三黄泻心汤对实验性糖尿病大鼠影响的研究

耿慧春，杨波，李彦冰

(1.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040;2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

三黄泻心汤源自汉·张仲景的《金匮要略》，由大黄、黄芩、黄连3味药组成，主治热盛迫血妄行、吐血衄血或三焦实热等症。临床不仅用于热毒所致的各种疾病，也已被广泛用于治疗内、外、妇、皮肤、五官科等疾病。目前，糖尿病的主要治疗手段是注射胰岛素和口服降血糖药物，根据糖尿病的病因病机及中医药治疗的特点，从已上市的中药中筛选具有降血糖作用的药物及有效成分的研究工作已经成为降糖药物研究的新的方向［1］。多项实验或临床研证明，大黄、黄连、黄芩及其方剂均有抗氧化和降低Ⅰ型、Ⅱ型、DM模型和正常动物的血糖的作用，三者组方后也显示出双重降糖作用。本实验通过高糖高脂饮食和链脲佐菌素诱导大鼠胰岛素抵抗模型，观察三黄泻心汤对血糖、血脂及胰岛素水平的影响，评价其对糖尿病的改善作用。

1 实验材料与方法

1.1 实验动物 Wistar大鼠，雄性，(180～220)g，长春高新动物实验研究中心提供，许可证号:SCXK－(吉)2003－0004。20～25℃适应性喂养1w，实验前12h禁食不禁水。

1.2 药品和试剂 大黄、黄连、黄芩均购自北京同仁堂哈尔滨药店有限责任公司，经鉴定符合2005版药典规定。按处方比例称取药材，按药量的12倍加入蒸馏水，浸泡30min，加热至沸腾，并保持微沸40min，过滤，药渣再加入10倍蒸馏水煎煮20min，过滤，两次滤液合并后浓缩(1g·mL－1)，置于冰箱4℃保存备用。链脲佐菌素(STZ)(Sigma公司产品);盐酸二甲双胍(天津太平洋制药有限公司);葡萄糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)试剂盒(长春汇力生物技术生物有限公司);胰岛素放射免疫试剂盒(北京科美东雅生物技术有限公司)。

1.3 仪器和设备 强生稳豪微量血糖测定仪(美国);BS－124S电子天平(德国);全自动生化分析仪(日立7600－020，日本);医用离心机(北京医用离心机厂)。

1.4 实验方法

1.4.1 三黄泻心汤对STZ致实验性糖尿病大鼠的作用

1.4.1.1 糖尿病大鼠模型的制备 将STZ溶于pH4.5的0.1mol·L－1柠檬酸钠缓冲液，配制成1%STZ溶液，0.2μm微孔滤菌器过滤除菌，备用;雄性大鼠，饲喂高糖高脂饲料(10.10%猪油，20.10%蔗糖，2.15%胆固醇，1.10%胆酸盐，66.15%常规饲料)［2］4w后，腹腔一次性注射STZ溶液25mg·kg－1，继续饲喂2w后，禁食不禁水12h，眼底静脉丛采血。采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖值，以空腹血糖>16.7mmol·L－1作为糖尿病大鼠。

1.4.2.2 分组及实验方法 取成模大鼠50只，随机分为五组，每组10只，分为模型组、三黄泻心汤高、中、低剂量组、阳性药物对照组，另取10只作为空白对照组。各组大鼠每天灌胃1次，三黄泻心汤低、中、高组灌胃剂量分别为5、10、20g·kg－1，模型组和空白组给予同等体积的蒸馏水，阳性对照药物为二甲双胍，灌胃剂量为160mg·kg－1。连续4w给药，第28d前大鼠禁食不禁水12h，眼底静脉丛采血，分离血清测定大鼠空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、胰岛素水平。TG采用酶法，TC采用终点法测定，血清胰岛素水平测定采用放免法。

1.5 统计学处理 采用SPSS 10.0统计软件进行统计分析，实验数据均以(±s)表示，组间比较用t检验。

2 结果

2.1 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血糖的影响 三黄泻心汤灌胃给药4w后，与模型组比较，高剂量组和阳性组血糖明显低于模型组(P<0.01)，中剂量组低于模型组(P<0.05)，高剂量组和阳性组血糖低于低剂量组，但高剂量组和阳性组之间无显著差异，模型组和低剂量组血糖均明显高于高剂量组(P<0.05)，提示三黄泻心汤能降低STZ致糖尿病小鼠的血糖。见表1。

表1 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血糖的影响(±s，mmol·L－1)

表1 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血糖的影响(±s，mmol·L－1)

