雏鸡应用益生素后胸腺和脾脏T细胞数量变化

吕 英，刘家福，郑世民*

（1.东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030；2.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030）

益生素（Probiotic）又称微生态制剂或活菌制剂，是一类活性微生物添加剂。是从动物或自然界分离、鉴定或通过生物工程人工组建的有益微生物，经培养、发酵、干燥、加工等特殊工艺制成的含有活菌并用于动物的生物制剂或活菌制剂。畜禽应用益生素后，能够改善肠道微生态环境，正常情况下，肠道内绝大多数为固有性菌群（如肠杆菌、链球菌和乳杆菌等），极少量为其他菌群（如葡萄球菌、嗜血杆菌等）。益生素能在消化道特别是肠道内发育、繁殖并发挥有益作用，促进畜禽生长发育，提高饲料转化率[1-2]，降低幼畜幼禽死亡率，防止消化道疾病，提高机体免疫力；作为新型绿色添加剂的益生素，由于其无残留、无污染以及不产生耐药性等特点，有其独特的优越之处，因而益生素已成为很有前途的新型饲料添加剂。随着人们食品安全意识的不断提高，微生态制剂以其高效的保健功能、无毒副作用、无残留、不环境污染等优点成为替代抗生素较为理想的产品[2-3]。

本试验应用酸性非特异性酯酶染色法系统地研究了雏鸡饲喂益生素后，其免疫器官细胞免疫动态变化，旨在揭示益生素对雏鸡免疫器官的细胞免疫增强效果，为益生素在畜禽饲喂中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

1日龄健康罗曼褐雏鸡150只，购自哈尔滨某孵化场。

1.1.2 益生素

益生素Ⅰ：广州市希普生物饲料有限公司生产，批号为粤饲添字（2001）031002号，主要成分乳酸菌、双歧杆菌和酵母菌。活菌数＞1010cfu·mL-1，按产品说明使用。

益生素Ⅱ：东北农业大学动物医学学院病理教研室研制。主要成分为乳酸菌和双歧杆菌。活菌数＞1010cfu·mL-1。

1.2 试验方法

1.2.1 试验设计及动物处理

1日龄罗曼褐商品公鸡雏150只，随机分为四组：即益生素Ⅰ组（简称PⅠ组，50只）、益生素Ⅱ（简称PⅡ组，50只）、对照组（简称C组，50只）。PⅠ和PⅡ组雏鸡于1日龄分别连续灌服益生素Ⅰ或益生素Ⅱ稀释液3 d，每天1次，C组同时灌服生理盐水。三组雏鸡严格隔离，分别饲养。

1.2.2 检测材料采取

PⅠ、PⅡ、C组雏鸡于应用益生素后1、4、7、10、18 d，每组随机抽取相同数量雏鸡心脏采血处死，快速采取免疫器官胸腺和脾脏，并作相应处理后低温保存备检。

1.2.3 检测指标和方法

免疫器官T细胞数量检测-组织切片及酸性非特异性酯酶染色法（ANAE）用100×10油镜，每张涂片查200个相应器官细胞，计数TANAE+淋巴细胞数。

1.2.4 数据处理

用SAS软件进行数据处理，分析组间差异。

2 结果与分析

2.1 应用益生素雏鸡胸腺T细胞数量的动态变化

结果见表1。

雏鸡应用益生素后，其胸腺皮质和髓质T细胞数量均不同程度高于对照雏鸡，于4～10 d差异显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01），说明益生素能够增强胸腺的细胞免疫，并在饲喂后4～10 d作用明显。益生素Ⅰ组又不同程度高于益生素Ⅱ组，于7 d差异显著（P＜0.05）。说明益生素Ⅰ的免疫增强效果强于益生素Ⅱ，益生素Ⅰ是商品益生素，菌种包被较好，菌种相对益生素Ⅱ数量较多，这可能都是其效果较好的原因。胸腺是鸡的中枢免疫器官，从结果可以看出，雏鸡在发育过程中，胸腺中T细胞不断发育成熟，细胞免疫逐渐增强，说明雏鸡在生长的过程中，免疫系统不断完善。同时，可看出，益生素能够促进免疫器官胸腺的成熟，能够增强细胞免疫。

