髓过氧化物酶基因G-463A多态性与肺癌易感性关系的meta分析

滑峰 王竞 谷俊东 李书军 刘红雨 周清华

肺癌是目前在全球范围内对人类健康威胁最大的恶性肿瘤之一，关于肺癌的基础及临床研究已经成为肿瘤研究领域的重要内容[1,2]。对肺癌病因的研究已经明确，肿瘤易感性的不同是影响人群患病率的重要因素，因而对肺癌易感性的研究是当前肺癌研究领域的一个热点，主要研究方向是单核苷酸多态性与肺癌易感性关系的研究[3]。人髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）是一种I相代谢酶，广泛存在于肺巨噬细胞内，具有代谢烟草中的多环芳烃的作用，因此被认为与肺癌的易感性有关[4,5]。London[6]于1997年报告了关于MPO G-463A位点与肺癌易感性关系的研究后，近十余年先后有近30余位研究者报告了这一位点与肺癌易感性的关系的研究，但结果存有争议，而且研究人群、样本量、研究方法不一致。本研究采用meta分析的方法对已发表的研究结果进行系统评价，以进一步评价MPO-463位点多态性与肺癌易感性的关系。

1 资料与方法

1.1 文献检索 检索中国学术期刊网全文数据库（CNKI）、万方数据库、维普数据库、Pubmed、Ovid、Elsevier数据库，收集国内外公开发表的“关于MPO-463位点多态性与肺癌易感性的关系”的独立病例对照研究，中文文献检索词为：“髓过氧化物酶”、“MPO”、“myeloperoxidase”、“肺癌”、“肺肿瘤”，分别作为关键词、自由词、主题词进行检索；英文文献检索词为：“MPO”“myeloperoxidase”、“lung cancer”、“lung neoplasm”，分别作为主题词、自由词进行检索。为尽量避免漏查文献，对所有检索文献中提供的参考文献进行二次检索，相关综述文章、有关会议的摘要均被检索，以发现可能的合格研究。以上检索工作由3个研究者独立完成，文献检索截止日期为2009年11月18日。

1.2 文献纳入标准 ①研究方法符合流行病学要求；②基因分型方法可信；③文献提供基因型频数、比值比（odds ratio, OR）及95%CI；④研究人群为高加索人群及东亚人群。

1.3 文献剔除标准 ①研究方法不符合流行病学要求；②基因分型技术不可信，研究质量较差；③重复研究人群资料；④不能提供原始数据资料；⑤其他研究人群。

1.4 数据提取 3个研究者独立提取纳入的每个研究的相关数据，如有异议，与第4个研究者协商解决，然后汇总数据，提取以下内容：①文献作者、研究对象国家和种族背景、发表年代和杂志名称；②纳入研究总的例数，病例和对照组研究对象的定义和特点；③病例和对照组的等位基因和基因型的分布情况；④基因分析样本来源和采用的方法；⑤病例和对照组研究对象是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡。

1.5 统计学分析 按照meta分析的要求整理原始文献并摘录数据，对各研究的基因分布进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验。由于部分研究仅提供了GG、AG+AA两种基因型分布的频数，而且AA型在人群中的比例很低，本研究只进行了AA+AG/GG两种基因型比较的系统评价。应用统计分析软件Review manager 4.2分析AA+AG/GG的OR值及95%可信区间（95% confidence interval, 95%CI），绘制OR值分布图。对所得的OR值取自然对数In（OR），进行齐性检验，根据一致性结果选择相应的数据合并方法。若各研究结果间无异质性，则采用Mantel-Haenszel固定效应模型进行数据合并，计算合并OR及95%CI；若结果间存在异质性，则选用Dersimonian-Laird随机效应模型计算。进行敏感性分析，绘制漏斗图并采用Egger法对发表结果是否偏倚进行评估。

2 结果

2.1 纳入分析研究的一般资料 根据文献纳入标准，共纳入文献20篇，其中来自欧洲高加索人群报道13篇，中国人群报道3篇，韩国人群3篇，日本及高加索人群混合研究1篇，纳入文献的发表时间为1997年-2008年，病例诊断均符合WHO标准，基因分型均使用公认的、科学的检测方法。14项研究进行了性别配对，16项进行了年龄配对。一般资料见表1。

2.2 高加索人群MPO G-463A与肺癌关联性分析

2.2.1 meta分析结果 纳入数据的欧洲高加索人群13项研究累计病例5 381例，对照5 827例。通过对各研究的AA+AG/GG结果的异质性检验，得χ2值为25.17（P=0.02），认为有统计学意义，故采用随机效应模型进行分析得合并OR值为0.91（95%CI: 0.81-1.02），z值为1.68（图1）。

2.2.2 敏感性分析 换用固定效应模型，改用统计效应指标为Peto odds ratio，合并OR值未见明显改变，剔除样本量最大的Xu等[15]的研究后，计算合并OR值未见明显改变，提示结果稳定。

