脑梗死患者血清NO及tNOS、iNOS的测定

吴晓华，闫金辉，杨晓晖

（沧州医学高等专科学校，河北沧州 061001）

脑梗死发病与多种因素有关，由于缺血缺氧，脑组织产生一系列病理改变，引发“瀑布式”自由基连锁反应，产生大量自由基，造成广泛且严重的生物膜脂质过氧化，使膜通透性增加，结构遭到破坏，导致神经细胞、胶质细胞和血管内皮细胞损伤。目前认为自由基是参与脑缺血性损害发生的重要因素之一[1]。血管内皮功能障碍是多种心脑血管疾病的共同病理机制，其突出表现为内皮依赖性血管舒张功能障碍，主要由NO减少及氧自由基增加所致[2]。本文中笔者检测急性脑梗死患者血浆一氧化氮（NO）及一氧化氮合成酶（NOS）含量的变化，进一步了解NO及其合成酶在脑梗死急性期的变化规律，探讨其对脑梗死发病过程的病理生理意义，有助于对脑梗死患者的诊断及康复治疗。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本组患者均来自于河北省沧州市人民医院神经内科2009年3月4日～2010年2月2日的住院患者，且所有病例均经过头颅CT或MRI检查确诊，诊断符合全国第四次脑血管病会议标准。其中，脑梗死组患者42例，男28例，女14例；年龄最大78岁，最小45岁，平均（67±8）岁。对照组18例均为血站健康献血员，其中，男7例，女11例；平均年龄（59±8）岁。所有脑梗死组患者的采血时间，最早为患者入院后第1天，最晚为入院后第24天，且均于清晨卧位时空腹抽取静脉血2 ml，于24 h内通过抗凝、3 000 r/min离心机离心15 min后提取血清，将每例患者血清均分装于4个EP离心管中，封存于-80℃冰箱中成批备用。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 采用上海7200型可见光分光光度计。NO和NOS试剂测定盒购于南京建成生物工程研究所。

1.2.2 检测方法 严格按照试剂盒说明书中的操作程序进行，为了避免反复冻融影响标本质量，笔者将NO、tNOS及i NOS所有指标统一测定，并且采用编号双盲的方法检测所有标本。按照试剂盒标注方法配制各种试剂，配置及测定步骤严格按照操作规程完成，应用分光光度仪550 nm，0.5 cm光径，采用分光光度仪比色法检测各管吸光度值。

1.2.3 计算方法 根据各测试管所测吸光度值，按说明书给出的计算公式计算NO、tNOS及iNOS的含量，结果分别以μmol/L、U/ml和 U/ml表示。

1.3 统计学处理

2 结果

脑梗死患者血清NO、NOS含量变化，见表1。与健康对照组比较，脑梗死组 NO 含量明显降低（P＜0.05）；tNOS 及 iNOS 含量无显著性差异（P＞0.05）。

表1 脑梗死患者血清NO、NOS含量变化（±s）Tab.1 Change of NO,NOS of the serum in the patients with cerebral infarction(±s)

表1 脑梗死患者血清NO、NOS含量变化（±s）Tab.1 Change of NO,NOS of the serum in the patients with cerebral infarction(±s)

与健康对照组比较，★P＜0.05，*P＞0.05 但有降低趋势，△P＞0.05 但有上升趋势

组别 NO（μmol/L） iNOS（U/ml）60.51±22.41★86.26±24.80脑梗死组健康对照组15.77±1.65△15.03±1.54 tNOS（U/ml）27.89±2.35*28.00±1.96

3 讨论

自从NO被认识以来，其在脑血管病发病中所起的作用一直是研究的重点。近来研究的结果有分歧，研究较为一致的观点认为NO是由NOS催化L-精氨酸生成的一种含氮化合物，可以使血管平滑肌松弛，且能抑制血小板聚集。大量研究表明，内皮细胞可以在生理条件下不断合成基础量的NO，并不断释放以抑制血管对收缩因子的反应，抑制血小板聚积和黏附，从而维持血管的舒张状态，保持生理水平所需的脑血流量[3]，但产生过多或过少的NO都将导致脑组织的病理性损伤[4]。