2.2 应用益生素雏鸡脾脏T细胞数量的动态变化结果见表2。

表1 雏鸡应用益生素后胸腺T细胞数量变化Table 1Change of T cells number in thymus of the probiotics fed chickens（103·m-2）

表2 雏鸡应用益生素后脾脏T细胞数量变化Table 2 Change of T cells number in spleen of probiotics fed chickens

雏鸡应用益生素后，其脾脏T细胞数量均不同程度高于对照雏鸡，其中红髓和动脉周围鞘较对照雏鸡于4～10 d差异显著或极显著（P＜0.05或 P＜0.01），淋巴小结于 7、10 d差异显著（P＜0.05）；说明益生素能够增强脾脏的细胞免疫，并在饲喂后4～10 d作用明显。同时益生素Ⅰ组又不同程度高于益生素Ⅱ组，红髓和动脉周围鞘于7 d差异显著（P＜0.05），其他未见统计学差异。说明增强脾脏细胞免疫的效果，益生素Ⅰ强于益生素Ⅱ。商品益生素可能由于其工艺成熟，所以免疫增强效果强于自制益生素。

3 讨论与结论

胸腺是禽类的中枢免疫器官，是骨髓多能干细胞繁殖、分化为成熟T细胞的场所，成熟T细胞进入血液，随血液循环转移至脾脏等其他淋巴器官组织；脾脏作为禽类最大的外周免疫器官，对血液中循环抗原发挥免疫应答，免疫器官功能正常与否和机体全身免疫状态密切相关。T淋巴细胞主要承担动物有机体的细胞免疫，因此，其功能和数量异常直接影响着细胞免疫功能状态。

本研究发现，雏鸡应用益生素后，无论是中枢免疫器官—胸腺，还是外周免疫器官—脾脏的T细胞数量均较相应未饲喂益生素的对照雏鸡明显增加，表明益生素可增加免疫器官T细胞数量，增强机体细胞免疫水平。益生素Ⅰ组雏鸡的T细胞数量增加较益生素Ⅱ组雏鸡更加明显，说明益生素Ⅰ的细胞免疫增强效果强于益生素Ⅱ，这是因为益生素Ⅰ制作工艺精良使其食入后仍有大量活菌存在，体内有益菌群多于益生素Ⅱ，大量有益菌能够增强T细胞对抗原刺激的反应性。Harsharnjit等报道，长期服用益生素可减少胃肠道感染，因其有益菌不仅起到机械性防御作用，还会刺激机体产生非特异性免疫应答作用[4]。姚淑兰等发现，添加EM菌宝和加酶益生素不但均可显著提高贵妃鸡对粗蛋白的利用率，而且可显著增强机体抵抗力，说明免疫水平增强[5]。石宝明等研究了基础日粮中添加益生素对仔猪生长性能和肠道菌群的影响[6]。结果表明，益生素能够促进双歧杆菌的增殖，增强机体抵御疾病能力。Leuschner等研究发现，适当剂量及菌种的益生素，可提高动物机体整体状态和免疫水平[7]。Simone报道，乳酸杆菌能诱发Peyer氏淋巴结和全身（脾、外周血）的细胞免疫反应[8]。蔡访勤报道，酸性乳酸杆菌和嗜热性链球菌能促进脾细胞和胸腺细胞对Con A的增殖反应，提高巨噬细胞的C3b受体活性，增强其抗肿瘤作用[9]。Inooka研究发现，纳豆芽孢杆菌能显著提高仔鸡脾脏T淋巴细胞比例，增强鸡细胞免疫功能[10]。Karimi等报道，益生素能够改善动物肠道菌群平衡状态，提高机体免疫应答功能[11]。现已证实益生素能够产生对机体有益的物质，对动物健康有益，已有许多微生态制剂被普遍认可为完全安全的。

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[11]Karimi O,Pena A S.Probiotics∶Isolated bacteria strain or mixtures of different trains[J].Drugs Today(Barc),2003,39(8)∶565-597.