花卉害螨的采集和玻片标本的制作

张丽芳，瞿素萍，刘忠善，王继华

（1.云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所，云南昆明650205；2.云南出入境检验检疫局技术中心，云南昆明650228；3.云南省农业科学院花卉研究所，云南昆明650205）

花卉害螨属于节肢动物门，蛛形纲(Arachnida），蜱螨亚纲(Acari），具有个体小、繁殖快、适应性强、易爆发成灾等特点。园林花卉上的害螨分布广泛，种类很多，其中叶螨以危害叶片为主，成螨、若螨密集群居于受害叶片背面刺吸汁液，并吐丝结网，被害叶现白斑，轻的叶片枯黄，远看似火烧，危害重的全株枯死。害螨包括柑橘全爪螨PanonychuscitriMcGregor、 朱 砂 叶 螨 Tetranychus cinnabarinus Boisduva1、二斑叶螨Tetranychus urticae Koch等常见种类。瘿螨危害嫩叶幼梢、花，造成畸形或叶面粗糙，变黑褐色或锈色，有的形成虫瘿或毛毡，还传播植物病毒，造成更大损失。粉螨主要种类有罗宾根螨Rhizoglyphus robini Claparede和刺足根螨Rhizoglyphus echinopus(Fumouze et Robin）等，刺吸块根球茎，造成腐烂干瘪，影响地上部植株的生长[1-2]。我国危害园林花卉的螨类有100多种，其中危害较重的有40多种。现代蜱螨学的发展在欧洲是从19世纪末20世纪初才开始的，Kramer，Megin等人的工作对蜱螨学研究提供了基础，但是其分类现在还是处于开始发展时期[3]，有人认为现在蜱螨分类的混乱程度恰如100年前昆虫分类的情况。笔者介绍花卉害螨的采集和玻片标本的制作方法，以供螨类工作者和相关人员参考。

1 标本采集

采集叶片，叶芽和枝条上的螨类一般用拍打法，用毛笔或小木棒敲击枝叶，使螨类坠落于铺在下方的白纸或者白布上，或直接用毛笔轻刷受害部位，然后将其置入盛有75%酒精的小瓶中。该螨类一般很柔软，必须细心处理，避免损坏螨体，而且常有多种不同螨类混杂，在鉴定时需雌雄个体，所以采集数量要尽量多。为确认寄主植物，不混杂其他螨类，也可先将枝叶用塑料袋套入后再敲击，塑料袋要有细小的通风口，否则寄主植物容易产生水蒸气，使螨粘满塑料袋。

有些螨类隐藏在虫瘿、毛毡中，采集时应特别注意褐化、畸形的部份和色泽淡的毛毡，需要注意的是，虫瘿里不仅有瘿螨，而且还会有昆虫，应注意区分。危害轻的只需剪取叶片受害组织，发生重的可直接摘取被害叶，连螨和寄主一起放浸渍液（配方：95%酒精75 mL，蒸馏水20 mL，白糖添加至饱和，取澄清液备用）中保存。

块根球茎上的螨类由于会混杂有栽培基质，数量不多时，不易发现，可采用水浮法把土壤放在水或食盐饱和溶液中使螨类上浮进行收集。大量繁殖，数量较多时直接用肉眼就可看到有很多粉状小白点，借助放大镜，仔细观察，就会发现小白点在移动，此时可用毛笔粘水，直接挑取，置入盛有75%酒精的小瓶中。

采集前应准备好采集瓶和保存液。采集到的样本必须贴上正规的标签，写明采集时间、地点、虫体颜色、寄主植物及生长周期、周边环境及采集人等情况。

2 玻片标本的制备

花卉害螨体躯特别细小，为了便于观察和永久保存，制作清晰透明和形态完好的玻片标本十分重要。

2.1 永久性玻片标本的制作

2.1.1 软化及除去体内物质 将害螨在5%的氢氧化钠（NaOH）或氢氧化钾（KOH）溶液中煮沸5～10 min，柔软、色淡的只需在溶液中冷浸数5～7 h即可。在煮或浸之前，可在虫体不重要的地方用细针刺1个小孔，以便溶去虫体内物质。处理完毕后，倒去碱液，用清水充分清洗标本。

2.1.2 染 色 用清水充分清洗后即可用洋红溶液染色，染色可以深一些，因在下一步脱水过程中还要退去一些，变得淡一点。

2.1.3 脱 水 用不同浓度的酒精由低浓度到高浓度 30%，50%，70%，80%，85%，90%，95%，100%（无水酒精）逐步除去标本中的水分，最后放入二甲苯中。每次在不同浓度的酒精中浸5～10 min，无水酒精浸2次，第二次浸的时间可短一些，约2 min即可。然后将标本移入二甲苯液中进行透明，如二甲苯呈现混浊现象，说明标本脱水未净，需再回到无水酒精中处理，至完全脱水为止。

2.1.4 封 片 将在二甲苯液中经过透明的标本移到洗净的载玻片的中心处，滴上中性树胶，滴胶的量依标本及玻片的大小而定，然后慢慢的盖上盖玻片。玻片制好后放入45～50℃温箱中烘干，待中性树胶完全干固后，才可贴上正确标签，移出保存。

2.2 临时玻片标本的制作

制作临时玻片标本的目的，是为了较快地镜检，现做现用。通常是配制一种不必经过脱水，标本就能封片的胶，常用水溶性的封固液水含氯醛胶，其配方是：阿拉伯树胶15 g，甘油10 mL，水含氯醛100 g，蒸馏水25 mL，此法具有螨体透明迅速，简便易行的优点。制备临时玻片标本时，先取一滴胶液置于洁净的载玻片中央，用吸管吸取保存液中的标本至滤纸上，用蘸有胶液的解剖针，从滤纸上粘取标本至胶滴中，盖上盖玻片，然后放在酒精灯上加热至沸腾，螨体即伸展透明。玻片制好后放入40～50℃烘箱中烘烤3～5周，贴上标签即可。

3 讨论

花卉害螨采集最适宜的时间是高温干旱的季节，此时发生危害重，繁殖快，种类多，很容易采到大量标本，不过有时为了研究，也需要在不同季节或者是同一季节的不同时间，对同种植物观察和采集若干次。随着温室大棚花卉周年种植的发展，任何季节都可采集到花卉害螨，更方便了花卉害螨的种类研究。标本制作过程中将二甲苯液中经过透明的标本移到洗净的载玻片的中心处时，可以先用吸管吸取二甲苯液中的标本至滤纸上，用粘有胶液的解剖针从滤纸上迅速粘取标本至胶滴中，操作起来相对要容易一些，也可以直接用挑针挑取至胶滴中。总之，螨类由于虫体特别细小，制作标本较困难，各个步骤都很关键，需要熟练的操作，不断积累经验，才能制作出完美的玻片标本。

[1] Diaz A,Okabe K,Eckenrode C J,et al.Biology,ecology,and management of the bulb mites of the genusRhizoglyphus(Acari:Acaridae）[J].Experimental and Applied Acarology,2000,(24）:85-113.

[2] Fan Q H,Zhang Z Q.Revision of Rhizoglyphus Claparède(Acari:Acaridae）of Australasia and Oceania[M].London:Systematic&Applied Acarology Society,2004.374.

[3] 忻介六.农业螨类学[M].北京：农业出版社，1988.2-5.

[4] 中国科学院中国动物志编辑委员会.中国经济昆虫志 [M].北京：科学出版社，1995.13-16.