三棱提取物对 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用

李学臣,张 涛,魏晓东

(佳木斯大学基础医学院生物化学教研室,黑龙江 佳木斯 154007)

三棱是抗癌特效药莪棱蛇草系列中主要成分之一[1],三棱具有抑制肿瘤的功能[2],在抗癌中药的配方中起着非常重要的作用。药理学的作用主要表现为增强机体免疫力,改善血液循环,抑制癌细胞,使其不易在血液中停留、聚集,改善症状,缓解病情。但三棱对 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及抑制机制未见报道,我们用三棱的水提物作用于 H22荷瘤小鼠;通过疫器官重量法检测胸腺指数 /脾脏指数;免疫组织化学方法测定血浆中细胞因子 IL-2和 TN F-α的水平,研究三棱对 H22的荷瘤小鼠免疫调节作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健 康 6～ 8周龄 昆明 系小鼠 40只 ,体重 18～ 22g,雌雄各半。佳木斯大学动物实验中心提供。

1.2 瘤细胞株

H22腹水瘤模型鼠购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。

1.3 药物及主要试剂

中药三棱购于佳木斯大学医学院药店,经鉴定为三棱的干燥根茎;5-Fu购于佳木斯大学医学院药店,由上海旭东海普药业有限公司生产;肿瘤坏死因子和白细胞介素-2放免药盒购于北京福瑞生物工程公司。

1.4 三棱水提物的制备

三棱粉碎后加适量水,浸泡3h,煮沸提取 60min,收集药液,药渣再用水煮30min,合并2次药液,经旋转蒸发仪50℃减压回收得三棱水提物,真空干燥箱55℃干燥,得三棱水粗提物固体干粉。临用前蒸馏水稀释为含生药浓度：小剂量组3.9g/mL,大剂量组 7.8g/mL;5-Fu 2.5mg/mL。

1.5 H22荷瘤小鼠模型的建立

无菌操作腹腔穿刺抽取 H22腹水瘤模型鼠腹水,加入适量生理盐水 ,配成细胞悬液,细胞计数及测定细胞活力,活细胞率达95%。调整细胞密度为2×107/mL备用。用 75%乙醇对小鼠右腋下进行消毒,每只小鼠右腋下皮下注入0.2mL(含癌细胞4×106个)H22腹水瘤细胞悬液成荷瘤小鼠模型。

1.6 分组和给药

将 40只小鼠称重、编号随机分为 A、B、C、D 4组,每组各10只。A组为正常对照组;B组为5-Fu对照组;C、D组为荷瘤三棱水提高剂量组和低剂量组;于24h内开始给药,隔日称量体重,按体重给药,计量为：A组：生理盐水0.2mL/10g/d一次灌胃;B组 5-Fu0.2mL/10g/d一次腹腔注射组;C、D组分别给三棱水提液 0.2mL/20g/d和0.1mL/20g/d一次灌胃,连续10d,停药后第2天小鼠摘眼球取血后,断髓处死,剥离瘤体,取出胸腺、脾脏称重。

1.7 统计学分析

2 结果

2.1 三棱水提物对 H22的实体瘤小鼠的抑瘤作用

见表 1。由表1可见 ,各给药组肿瘤重量明显降低,与对照组比较均有差异 (P＜0.05),结果表明三棱水提物有抑制肿瘤生长作用,且抑瘤率有随药物剂量增高而升高的趋势。

2.2 三棱水提物对 H22荷瘤小鼠胸腺(脾)重量指数的影响

见表 1。由表1可见 ,各给药组脾腺指数和胸腺重量指数明显降低。

2.3 三棱水提物对 H22荷瘤小鼠血清 IL-2和 TN F-α含量的影响

见表 1。结果血清 IL-2和 TN F-α水平随用三棱剂量的增高而升高,各给药组与对照组比较均有差异(P＜0.05),表明三棱水提物可以提高 H22荷瘤小鼠血清IL-2和 TN F-α水平。

表1 三棱水提物对 H22荷瘤小鼠的抑瘤率、胸腺(脾)重量指数和血清 IL-2和 TNF-α含量的影响(±s,n=10)

表1 三棱水提物对 H22荷瘤小鼠的抑瘤率、胸腺(脾)重量指数和血清 IL-2和 TNF-α含量的影响(±s,n=10)

与对照组比较* P＜0.05,**P＜0.05。

组别 瘤重(g)抑瘤率(%)胸腺指数 (mg/10g)脾腺指数 (mg/10g)IL-2(ng/mL)TN F-α(ng/mL)对照组 2.36±0.42 - 21.96±2.77 96.33±12.56 5.89±1.16 1.26±0.24小剂量组 1.49±0.25* 36.83* 19.37±1.96* 67.83±10.91* 7.66±1.50* 1.61±0.32*大剂量组 1.43±0.19** 39.27** 12.51±1.23** 51.39±9.07** 9.54±1.83** 2.17±0.41**5-Fu组 1.31±0.14** 43.21** 6.20±0.85** 40.20±6.49** 10.74±1.79** 2.51±0.37**

3 讨论

中药三棱的化学成分复杂,药理作用和临床应用广泛。目前对三棱抗肿瘤作用的报道均局限于人肝癌细胞的体外研究方面,在体内的抗肝癌作用及机制未见报道,本文通过免疫机制研究三棱水提物对 H22肝癌荷瘤小鼠模型癌细胞的抑制作用。证明三棱的水提物能够提高血清中 TNF-a、IL-2水平 ,增强荷瘤鼠的免疫能力,从而发挥抗肿瘤作用,抑制肿瘤生长,抑瘤率随药物浓度的提高而提高。鉴于中药三棱能够明显提高 H22荷瘤小鼠的免疫能力抑制肿瘤增长,且毒性低,副作用小,因此三棱可作为抗肝癌的备选药。今后我们还将从诱导细胞凋亡、抗氧化作用等方面对三棱的抗肿瘤作用进一步研究,为今后三棱的研究和开发提供理论依据。

[1]王吉吉,张瑾峰,付桂芳.莪术、三棱对人肺癌细胞凋亡的影响 [J].首都医科大学学报,2001,22(4)：304-305

[2]李士怡,周一荻.莪术三棱白花蛇舌草对肿瘤细胞抑制作用的研究 [J].实用中医内科杂志,2006,20(3)：246-247