辽宁绒山羊人工授精技术

2010-08-15刘兴伟

黑龙江动物繁殖 2010年1期

关键词：种羊冻精子宫颈

刘兴伟

（辽宁省畜牧科学研究院，辽宁辽阳 111000）

1 正确挑选优质种公羊

1.1 体型外貌要符合品种特征

被毛全白、绒毛混生、有丝光；结构匀称，肢蹄结实；短瘦尾、尾尖上翘，角粗大无黑线，并向两侧螺旋形伸展。

1.2 体质强壮，健康无病

没有生殖疾病。例如：单睾、隐睾、布病等。四肢健壮，能正常参加配种工作。没有其它传染性疾病。例如：胸膜肺炎、结核、寄生虫感染、炭疽、口蹄疫等。睾丸大而有弹性。

1.3 生产性能的要求

对参加配种公羊的具体要求是：个体产绒量应达1 000 g以上，成年时绒细度在16.5～17.5 μm，平均体重应达到70～85 kg，保持在中上等膘情。

2 种公羊的饲养管理

在配种前30～40 d就应对种羊加强饲养，提高营养水平。蛋白质是保证种羊体质、提高精液产量所必不可少的。在配种期，种羊日粮粗蛋白质最低应保持在16%以上，有时应达18%～20%。除此之外，在配种时为恢复种羊体力使之精力更加充沛，还应补充一定量的动物蛋白质，如奶粉、鸡蛋等。在补充蛋白质的同时，还要注意维生素和矿物质元素的添加与平衡。对种羊生殖机能有直接影响的矿物质及维生素有：铜、锌、铁、硒、铬、锰、碘；维生素 A、维生素E和维生素B12等。补饲这些物质最便捷的途径是添加剂、多维制剂。

2.1 种公羊日粮

在春季或枯草期，可以参照下面的补饲水平饲喂：玉米1 000～1 250 g，豆饼400 g，骨粉占日粮总量的1%～2%，微量元素0.2%，多种维生素0.4%。

在秋季配种，种羊日粮标准可调整为：玉米750～1 000 g，豆饼 400 g，骨粉 1%～2%，微量元素0.1%～0.2%，多种维生素0.3%。

每种日粮在补喂时，还要加喂鸡蛋250～300 g；日粮分上下午两次饲喂，自由舔盐，保证有一定的放牧时间。

2.2 种羊的运动

运动可增强公羊体质，加快代谢，提高精子活力，但过度的运动则会影响种羊配种。一般要求在20～30 min驱赶运动1.5～3 km，每天早晨运动1次，休息0.5～1.0 h后参加配种。

2.3 采精强度

配种前每天排精1次，3～4 d休息1 d。配种开始后，可以每天采精1～2次，个别特殊情况可达3次，3～4 d 休息 1 d。

3 采精

3.1 采精前的准备工作

挑选发情母羊做为台羊。台羊必须发情良好，主要表现是鸣叫摆尾、兴奋不安、食欲下降，接受公羊爬跨，同时也偶尔爬跨其它母羊，阴道常有黏液流出。

3.2 剪毛和修蹄

采精前，要将公羊阴茎周围的被毛剪掉，避免污染精液。同时，还要对参加采精的公羊进行修蹄，使其运动自如，确保公、母羊安全。做好人羊亲和，调教好种公羊。

3.3 采精操作

采精员一般位于台羊右后方，右手握住假阴道与保温瓶接合部，食指托住保温瓶，放气阀朝向内侧，阴道口向上倾斜大约60°。公羊爬跨母羊前，重心放在左脚上，随着公羊爬跨，采精员一边下蹲一边将重心移到右脚上，迅速而轻快地将公羊阴茎导入假阴道内。公羊射精后，立即将假阴道口朝上竖起，一同送入化验室，先放气再关好放气阀，卸下保温瓶，盖上瓶盖，并做好区别标记。

3.4 采精注意事项

公羊抖动荐尾部，是其即将爬跨的先兆，而身体突然前冲，头向后上扬起，是其射精的标志。采精员据此应做好动作姿势的调整。与公羊接触的人员，特别是采精员不能穿色彩鲜艳的服装。采精室地面平坦但不光滑，不存放其它物品，室内环境要相对安静。禁止粗暴对待公羊，尽量避免能引起公羊比较疼痛的治疗。公羊多次抽动阴茎而不射精，很可能是温度不够高或压力不够大；公羊阴茎刚进入假阴道很快射精而射精量却很少，可能是内胎温度过高或初次参加采精的后备公羊；精液镜检时，发现密度明显下降而不成熟精子增多，很可能是采精过频或营养供应不足造成的。采精时要多观察多分析，针对不同情况，采取不同的措施予以纠正。

