天元克痛方的提取工艺及镇痛作用研究

周晓兵 ，秦 燕 ，孙 艳 ，刘振权 ，杜树山 ，方 翼

(1.中国人民解放军总医院，北京 100853; 2.北京师范大学资源学院·教育部资源药物工程研究中心，北京 100875)

中药治疗癌性疼痛，具有使用安全、无成瘾性、无毒副反应和药物作用维持时间较长等特点;中医中药治疗因与病因病机相联系、与辨证施治相结合，除能直接止痛外，还具有调节机体免疫功能和抑制肿瘤细胞的作用[1]。天元克痛方由元胡、香附、天仙子等中药组成，系解放军总医院著名老中医总结几十年临床经验而提出的治疗疼痛的中医经验方[2]，具有温经活血、行气止痛之功效。方中延胡索(元胡)为罂粟科植物延胡索 Corydalisyanhusuo W.T.Wang的干燥块茎，可行血中之气滞、气中之血滞，善治身体各部位疼痛。现代临床药理研究表明，延胡索的主要有效成分延胡索乙素对慢性持续性疼痛止痛效果较好，并有明显的镇静催眠作用，无成瘾性等不良反应，为一种非麻醉性镇痛成分，且不属于解热消炎镇痛药范畴。临床实践证明，该方镇痛作用显著，用于癌症疼痛的止痛作用尤为明显。为了使天元克痛方更好地应用于临床，笔者以出膏量为指标，采用正交试验进行了提取工艺优选，并对其镇痛作用作了初步研究。

1 提取工艺正交试验设计

1.1 材料与试药

各药材均购自北京同仁堂药店;甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法与结果

因素水平选择:根据延胡索、天仙子、白芷等药材所含成分的性质，并经预试验，以出膏量为考察指标，采用正交设计L9(34)进行试验，选定提取时间(因素A)、提取次数(因素B)、加水量(因素C)作为影响水煎煮的主因素[3]，水平设计见表1。

表1 因素水平表

出膏量测定:按处方比例称取天仙子、延胡索、白芷等药材共9份，每份投入85 g，加入水，按照正交试验表试验，得水提取液，浓缩至稠膏，转移并加甲醇定容至100 mL量瓶内，摇匀，备用。取50 mL置蒸发皿中，水浴蒸干溶剂，并减压干燥成干膏，测定干膏量，计算出膏量。

正交试验结果:结果见表2，方差分析见表3。由表2中 R值可知，各因素对提取工艺出膏量的影响大小分别为B＞C＞A;由表3可知，对提取工艺出膏量影响的各因素而言，因素B具有极显著影响，因素C有显著影响，因素A影响不显著。

表2 正交试验结果表

表3 方差分析结果表

最佳提取工艺确定:根据正交试验结果，最佳提取工艺组合为B3C3A1，即加水煎煮3次，10倍量，提取1 h。

验证试验:按优选的提取工艺提取3批样品，结果出膏率满意。

2 对小鼠的镇痛作用研究

2.1 动物和试药

动物:昆明种小鼠，雌性，17～20g，清洁级，购自北京大学医学部实验动物中心，动物许可证号为SCXK(京)2002－0001。

受试药物:天元克痛方，由北京师范大学资源药物与中药资源研究所药剂室提供，人日用量生药15 g/人。对提取结果进行测定，均达到要求。

阳性药物:盐酸曲马多缓释片(商品名奇曼丁，北京萌蒂制药有限公司)，批准文号为国药准字 H19980214，批号为05080812，有效期为2007－07，人日用量1片/人(0.247 g/片，含盐酸曲马多100 mg)。

2.2 方法

分组:将小鼠随机分为5组，即空白对照组、曲马多组(阳性药对照组，16.67 mg/kg)，天元克痛方低剂量组(1.25 g/kg)、中剂量组(2.5 g/kg)、高剂量组(5 g/kg)。

建立模型:先将水浴槽加满水，使水面接触热板，调节恒温装置使水温控制在(55±0.5)℃，热板预热10 min。每次取1只小鼠放在热板上，自小鼠放在热板上至出现舔后足所需时间(s)为该鼠的痛阈值。凡舔后足时间小于5 s或大于30 s或跳跃者弃之不用。

痛阈值:重复测定其正常痛阈值，取两次正常痛阈平均值作为给药前痛阈值。空白对照组、曲马多组及天元克痛方低、中、高剂量组连续给药5 d，每天分上下午两次给药，末次给药前禁食10～12 h，不禁水。于末次给药后30，60，90 min分别测定小鼠痛阈值。

2.3 结果

对测定数据进行组间单因素方差分析，结果见表4。结果表明，1.25，2.5，5 g/kg的天元克痛方能不同程度地提高小鼠痛阈值，镇痛作用的时间分布在给药后30～90 min，以低剂量组镇痛效果最优、持续时间最长。

表4 天元克痛方对小鼠的镇痛作用(±s)

表4 天元克痛方对小鼠的镇痛作用(±s)

注:与空白对照组比较，△P ＜0.05，▲P ＜0.01。

组别 剂量(g/kg) n 潜伏期(s)空白对照组组曲马多组天元克痛方低剂量组中剂量组高剂量组－0.017 1.25 2.5 5 13 14 14 13 10给药前22.25 ± 5.19 23.36 ± 4.88 22.75 ± 3.99 22.25 ± 3.89 22.71 ± 4.25给药30 min 19.31 ±5.74 24.21 ±5.99△26.71 ±8.27△24.23 ±4.87△25.00 ±7.23△给药60 min 19.69 ± 4.80 26.79 ±6.09▲29.43 ±8.60▲27.38 ±7.95▲23.40 ± 7.63给药90 min 19.31 ± 3.77 25.36 ±6.74▲26.50 ±6.53▲24.62 ±5.16▲19.20 ± 6.37

3 讨论

药物疗法是疼痛治疗最常用的方法。天元克痛方由元胡、香附、天仙子组成，方中天仙子、元胡为君药，具有活血散瘀、理气止痛之功效，善治身体各部位疼痛;香附为臣药，具有理气止痛之功效。现代研究表明，元胡中主要含生物碱，其中延胡索乙素具有中枢镇痛作用，镇痛作用较强;天仙子中含有氢溴酸东莨菪碱，对平滑肌疼痛可能有较好的作用。延胡索乙素含量测定可用双波长薄层扫描法及高效液相色谱法等。正交试验结果表明，根据临床的服用方式，采用水煎煮的方法就能够将延胡索乙素基本提取出来，且提取方法经济、方便、毒性小、对人体无损害，为天元克痛方提取工艺的优选提供了参考依据。

对小鼠的镇痛作用研究显示，天元克痛方具有显著的镇痛作用，可对缓解疼痛产生有益的治疗效果[5]。受试药高剂量组镇痛效果不如中、低剂量组，可能是因为高剂量给药使动物产生了药物耐受性，从而对药效的敏感性下降。

[1]李达周.中医药治疗癌性疼痛研究进展[J].江西中医药，2000，31(2):55－56.

[2]方 冀，王 睿，徐 伟，等.HPLC法测定天元克痛方主要成分研究[J].药物与临床，2003，18(5，6):40 －42.

[3]曹春林，范顺清.中药药剂学[M].上海:上海科学技术出版社，1986:172.

[4]景志杰，牛拴成，张轩萍，等.化痔灵片对小鼠实验性疼痛的镇痛作用[J].山西医科大学学报，2006，37(1):19－20.