茶多酚对肝组织的抗氧化作用研究①

陈时宏

(厦门医学高等专科学校 福建厦门 361008)

我们日常摄取的茶叶,其中的成分茶多酚(tea polyphenols,TPs)具有极强的清除自由基的能力和显著的抗氧化活性。在Fenton试剂的作用下,组织匀浆产生的自由基*OH可引起亚细胞成分与膜过氧化,生成过氧化脂质(lipoperoxides,LPO)。自由基引发的病理和生化改变体现在多方面,包括肝脏的酶外漏和ATPase活性降低等。CCl4在肝脏中会激活肝内质网中NADPH-Cyto P-450系统,形成*CC13,从而损伤肝细胞并引起血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(SGPT)的升高[1]。本实验结合体内外模型,来评价茶多酚对肝组织受自由基损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 药品和试剂

含70%儿茶素(catechins,MW=281.36)的茶多酚为浅棕黄色粉末,由南京药物所植化室提供。硫代巴比妥酸(thiobarbituric,TBA)，四乙氧基丙烷标准品等试剂由市面购得。

1.2 仪器

721型分光光度计,高速分散器,冷冻高速离心机,电热恒温水浴锅等。

1.3 动物

昆明种小鼠[雌雄各半,体重(25±2)、gWistar大鼠[雌雄各半,体重(250±20)g],由中国药科大学动物中心提供。

图1 茶多酚对连续3d腹腔注射0.1%CC14的小鼠的血清SGPT和肝脏LPO的影响n=10，(± s）.aP>0.05,cP<0.01vs normal;dP>0.05,fP<0.01vs model

1.4 方法

(1)CC14致小鼠肝损伤[2]。小鼠连续3d腹腔注射0.1%CC14(用花生油稀释10mL/kg,每次在给予CC14前1h灌胃茶多酚20mg/kg(对照组以生理盐水代替)。在末次CC14中毒后16h摘眼球取血,分离血清,采用金氏法测定血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(SGPT);并测定肝脏的LPO含量。

(2)Fenton反应诱导肝匀浆的脂质过氧化反应[3]。反应溶液的终体积是0.55mL,内含10%的CCl4毒化小鼠肝匀浆液0.2mL,不同浓度的茶多酚50L(终浓度分别为0.4、0.04和0.004mg/mL)或等体积的蒸馆水,0.3mL Fenton试剂(FeSO4和H2O2)(正常对照组用等量的EDTA-Tris缓冲液代替)。用硫代巴比妥酸(TBA)法测定LPO,在532nm处测得吸收度;计算各管LPO的生成量和加入茶多酚后的抑制率。抑制率%=(LPOmodel-LPOTreated)/(LPOModel-LPONomal)×100%

1.5 统计分析

2 结果

2.1 对CC14致小鼠肝损伤的SGPT和LPO的影响

图2 在小鼠的肝组织匀浆中,茶多酚对Fenton反应所诱导的LPO生成的抑制作用。n=10，(±s).cP<0.01vs normal;dP>0.05,fP<0.01vs model

CC14中毒模型组小鼠血清中SGPT显著升高(308±42)U/100mL,约是正常生理盐水对照组(87±5)U/100mL的3.5倍(P<0.01)。茶多酚20mg/kg灌胃给药组的SGPT(233±40)U/100mL有明显减少(P<0.01)。(图1)本实验中,CC14中毒模型组的肝组织LPO值(59.8±5.9)nmol/g wet tissue与正常组(57.9±4.1)nmol/gwet tissue比较并无显著性差异(P>0.05),茶多酚20mg/kg灌胃给药组对小鼠肝脏LPO含量(58.1±5.8)nmol/gwet tissue无明显影响(P>0.05)(图1)。

2.2 对Fenton反应诱导的CC14中毒小鼠的肝匀浆脂质过氧化反应的影响

在Fenton反应体系中,模型组肝匀浆液LPO(491±61)nmol/g wet tissue增加约为正常对照组(130±24)nmol/gwet tissue的4倍(P<0.01)。0.4、0.04、0.004mg/mL的茶多酚对LPO的增加呈现显著的浓度依赖性抑制作用(P<0.01),其抑制率分别为73.6%,49.6%和33.0%,IC50为1.1×10-4mol/L(图2)。

3 讨论

茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称,其中儿茶素类主要由儿茶素(EC)、没食子儿茶素(EGC)、儿茶素没食子酸酯(ECG)、没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等几种单体组成。茶多酚在茶叶中的含量一般在20%左右[4]。我们对茶多酚进行了体内外肝组织受自由基损伤的保护作用的实验研究,结果证明茶多酚在体内外对肝组织均表现出一定程度的抗氧化作用。我们观察到茶多酚在体外的抗氧作用优于体内,这可能与茶多酚到达体内自由基损害部位的有效浓度及药物代谢等因素有关。

[1]Cai YJ,Ma LP,Hou LF,et al.Antioxidant effects of green tea polyphenols on free radical initiated peroxidation of rat liver microsomes[J].Chem Phys Lipids,2002,120(1～2):109～117.

[2]Hsu YW,Tsai CF,Chuang WC,et al.Protective effects of silica hydride against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice.[J].Food Chem Toxicol,2010,48(6):1644～1653.

[3]Wagner C,Fachinetto R,Dalla Corte CL,et al.Quercitrin,a glycoside form of quercetin,prevents lipid peroxidation in vitro[J].Brain Res,2006,1107(1):192～198.

[4]赵保路.Antioxidant effects of green tea polyphenols[J].科学通报(英文版),2003,48(4):315～319.