3.5 精液性状和品质检查

检查的内容有射精量、颜色、密度、活力、畸形精子百分率、顶体完整率、存活指数等。只有检查合格，方可冷冻和输精。

4 母羊发情鉴定

只有准确做好母羊发情鉴定，才能掌握发情火候，适时输精，提高受胎率。发情鉴定通常采用下列方法。

4.1 外部观察法

母羊发情后，兴奋不安，反应敏感，食欲减退，有时反刍停止，母羊之间相互爬跨，咩叫摇尾，靠近公羊，接受爬跨。

4.2 公羊试情法

公羊戴上试情布，放入母羊群中，开始嗅闻母羊外阴。发情好的母羊会主动靠近公羊并与之亲近，摇尾，接受公羊爬跨。试情公羊的比例以1∶20～30为宜，试情布应大小适中，常洗常换，保持卫生。

4.3 阴道检查法

发情母羊阴道充血、湿润，有透明黏液流出，子宫颈口松弛、开张，呈深红色。

4.4 公羊瓶试情法

在公山羊的角基部与耳根之间分泌一种性诱激素，以毛巾用力揩擦后，将毛巾放入玻璃瓶中。发情母羊对瓶中气味敏感，前去嗅闻。

5 人工输精

5.1 人工授精物资的筹备

假阴道、内胎、放气塞子、集精杯、保温瓶、烧杯、温度计、水浴锅、台羊架、镊子。脱脂棉、75%酒精、来苏水、高锰酸钾。工作台、显微镜、盖玻片、载玻片、平面皿。输精枪、手电筒、开膣器、脸盆、火炉、绳子、加热铝锅。液氮罐、油漆、小刷、记录纸、笔、pH试纸、天平、试情布。

5.2 精液稀释

目的是扩大精液体积，便于输精，同时调节渗透压和pH值，延长精子存活时间。精子常规稀释常用如下的一些稀释液：（1）、葡萄糖 3 g，柠檬酸钠 3 g，加双蒸馏水100 mL。取其溶液80 mL，加卵黄20 mL。再加青霉素10万单位、链霉素0.1 g。（2）、用1%氯化钠溶液100 mL加牛奶0.9 mL。（3）、用生理盐水90 mL，加鲜卵黄 10 mL。（4）、蒸馏水 100 mL、青霉素10 万单位、链霉素 0.1 g，奶粉 10 g，卵黄 10 mL。（5）、枸椽酸钠2.3 g葡萄糖1 g、磺胺粉0.3 g、卵黄10 mL，青霉素10万单位，链霉素0.1 g。精液高倍稀释时，常用如下的稀释液：（1）新鲜脱脂乳100 mL，青霉素10～20万单位。（2）葡萄糖3 g，加蒸馏水100 mL，柠檬酸钠1.4 g，青霉素10～20万单位，卵黄20 mL。（3）柠檬酸钠 2.3 g，蒸馏水 100 mL，蜂蜜 10 g，氨苯磺胺0.3 g。

精液稀释时，常可根据以下数据确定稀释倍数：一次输精剂量（0.1mL）、一次输精有效精子数（视为0.15亿）、射精量（mL）、原精液密度亿/mL。稀释精液应做到等温、防振动、防低渗。

5.3 鲜精的贮存和运输

精液稀释后，在20℃条件下能存活1～2 d，如果在此基础上继续缓慢降温到0～5℃时，精子最长可存活7天左右，保持受精能力的时间大约为2～3 d。

运送鲜精时要做到低温、防振、防污染、防腐射、防止时间过长（如20℃超过5～6 h，0～5℃超过12 h），运送的容器应保温，便于携带，不占空间。

5.4 输精

母羊外阴部消毒擦洗后，输精员左手拿开膣器，器柄与地面平行倾斜向上慢慢插入母羊阴道内，当接近子宫颈口向下旋转90°，张开开膣器。借助手电光源寻找子宫颈口，将精液输入子宫颈口内0.5～1.0 cm的深度，然后缓慢旋转抽出输精枪，最后用力拍打一下母羊后躯。开膣器用完后，酒精火焰消毒，再用生理盐水棉球擦净，为下一次输精时使用。

在输精时，要求做到以下几点。（1）配种室温度应保持在25～33℃。母羊保定后的姿势是前低后高，母羊背线与地平面大约成35°。在输精前，必须对母羊外阴进行消毒和擦洗。消毒可用0.1%的高锰酸钾溶液或1%的来苏水等，然后用干净毛巾醮清水擦洗。消毒和清洗所用毛巾要勤洗勤换，擦1只母羊换1个部位，保持外阴清洁。在抽出开膣器时，不要夹住子宫颈口的黏液。（2）对产道有炎症的母羊，应治愈后再输精。（3）公、母羊在配种前隔离饲养1.5～2月，在配种时才允许混群接触，从而刺激母羊发情排卵，即公羊效应。据统计，公羊效应具有如下一些作用：加快母羊性成熟，使母羊发情集中，提高受胎率，使配种时间缩短，大约30～40 d。

