正交试验法优选清热明目颗粒的水提工艺

河北省邢台市眼科医院制剂室 杨存爱 (邢台 054001)

正交试验法优选清热明目颗粒的水提工艺

河北省邢台市眼科医院制剂室 杨存爱 (邢台 054001)

目的:优选清热明目颗粒的最佳水提工艺。方法:应用 L9(34)正交试验,以浸泡时间、加水量、提取时间、提取次数为考察因素,每个因素取 3个水平,并以黄芩苷含量和干浸膏重量为考察指标,进行回流提取,减压浓缩,优化提取条件。结果:3因素浸泡时间 A、加水量 B、提取时间 C影响显著,而提取次数 D影响不显著。结论:清热明目颗粒的最佳制粒工艺条件为 A1B2C2D2。即浸泡 1 h,加 8倍量水,回流提取 1.5 h,提取 2次。

清热明目颗粒;正交试验;黄芩苷;水提工艺

清热明目颗粒为我院纯中药复方制剂,由龙胆、黄芩、地黄、大黄、石膏、知母、天花粉、芦根、金银花等多味中药制成,具有清热解毒,消翳明目的作用,用于治疗急慢性葡萄膜炎、视网膜炎、急慢性结膜炎和各类角膜炎,疗效显著。其中黄芩为方中君药,黄芩苷为其主要活性成分。本制剂采用水提取,减压浓缩制备浓缩药液,经喷雾制粒而成。为发挥药物的最佳疗效,优化制备工艺,本实验采用正交试验对其提取参数进行优化,以浸泡时间、加水量、提取时间、提取次数为考察因素,以黄芩苷含量和干浸膏重量为考察指标,从而确定了清热明目颗粒的最佳水提工艺条件,为工业化大生产提供依据。

1 材料

大连依利特高效液相色谱仪,十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 (4.6 mm×200 mm,5μm);P230高压恒流泵,UV230紫外 -可见检测器;黄芩苷对照品 (中国药品生物制品检定所,批号 715-20001,供含量测定用);SNGT-12型全能真空干燥提取器 (湖南衡阳市雁翔制药设备厂);101-1型电热鼓风干燥箱 (上海阳光实验仪器有限公司);中药饮片 (邢台百顺康)甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 因素和水平的确定 根据浸提理论与预试验,选定浸泡时间 (A)、加水量 (B)、提取时间 (C)、提取次数(D)为考察因素,每个因素取 3个水平,结果见表1,并以黄芩苷含量和干浸膏重量为综合考察指标,设计正交试验。

表1 因素水平表

2.2 提取工艺 根据因素水平表,采用 L9(34)进行正交试验,按处方比例称取 9份药材,分别用水提取,过滤除渣,减压浓缩至适量,分别定容至 250mL,所得水煎液为供试品溶液。并测定供试品溶液黄芩苷的含量及干浸膏的重量。

2.3 干浸膏重量的计算 精密量取供试品溶液 50mL于已干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,再于 105℃烘箱中干燥 3 h,置干燥器中冷却 30 min,迅速称重,记录干浸膏重量,结果见表2。

2.4 高效液相色谱法测定黄芩苷的含量[3]

2.4.1 色谱条件:色谱柱:C18柱 (4.6 mm×200 mm,5 μm);检测波长:280 nm,流速:1.0mL/min;流动相:甲醇 -水 -磷酸 (47∶53∶0.2);进样量:20μL。在上述色谱条件条件下,分别取对照品溶液和样品溶液及阴性样品溶液进样。所得色谱图,黄芩苷与相邻其他组分峰分离完全,分离度为 12.43,保留时间为 23.10 min,理论塔板数为 26 860.35,阴性样品无干扰。

2.4.2 对照品溶液:精密称取黄芩苷对照品 15 mg,置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液,再精密量取 1mL置 10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得含黄芩苷为 30μg/mL的对照品溶液。

2.4.3 样品溶液:精密量取供试品溶液 5mL(相当于2.5 g颗粒)置 50mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用 0.45 nm膜过滤,作为样品溶液。

