中药降脂1号对高脂血症大鼠抗氧化作用实验研究

江清林,代淑华,胡少伟,黄 展,国玉芝,张天英,辛 华

(1.佳木斯大学,黑龙江 佳木斯 154007;2.黑龙江省农垦第二医院,黑龙江佳木斯 154007)

高脂血症又称血脂异常和脂蛋白异常血症,主要是由于脂肪代谢或转运异常,使血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇升高,高密度脂蛋白胆固醇降低的血脂代谢紊乱性疾病,是常见的代谢和内分泌疾病之一。

1 实验材料

1.1 实验动物

Wistar大鼠 60只 ,雌雄各 半 ,体重 (180±20)g,鼠龄 9周 ,由佳木斯大学实验动物中心提供。

1.2 实验药物

中药降脂1号 60毫升 /袋(含生药 1g/mL),由佳木斯大学中医药研究所汤玉福教授提供,方剂主要由决明子、穿山龙、地骨皮等七味中药组成;阳性对照组药物力平之(非诺贝特胶囊)200毫克 /粒,法国利博福尼制药公司制造。

1.3 饲料

正常颗粒饲料的配制、高脂饲料配制、高脂乳剂配制参照江清林等方法[1]。

1.4 试剂与仪器

丙二醛试剂盒和超氧化物歧化酶试剂盒购于南京建成生物工程研究所。756紫外分光光度计(上海精密仪器厂),电子分析天平(沈阳龙腾电子称量仪器厂),电热恒温水浴锅(余姚市东方电工仪器厂),TDZ5-WS多管架自动平衡离心机(长沙湘仪离心机仪器厂),DY89-Ⅱ型电动玻璃匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司 ),可调式移液器 (浙江临海市华威分析仪器厂),BI2000图像分析系统(成都泰盟科技有限公司)。

2 实验方法

2.1 动物造模制备

清洁级 Wistar大鼠 60只,随机分为两组：正常对照组(12只)和高脂模型组(48只),正常对照组饲喂正常颗粒饲料,高脂模型组饲喂高脂饲料和采用高脂乳剂灌胃的方式促使大鼠血脂升高,实验至第18周末,高脂造模组大鼠中随机抽取12只大鼠,眶静脉采血,分离血清,测定血脂。结果表明高脂模型大鼠成功建立,可以进行药物实验。

2.2 分组与给药

在进行药物实验时 ,正常对照组大鼠12只,继续饲喂普通饲料,每天予蒸馏水灌胃(1mL/100g体重 ),高脂模型组大鼠48只,按随机原则分为4组,分别为：模型自然恢复组;中药大剂量组;中药小剂量组;西药对照组。每组大鼠均给予普通饲料饲养,其中,模型自然恢复组每天给予蒸馏水灌胃(1mL/100g体重 );参照《实验药理学》方法[3],中药低剂量组每天灌胃一次,剂量为0.6mL/100g,(相当于按体重折算正常成人每日量6倍量);中药高剂量组每天灌胃一次,每次剂量为1.2mL/100g,(相当于按体重折算正常成人每日量12倍量);西药对照组,将力平之以蒸馏水制成4mg/mL混悬液,每天灌胃一次,剂量为1mL/100g体重(按体重折算相当于正常成人每日量12倍量)。共持续4周。

2.3 取材

给药第 4周末,各组大鼠均禁食 16h,不禁水,于次日上午用乙醚全麻后,断头采血,取大鼠肝脏,用生理盐水清洗,滤纸吸干多余水分,迅速摘取肝组织0.3g,加入预冷的生理盐水,冰水中制成10%肝组织匀浆。另在肝脏最大叶距边缘1cm处取肝组织,约5mm× 5mm大小,浸泡于 10%甲醛中固定,常规石蜡包埋,切片。

2.4 检测方法

按试剂盒说明书操作,黄嘌呤氧化酶法测定 SOD活力,TBA法测定 MDA浓度。切片进行 HE染色,光镜下观察肝组织形态变化。

2.5 统计学处理方法

3 结果

见表 1。

表1 中药降脂1号对高脂血症大鼠肝脏 M DA的影响 (±s,n=12)

表1 中药降脂1号对高脂血症大鼠肝脏 M DA的影响 (±s,n=12)

各组与空白对照组比较,△ P ＜0.05,△△P＜0.01;各组与模型组组比较,*P＜0.05,**P＜0.01。

组 别 M DA(nmol/mgprot)SOD(U/mg)空百对照组 4.68±0.12 273.22±8.70模型组 8.74±0.74△△ 164.70±12.56△△中药高剂量组 4.99±0.56** 233.13±10.58**中药低剂量组 5.95±0.49** 196.16±6.47**力平之组 5.71±0.53** 238.58±8.44**