注:与模型组相比，**P<0.01，*P<0.05。

组别 n 剂量 血糖浓度空白对照组10 － 5.92±0.31模型组 10 － 24.55±2.17阳性对照组 10 160mg·kg－1 12.35 ±2.62**高剂量组 10 20g·kg－1 13.83 ±1.94**中剂量组 10 10g·kg－1 15.34 ±3.23*低剂量组 10 5g·kg－119.11±2.98

2.2 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血脂的影响 三黄泻心汤灌胃给药4w后，与正常对照组相比，模型组TC含量显著升高(P<0.05)，TG含量极显著升高(P<0.01)。与模型组相比，三黄泻心汤中、低剂量组TC、TG含量下降，但差异均不显著;三黄泻心汤高剂量组的TC和TG含量均显著下降(P<0.05)。见表2。

表2 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血脂的影响(±s，mmol·L－1)

表2 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血脂的影响(±s，mmol·L－1)

注:与模型组相比，*P<0.05。

组别 n 剂量TC TG空白对照组10 － 4.8±1.6 1.5±0.6模型组 10 － 6.5±0.2 3.3±0.2阳性对照组 10 160mg·kg－1 3.9±0.5* 2.1±0.5*高剂量组 10 20g·kg－1 4.1±1.6* 1.9±0.7*中剂量组 10 10g·kg－1 4.6±0.3 2.8±0.3低剂量组 10 5g·kg－14.9±0.4 3.4±0.5

2.3 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血清胰岛素水平的影响 三黄泻心汤灌胃给药4w后，与模型组比较，高、中、低剂量组血清胰岛素明显降低，高剂量组达极显著水平(P<0.01)，中剂量组达显著水平(P<0.05)，但高剂量组和阳性组之间无显著差异，提示三黄泻心汤能降低STZ致糖尿病小鼠的胰岛素水平。见表3。

表3 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血清胰岛素的影响(±s，mIU·L－1)

表3 三黄泻心汤对糖尿病大鼠血清胰岛素的影响(±s，mIU·L－1)

注:与模型组相比，**P<0.01，*P<0.05。

组别 n 剂量 血清胰岛素空白对照组10 － 26.8±2.04模型组 10 － 37.1±3.01阳性对照组 10 160mg·kg－1 22.88 ±1.53**高剂量组 10 20g·kg－1 25.8 ±4.43**中剂量组 10 10g·kg－1 32.3 ±3.54*低剂量组 10 5g·kg－134.5±1.98

3 讨论

2 型糖尿病人常表现为胰岛素抵抗(Insulinre sistance，IR)、肥胖和糖耐量异常。胰岛素抵抗是2型糖尿病重要的发病机制之一，而过度肥胖，尤其是内脏性肥胖是胰岛素抵抗和2型糖尿病发展的一个重要的危险因素［2］。先给大鼠喂饲1个月的高糖高脂饲料(10.10%猪油，20.10%蔗糖，2.15%胆固醇，1.10%胆酸盐，66.15%常规饲料)，诱导出IR，然后腹腔注射低剂量(25mg·kg－1)STZ，导致胰腺代偿性分泌胰岛素的功能障碍，诱发高血糖症，通过对其胰岛素敏感性检测和肾脏病理学观察，表明其与2型糖尿病表现相符［3］。因此本研究选择高糖高脂饲料与链脲佐菌素联合应用造模并获得成功。

本实验结果显示，与模型对照组相比，中、高剂量组大鼠血糖明显降低，证实三黄泻心汤具有明显的降血糖作用，而其中20g·kg－1组效果最为显著，5g·kg－1组与10g·kg－1组相比降血糖作用不及20g·kg－1组，说明三黄泻心汤的降糖作用呈剂量依赖性。三黄泻心汤使大鼠血糖明显降低的同时，对血脂水平紊乱有一定的改善作用，说明三黄泻心汤对高脂饮食和链脲佐菌素引起的胰岛β细胞破坏有一定的抑制作用，对因血脂升高所造成的糖尿病的各种并发症可能具有一定的治疗作用。

［1］ 黄芳华.抗糖尿病中药新药临床前有效性评价与思考［J］.中国中药杂志，2008，33(1):95.

［2］ 杨维霞，梁宗锁，王四旺，等.染料木素对Ⅱ型糖尿病大鼠模型血糖和血脂的影响［J］.西北农林科技大学学报(自然科学版)2009，37(9):5.

［3］ 郭啸华，刘志红，李恒，等.高糖高脂饮食诱导的Ⅱ型糖尿病大鼠模型及其肾病特点［J］.中国糖尿病杂志，2002，10(5):290－294.