2.2.3 发表偏倚的评估 发表偏倚评估所得漏斗图的图形对称性差，应用SAS程序拟合Egger检验，提示有发表偏倚（t=2.67, P=0.02）（图2）。

2.3 东亚人群MPO G-463A与肺癌关联性分析

2.3.1 meta分析结果 纳入数据的亚洲人群7项研究累计病例1 558例，对照1 755例。通过对各研究的AA+AG/GG结果的异质性检验，得 值为14.83（P=0.02），认为有统计学意义，故采用随机效应模型进行分析得合并OR值为0.83（95%CI: 0.63-1.09），z值为1.35（图3）。

2.3.2 敏感性分析 改用固定效应模型计算，合并OR值为0.82，未见明显改变，改用统计效应指标为Peto odds ratio,合并OR值未见明显改变，剔除样本量最大的Park等[10]的研究后，计算合并OR值未见明显改变，提示结果稳定。2.3.3 发表偏倚的评估 发表偏倚评估所得漏斗图的图形基本对称，应用SAS程序拟合Egger检验，未见明显发表偏倚（t=-0.39, P=0.71）（图4）。

表 1 纳入分析的20项研究一般资料Tab 1 The characteristic of the studies included

图 1 高加索人群MPO G-463A与肺癌关联性分析森林图Fig 1 The forest plot of the meta analysis for the Caucasians

图 2 高加索人群MPO G-463A与肺癌关联性分析漏斗图Fig 2 The funnel plot of the meta analysis for the Caucasians

图 3 东亚人群MPO G-463A与肺癌关联性分析森林图Fig 3 The forest plot of the meta analysis for East Asians

图 4 东亚人群MPO G-463A与肺癌关联性分析漏斗图Fig 4 The funnel plot of the meta analysis for the East Asians

3 讨论

考虑到MPO G-463A在不同种族的差异分布（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp ref.cgi?rs=2333227），本研究只收集以欧洲高加索人群及东亚中日韩人群为研究对象的文献进行系统评价，检索到符合要求的文献28篇。其中重复报道文献3篇，2篇没有提供详细基因频数，2篇为系统评价，1篇研究质量较差，予以剔除。共计纳入研究文献20篇，其中高加索人群研究13篇，东亚人群研究6篇，1篇研究人群为高加索及日本人群[12]。分析各个独立研究样本人群的流行病学资料，可以看到纳入研究人群的性别、年龄、地域、吸烟状况、饮食习惯、职业暴露、肺癌病理类型等具有明显差异性，其中11项研究[6,7,11-14,20,22,24,25]的病例样本量小于300，距离遗传关联性研究对样本量的要求有一定差距，因此单个独立研究所得到的结果有可能会是假阳性或者假阴性。对两种人群发表偏倚的评价，从所作出的漏斗图形态及参考Egger法所计算出的t值，认为在高加索人群研究中有发表偏倚，但不明显，在东亚人群研究中没有偏倚。由于部分文献只给出了AG+AA基因型的频数，而且AA为少见基因型，本研究以AA+AG/GG的合并OR值为效应指标。

对高加索人群的分析，采用固定效应模型计算得到的合并OR值为0.94（95%CI: 0.87-1.02），异质性检验P值为0.02，改用随机效应模型，计算合并OR值为0.91（95%CI: 0.81-1.02），由于部分进行亚组人群分析的研究分类标准不一致，无法进行亚组人群的meta分析。剔除样本量最大的Xu等[15]的研究，结果无明显改变，提示敏感性分析得到的结果是稳定的。对东亚人群的分析，采用固定效应模型计算得到的合并OR值为0.82（95%CI:0.70-0.97），异质性检验P值为0.02，改用随机效应模型，计算合并OR值为0.83（95%CI: 0.63-1.09）。有3篇文献进行了亚组分析，但分组不同，而且样本量有限，所以未进行亚组人群的meta分析。剔除样本量最大的Park[10]的研究，结果无明显改变，提示敏感性分析的到的结果是稳定的。

Taioli等[14,26,27]对这一问题先后做了系统评价。其中Feyler于2002年第一次做了meta分析，对高加索人群分析计算的结果是0.82（95%CI: 0.66-1.02），共纳入研究6篇。Kiyohara仅仅计算了AA基因型的合并OR值为0.70。Taioli进一步研究了此问题，对纳入的15篇文献进行meta分析计算的合并OR值为0.91（95%CI: 0.84-0.99），研究人群主要为高加索人群。他利用其中的10篇文献[6,12-14,16,18-20,22,28]进行的pooled analysis得出的AG基因型OR值为0.88（95%CI: 0.80-0.97），AA基因型的合并OR值为0.71（95%CI: 0.57-0.88），但人群为混合人群，而且其中有2篇文献[13,20]采用的数据与公开发表文献上的数据有差异。总的来说，这些研究的结果与我们是一致的。

髓过氧化物酶是一种糖蛋白，主要存在于白细胞中，大量的体外细胞实验、动物实验以及以人体为对象的实验研究提示髓过氧化物酶的异质性可能与肺癌易感性具有潜在的关联[29-31]。通过对已发表文献的系统评价，我们认为髓过氧化物酶基因G-463A位点两种基因型在肺癌人群中分布具有差异性，但在总体人群中的潜在作用是微弱的，对单个基因多态性的研究，意义是十分有限的。