5.5 刺激母羊多排卵，提高产羔率

在配种前20～30 d对母羊加强营养，使母羊在短期内上膘，体重增加，促进母羊发情整齐和多排卵，即短期优饲。

精子活力不好，冻精低于0.3，鲜精低于0.6，畸形精子超过15%，一般不能用于输精，特别是有产道炎症时更不能输精，否则畸胎、死胎、弱胎增多，甚至导致母羊不孕。

输精时间和频率。精子保持受精能力的时间大约为30～48 h，卵子保持受精能力的时间为20 h，精子由子宫颈口运行到受精部位的时间为15 min至6 h。母羊排卵多在发情后期，对发情母羊每隔12～24 h输精1次比较适宜，一个情期可输精1～3次，一般1～2次即可。

输精剂量。一般每只羊输入稀释后的鲜精0.1 mL，一次输入有效精子数的数量，来自各方面的报道很不一致，从0.7亿～0.15亿，实际上也有可能低于0.15亿。

6 冻精的解冻与输精

6.1 冻精的剂型及解冻方法

山羊冷冻精液的剂型主要有细管、颗粒和安瓶3种，目前贮存和生产的主要是细管和颗粒两种剂型。细管冻精又分为0.25 mL/支和0.5 mL/支；颗粒冻精多数为1头份/粒（每粒为0.1 mL，含有效精子数约为 0.7～1.0亿 /mL）。

冻精的解冻方法：分为干解法和湿解法，安瓶冻精与颗粒冻精的解冻方法相同。

细管冻精的解冻方法。干解法：取细管冻精3～4支，放入42～43℃热水中摇晃约20 s，迅速取出。湿解法：用干净的试管取2.9%的柠檬酸钠溶液1 mL，水浴恒温到40℃，从液氮中取出细管冻精1支，迅速剪断于试管中（每段约0.8～1.0 cm），摇晃至全溶。

颗粒冻精的解冻方法。干解法：用干净的试管取颗粒冻精3～4粒，在43℃温水中摇动，至颗粒溶化到仅剩原体积的1/4～1/3时迅速取出，借手温到全溶。湿解法：用干净的试管取2.9%的柠檬酸钠溶液1 mL，水浴恒温到40℃。从液氮中取出颗粒冻精3～4粒，迅速放入试管中至全溶。

以上的解冻方法只是众多的解冻方法中挑选出的比较理想的一部分而已，就解冻温度而言，也可以有多种解冻法。

在实际操作中，也有用VB12做为解冻液的，并可以提高母羊的受胎率，具体机理不详。

6.2 利用冻精输精

冻精解冻后，由于经受了稀释、平衡时间的消耗及解冻、冷冻的温度冲击高渗环境的影响等变化，导致存活时间缩短，平均为10 h，个别可存活17 h，其寿命仅是鲜精1/3～1/2。所以，为确保精卵能够相遇结合，必须缩短输精间隔、增加输精次数，加大一次输入的有效精子数。一般情况下，如果早晨检查出母羊发情，就在早晨输配1次，10 h后再输1次，至次日早晨再补输1次。冻精解冻后活力达到0.3以上者，方可用于输精，有效精子数要求达到0.7～1.0亿，但也有报道，0.25～0.4亿/0.1 mL的有效精子输精效果没受明显影响，冻精输精受胎率平均为40%～55%。

6.3 冻精保存

冻精必须在-60℃以下的温度贮存，才能保证其品质，并非所有冷冻状态都可贮存冻精。保存冻精常用装有液氮的液氮罐保存，液氮罐有5 L、10 L、15 L、30 L等型号，内装2/3容量液氮，冻精存于底部。

7 母羊妊娠诊断

辽宁绒山羊母羊的发情持续期为1～3 d，发情周期平均为20 d，妊娠期为142～153 d。发情母羊配种后，经过1个发情周期不再发情，绝大多数是由于妊娠的原因。母羊妊娠后，被毛光亮、行动迟缓、食欲旺盛、爱上膘、性情温顺。个别母羊妊娠后会出现假发情现象，应注意鉴别。母羊妊娠至1.5～2月以后，外阴开始出现水肿，2～3月时，用手可在乳房前触摸到有一硬块即胎儿。为了对未孕母羊进行补配，早期妊娠诊断很有意义。早期妊娠诊断方法很多，现简要介绍一些便于操作容易掌握的几种方法。