NOS是合成NO的关键因素，在脑缺血中发挥神经元保护和神经毒性的双重作用[5]。它有三种亚型，神经元型（nNOS）、内皮型（eNOS）、诱导型（iNOS），均已在中枢神经系统中得到实验证实，神经元型（nNOS）和内皮细胞型（eNOS）在生理状态下即有表达，统称为原生型酶（cNOS）。有多种细胞可产生NOS。在脑缺血时eNOS活性升高，从而引起NO生成增多，致缺血区脑血管扩张，改善缺血区血供，对缺血脑组织起到保护作用。相反nNOS、iNOS在脑缺血后起损害作用，nNOS在脑缺血较早阶段起损害作用，iNOS的损害作用发生在脑缺血稍后阶段[6]。

脑梗死患者血清NO含量的改变，国内报道不一。有研究表明，脑血管病急性期，脑组织缺血后可同时诱导内皮性NOS和神经元性NOS的表达及活性上调，并合成释放大量的NO，致脑梗死急性期NO升高[7]。也有研究报道，脑梗死组患者血浆NO含量较健康对照组显著降低，尤其在伴有高血压的脑梗死患者中更为明显[8]。本实验研究显示，脑梗死患者的血清NO含量显著降低。急性脑血管病患者均具有不同程度的脑动脉血管硬化，其中部分患者还合并有高血压疾病，这些患者的动脉内皮细胞受到损伤，合成和释放的NO减少[9]。当脑梗死急性发作时，大脑局部的组织出现缺血、缺氧及细胞肿胀，进一步加重了颅内血管内皮细胞的损伤，而缺氧不仅可直接抑制内皮细胞释放NO，还可产生超氧化物等自由基使NO灭亡，从而导致NO的合成和释放更进一步减少，导致血管痉挛，加重了脑梗死。

本实验显示NOS含量变化不显著，但是tNOS有降低趋势、iNOS有上升趋势。有报道提示，广泛分布于脑组织中的NOS受到NO的负反馈调节[10]。当NO含量降低时反馈性导致NOS的降低减缓或使其有所升高，但也有研究发现，在脑缺血亚急性期出现的炎性浸润等改变可以激活iNOS，而产生大量的NO，并且可促使非毒性刺激因素（感染、血压波动、脱水等）进一步加重脑组织损伤[11]，而通过应用iNOS抑制剂可阻断NO介导的毒副作用。本研究显示 NOS含量变化不明显，也可能是因为观察例数、时间限制所致。

有研究人员通过动物实验发现，NO含量于脑缺血病灶处显著增多，而多数报道表明，脑梗死患者脑脊液中的NO含量增多，血清中的NO含量减少[12]。本实验结果提示，急性脑梗死患者的血清NO含量下降，可能是由于脑梗死发生时血管内皮细胞受到损伤，致cNOS的活力下降，导致NO生成和释放减少。脑梗死形成过程中产生的大量氧自由基及超氧阴离子可与NO反应，生成过氧亚硝酸阴离子，从而缩短NO的半衰期[4]，致使NO含量下降。

本实验结果显示，脑梗死患者血清NO含量明显降低，NOS虽无显著性改变，但tNOS有降低趋势、iNOS有上升趋势，提示NO及其酶含量的改变参与了脑梗死的病理生理改变过程，促进了疾病的发生和发展。如果能把不同时期的含量变化规律进一步明确，并分期研究，且采取不同措施给予治疗，将会带来重要的临床意义。例如，已证实体内NO生成不足或NO信号的传导异常与脑血管等多种疾病的形成和发展关系密切，临床就可以开展并设计NO供体型药物的新药研究[13]。其重要的临床意义有待深入研究。

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