3.1 中药降脂1号对高脂血症大鼠肝脏 MDA的影响

模型组、中药小剂量组、中药大剂量组、阳性药物对照组与空白对照组比较肝脏 MDA明显升高 (P＜0.01),其中,中药小剂量组、中药大剂量组、阳性药物对照组肝脏 MDA值均有不同程度的降低 (P＜0.01),以中药大剂量组疗效最好,各治疗组组间比较无明显差异 (P＞ 0.05)。

3.2 中药降脂1号对高脂血症大鼠肝脏 SOD的影响

模型组与空白对照组比较,模型组肝脏 SOD值明显降低 (P＜0.05);而模型组与中药小剂量组、中药大剂量组、阳性药物对照组比较肝脏 SOD值均有不同程度的升高(P＜0.01),其中,中药大剂量组与阳性药物组升高较为明显,疗效接近,中药大剂量组疗效优于中药小剂量组。

3.3 各组大鼠肝脏组织学变化

3.3.1 空白对照组大鼠

见图1。肝组织结构正常,肝细胞排列整齐,肝窦清晰可见,肝索排列整齐,肝细胞无脂肪变性,细胞结构清晰,细胞质丰富,细胞核位于细胞中央。

图1 正常组大鼠肝组织病理切片(HE,×200)

3.3.2 模型组大鼠

见图2。肝组织重度脂肪变性,肝细胞细胞质内充满脂肪油滴,肝细胞内大脂滴将细胞核挤向一侧,肝窦缩小。

图2 模型组大鼠肝组织病理切片(HE,×200)

3.3.3 中药大剂量组

见图 3。肝组织结构基本恢复正常,肝窦清晰可见,肝索排列整齐,细胞结构清晰。

图3 中药大剂量组大鼠肝组织病理切片(HE,×200)

3.3.4 中药小剂量组

见图4。肝组织轻度脂肪变性,部分肝细胞发生脂肪变性,肝细胞胀大变圆,形态不规则,肝索结构尚存。

图4 中药小剂量组大鼠肝组织病理切片(HE,×200)

3.3.5 阳性药物对照组

见图5。肝组织轻度脂肪变性,部分肝细胞发生脂肪变性,肝细胞胀大,肝窦变窄,肝索结构尚存。

图5 西药对照组大鼠肝组织病理切片(HE,×200)

4 讨论

随着人民生活水平的提高,脂肪肝发病率逐年上升,且有低龄化倾向。肥胖、Ⅱ型糖尿病、高脂血症等均是非酒精性脂肪肝的易感因素。因脂肪肝与高脂血症关系密切,临床上常用降脂药物来治疗脂肪肝,但一些降脂药有可能会加重肝损伤,因此,开发兼有降脂和保肝双重作用的药物会更有利于脂肪肝的防治。目前认为,M DA在肝组织脂肪变和肝脏损伤方面起了十分重要的作用：MDA是过氧化脂质的降解产物,是常用的反映体内脂质过氧化程度的指标。M DA可作用于核转录因子к B(N F-кB),使致炎因子基因表达、释放增强,并启动黏附因子的转录,包括白细胞介素-8,细胞间黏附因子、肿瘤坏死因子-а(TN F-а)和选择素 E等[2]。MDA的两个功能基又可与线粒体的膜脂交联,使线粒体膜的流动性明显降低,干扰了脂肪酸的 β氧化[3]。本实验结果证实 ,中药降脂1号可有效降低肝脏 M DA含量,因此可有效缓解肝损伤和肝组织脂肪变性。而 SOD是有效抗脂质过氧化物酶,具有重要的防御自由基损伤作用,SOD是人体内清除超氧阴离子的主要酶,它能催化超氧阴离子歧化为 H2和 O2,其活性大小与抗氧化能力呈正相关。本实验结果显示,模型组大鼠肝脏 M DA浓度显著增加,而机体重要的自由基清除酶 SOD活性下降,表明模型组大鼠脂质过氧化水平增加,自由基清除能力下降 ,机体氧化、抗氧化状态失衡,而大、小剂量组中药均可显著降低大鼠肝脏 MDA水平,提高 SOD活力,表明中药降脂1号可增加大鼠肝脏抗氧化能力,降低脂质过氧化水平,减轻机体的氧化压力。从本实验的结果来看,与空白对照组相比,灌服大剂量中药的大鼠肝脏形态基本恢复正常,肝窦清晰可见,肝索排列整齐,细胞结构清晰,其效果明显优于力平之组,这说明 ,中药降脂 1号具有治疗高脂饮食大鼠非酒精性脂肪肝的作用,可考虑进行进一步的临床试验。

[1]江清林,季静勇,辛华,等.中药降脂1号对高脂血症大鼠血脂的影响 [J].黑龙江医药科学,2009,32(6)：38-39

[2]王夜明,曾秋棠,袁杰,等.氯沙坦抗动脉粥样硬化作用及对核因子к BmRNA影响的实验研究[J].中国药理学通报,2003,19(1)：44-47

[3]Mococei P,Cherubini A,Beal M F,et al.Altered mitochondrial membrance uidfl fluidity in AD brain[J].Neurasci Lett,1996,29(2)：129-135