性，对多数抗生素敏感，而只对少数抗生素产生了耐药性。

表1 糖类代谢结果

表2 药物敏感性

4.2 链球菌是环境性病原微生物，它们常寄生在牛体及周围环境中，因此搞好环境卫生对于预防乳房炎极为重要，以下方法可供参考。一是要搞好周围环境卫生，牛舍、运动场要清洁、干燥，通风换气良好；要定期消毒，不积留粪尿；垫草要干、软、清洁。二是要搞好牛体卫生，经常刷拭牛体，保持清洁。据报道，牛体、尾、后肢和乳头细菌占全身的50%，因此要特别注意后肢、尾部和乳房的卫生状况。三是要尽量减少应激反应和外伤因素，增加营养，提高免疫力，防止其它疾病的继发，还要规范挤奶操作。

［1］黄青云．畜牧微生物学．北京：中国农业出版社，2005

［2］马学恩．家畜病理学．北京：中国农业出版社，2007

［3］耿永鑫．兽医临床诊断学．北京：中国农业出版社，2006