尖锐湿疣患者皮损人乳头瘤病毒的基因分型及预后观察

陈天雷 ，张弦 ，徐文娟 ，阮建波 ，张霞 ，李俊杰 ，林邵华

（1..广东省东莞市厚街医院，东莞523945；2.广东省东莞市太平人民医院，东莞523905；3.广东省东莞市人民医院，东莞523000）

尖锐湿疣（condyloma acuminatum,CA）是由人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）感染泌尿生殖器肛门部位一种常见性传播疾病，近年来我国发病率越来越高。居性传播疾病第二位[1]。该病传播性强，潜伏期长，易复发等特点。到目前为止，已发现HPV基因型有100余种，以感染泌尿生殖器上皮为主的约有40型，且不同基因型HPV感染与生殖道侵袭性细胞损害密切相关[2]。我们应用核酸分子快速导流杂交基因芯片分型技术（Hybrin Max)对CA患者疣体皮损进行HPV的分型检测，并观察治疗后顽固性复发患者HPV型别情况。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 对象为2008年1月—2009年6月东莞地区医院皮肤性病科门诊就诊CA患者200例，所选病例临床上符合CA的诊断标准[3]。全部病例为发病后首次就诊病例，其中男145例，女55例，年龄18～60岁，平均35.5岁。严格活检取材法采集CA组织样本送检。

1.2 检测仪器及试剂 选用美国ABI-700实时荧光定量检测仪，香港凯普公司的HPV基因微阵列分型检测试剂盒和Hybrin MaxTM运用核酸分子快速杂交仪。达安公司DNA回收提取试剂盒。

1.3 HPV分型检测原理及实验步骤 本试剂盒是以凯普运用核酸分子快速杂交仪为平台，利用导流杂交的原理在已经固定好核算探针的低密度基因芯片膜上，可一次性快速检测至 21 种亚型，包括 13 种高危亚型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。5 种低危亚型：6、11、41、42、44。 3 种中国人群常见亚型：53、66和CP8304型。

实验步骤：严格按照试剂盒要求进行，湿疣组织标本DNA提取，PCR扩增，核酸分子快速导流杂交，按芯片上HPV亚型分布相应着色点判断，如出现2点或2点以上阳性即为多重感染。

1.4 治疗方法及预后观察 治疗方法是对所有病例采用同一或者相似治疗方案，应用电灼或CO2激光去除疣体；外涂莫匹罗星软膏；口服无环乌苷0.2g/次,5次/d；肌注干扰素300万U，隔日1次共7次。上述方案为1个疗程。

预后观察：术后第1个月每周复查1次，无复发者随后每两周复查1次，3个月后无复发者每月复查1次。期间若发现新发CA病灶或者醋酸白试验阳性亚临床感染病灶应再次手术。以最后1次手术结束为起始观察6个月，未发现新生CA病灶及醋酸白试验阴性者为临床治愈。

1.5 预后观察 基因检测分型后进行分组，同一亚型为一组，了解各组复发情况，总结分析首次治疗至观察随访6个月内复发3次或3次以上患者的型别请况，进一步探讨CA复发和型别是否存在密切关联。

2 结果

2.1 CA患者HPV检测阳性的型别情况 200例CA患者的标本检测HPV阳性153例，阳性率为76.5%。在156例阳性中检出15种型别，包括5种低危型的HPV6、11、41、42、44、及 10 种高危型的 HPV16、18、31、33、35、45、51、52、58、68。主要型别及所占比例如下：HPV11（32.68%、50/153）、HPV6（25.49%、39/153）、HPV16（16.34%、25/153）、HPV52（9.15%、14/153）、HPV33（7.84%、12/153）,HPV18(7.19%、11/153)。对多型感染者，各亚型的阳性率重复计算。其中单一亚型HPV感染111例，单一型感染率为72.55%（111/153）；混合型HPV感染42例，其感染率为27.45%（42/153），其中二重感染为33例，感染率为21.57%（33/153），三重感染6例，感染率为3.92%（6/153），四重及四重以上感染3例，感染率为1.96%（3/153）。

2.2 顽固性复发CA患者的型别情况 153例阳性检出型别后，同一型别为一组，首次治疗后随诊6个月～1年中，大部分型别组中均有部分不同次数复发CA患者，复发3次或3次以上CA患者有21例。顽固性高复发的21例CA患者的型别为 HPV16+18（5）例、HPV16+52（4）例、HPV16（4）例、HPV18（3）例、HPV6+11（2）例、HPV33（2）例、HPV52（1）例。

3 讨论

近年来随着通过分子生物学等技术的研究，已发现HPV有近100种，约有40种与生殖器和肛门区感染有关，包括低危型的 6、11、42、43、44 等型和高危型如 16、18、31、33、35等，低危型以6、11型常见，高危型以16、18型常见，而且不同HPV亚型感染其致病性和后果也有差异[2]。本研究应用凯普HPV分型检测技术，检测200例CA患者HPV感染，结果检测出15种HPV型别，以低危型6、11为主（HPV11+6共占58.17%），与国内外文献报道基本一致。有47例患者不能检测到HPV存在，可能是因本方法只检测到21种亚型，不在这范围的HPV感染，或者是这部分标本HPV含量低，该试剂盒敏感性不够，导致漏检。我们检出HPV 基因亚型依次为 11、6、16、52、33、18、58、42、45、31、35、41、44、51、68，以 11、6、16 为主要型别。吕晓萍等[4]报道重庆地区CA患者感染HPV的基因分型依次为11、6、16、18、52、58、31、33、35、66 为主要型别，型别类似。而洪少林等[5]报道北京地区CA患者感染的基因型别是HPV6型为主，感染率为70%以上，其次是11型。可能是地区及人群不同，感染HPV基因类型会有差异。

临床上治疗CA方法很多，但复发率仍较高，CA复发原因尚不完全清楚，目前复发原因主要报道有：某些人群HPV有易感性，女性患者多发与雌激素、孕激素有关；郭华阳等[6]认为CA患者真皮内含有HPV，也可能是复发原因之一；杨朝辉等[7]认为CA复发与细胞免疫功能显著异常，其中自然杀伤细胞活性降低，机体产生干扰素、白介素(IL)-2功能降低，细胞免疫功能下降等有关；杨庆勇等[8]认为CA的复发与治疗不彻底或亚临床感染有关。我们对顽固性复发的CA患者基因型别分析发现主要为混合型感染，特别是其内含有高危型HPV16、HPV18感染，应引起临床重视。混合型及高危型的基因型别可能和CA的复发有相关性。要全面了解和明确其相关性仍需多中心、大样本的研究。

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[2]赵健,杨英捷,廖秦平.导流杂交基因芯片技术在人乳头瘤病毒感染分型检测中的临床应用[J].中华检验医学杂志，2006，29（12）：1148-1151.

[3]吴志华.现代性病学[M].广东：广东人民出版社，1996：162-163.

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[5]洪少林,王家璧,刘跃华,等.北京地区尖锐湿疣患者皮损中人乳头瘤病毒的检测和分型 [J].中国医学科学院学报,2002,24(4):397-400.

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[7]杨朝晖,钱起丰，吴志华.尖锐湿疣患者自然杀伤细胞活性及与血清白介素-12关系的研究 [J].广东医学院学报，2000,18(3):233-234.

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