2.4.4 阴性样品溶液:按处方比例制备缺黄芩的阴性样品,依“2.4.3”项下制备阴性样品溶液。

2.4.5 线性关系考察:分别精密量取对照品贮备液 0.6、1.0、1.4、1.8、2.2mL置 10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得每 1mL含黄芩苷 18、30、42、54、66μg的对照品溶液。各精密量取 20μL进样,以上述色谱条件进行测定。以峰面积 (Y)与对照品质量 (X)进行线性回归,得黄芩苷的回归方程为 Y=88.75X-136.8(r=0.9 994,n=5),线性范围为 18～66μg/mL;结果表明,黄芩苷在相应范围内线性关系良好。

2.4.6 精密度试验:精密量取 “2.4.2”项下的对照品溶液,按上述色谱条件重复进样 5次,黄芩苷峰面积积分值的 RSD为 0.36%。

2.4.7 重复性试验:取同一样品溶液 6份,按 “2.4.3”项下方法制备样品溶液,以上述色谱条件测定黄芩苷的峰面积,计算含量,RSD分别为 0.38%。

2.4.8 稳定性试验:精密量取同一样品溶液,分别于0、2、4、6、8、10 h进样 1次,测定含量,结果表明,在10 h内黄芩苷的含量均无明显变化,RSD分别为 0.42%。

2.4.9 加样回收率试验:精密称取黄芩苷对照品 183.5 mg置 50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密量取 5mL置 50mL量瓶中加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为测回收率对照品溶液备用;精密量取已知含量的供试品溶液 2.5mL 9份,分别置 50mL量瓶中,再精密加入上述对照品溶液适量,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用 0.45 nm膜过滤,测定含量,进行回收率试验,结果平均回收率为 100.8%,RSD为 0.48%。

2.4.10 黄芩苷含量的计算:分别精密量取供试品溶液5mL,以 “2.4.3”项下方法制备样品溶液,计算供试品溶液的黄芩苷含量,结果见表2。

2.5 结果 分别记录黄芩苷含量和干浸膏重量,进行综合评分,对综合评分结果进行统计学处理,结果见表3。

表2 水提工艺正交试验结果分析表

表3 水提工艺方差分析

分析结果表明,各因素对水提工艺的影响程度依次为B>C>A>D,其中浸泡时间、加水量、提取时间对提取工艺有显著影响,而提取次数提取结果无显著影响。经直观比较分析,同时结合生产实际,优选出最佳水提工艺为A1B2C2D2,即用 8倍量水浸泡 1 h,回流提取 2次,每次1.5 h。

2.6 工艺验证试验 按处方称取各药材 3份,按选定的最佳工艺条件A1B2C2D2采用全能真空干燥提取器进行提取中试,平行制备 3份样品,测得黄芩苷的平均含量为 382 mg/mL,平均干浸膏重量为 2.75 g。可见,按最佳工艺提取有效成分含量处于较高水平,证明该工艺合理,重复性强。

3 讨论

①评价指标[2-3]:因黄芩为清热明目颗粒的君药,黄芩苷为其有效成分,是主要指标成分,所以在综合评分中,黄芩苷含量与干浸膏重量按 7∶3权重比来考察提取效果。并且评分时以各指标最大值为参数将数据进行归一化,采用加权方式综合评定,使评价指标更趋于合理化。②色谱条件:本实验以甲醇 -水 -磷酸 (47∶53∶0.2)为流动相测定黄芩苷含量,峰形好,分离度好,简单易行。③优选工艺:本实验采用L9(34)正交设计优选出清热明目颗粒的最佳水提工艺为:用 8倍量水浸泡 1 h,回流提取 2次,每次 1.5 h。该工艺稳定可靠,可作为该制剂工业化生产的依据。

[1]中华人民共和国药典委员会 .中国药典 (一部) [S].北京:化学工业出版社,2005.318

[2]周滢,张胜,曹佩雪,等 .石斛明目胶囊药材水煎醇沉工艺的正交试验 [J].中国医院药学杂志,2009,29(10):785-787

[3]樊莉,周世文,李聃丹,等 .正交试验法优选黄芪天麻胶囊的提取工艺 [J].中国医院药学杂志,2009,29(7):525-528

(2010-02-26 收稿)

R 284.2

B

1007-5615(2010)02-0037-02