乙脑灭活疫苗游离甲醛含量的测定

阎立英

(河北省唐山市怡安生物工程有限公司 河北 唐山 063020)

乙脑灭活疫苗生产过程中采用甲醛溶液进行灭活处理。甲醛已经被世界卫生组织确定为致癌和致畸物质,因而须控制制品中游离甲醛的残留含量,提高制品的安全性[1]。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 ①主要材料及试剂:0.05%甲醛对照品贮备液;品红亚硫酸溶液;混合酸溶液;乙脑灭活疫苗。②主要仪器:SPECTROUV-VISAUTO紫外 -可见分光光度计 Labomed,Inc,U.S.A。

1.2 方法 ①供试品:取甲醛含量约为0.005%供试品溶液1.0mL,置 50mL纳氏比色管中,加水稀释至 5.0mL,即为供试品溶液。加品红亚硫酸溶液 10mL,混合酸溶液 10mL,摇匀,在25℃放置 3小时,在波长 590nm处测定吸光度。②标准曲线:精密量取 0.05%甲醛对照品贮备液 10mL,置 100mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,制成0.005%甲醛对照品溶液。精确量取0.005%甲醛对照品溶液 0.5、1.0l、1.5、2.0mL,分别置 50mL纳氏比色管中,加水稀释至5.0mL,得到不同浓度即0.0025%、0.005%、0.0075%、0.0100%的标准品溶液。加品红亚硫酸溶液 10mL,混合酸溶液 10mL,摇匀,在 25℃放置 3小时,在波长590nm处测定吸光度。以甲醛对照品溶液的浓度(X)为横坐标,以相应浓度的吸光度(Y)为纵坐标作直线回归,将 X值、Y值输入计算机,应用统计学软件 STA1(14)进行数据处理,得标准曲线回归方程及相关系数。③将供试品溶液的吸光度代入回归方程,计算出供试品的游离甲醛含量。

2 结果

2.1 标准曲线(99%可信限范围) 取不同浓度的甲醛标准溶液,测定吸光值,重复 3次,相关系数在 0.9821～0.9976之间。表明甲醛浓度在 0.0025%～0.0100%范围内,甲醛标准溶液与吸光度具有较好的线性关系,见表 1。

表1 标准曲线回归方程及相关系数

2.2 6批乙脑灭活疫苗游离甲醛含量测定结果 应用该方法进行 6批乙脑灭活疫苗游离甲醛含量测定,每批疫苗检测 6次,结果游离甲醛含量均小于 0.01%,见表 2。

表2 6批乙脑灭活疫苗游离甲醛含量测定结果

3 讨论

标准溶液浓度的确定。三条标准曲线在0.0025%～0.0100%4个浓度下所测得的吸光度值在 0.038～0.598范围内,根据理论吸光度值在 0.3～0.7之间比较稳定,所测结果显示低浓度时的吸光度值偏低。但是由于乙脑灭活疫苗中游离甲醛含量极低,所以标准甲醛浓度还应在 0.0025%～0.0100%。因此要求操作人员在检验过程中一定要做到细心、准确、认真,将相关系数 r2控制在 0.98以上,以保证结果的可信度。通过 6批乙脑灭活疫苗游离甲醛含量测定的结果可以看出,甲醛含量均小于 0.01%,说明疫苗生产工艺可行,建议乙脑灭活疫苗游离甲醛含量质量标准小于 0.01%。

通过讨论及实验结果分析,说明游离甲醛含量测定方法用于乙脑灭活疫苗生产中测定残留甲醛含量是可行的。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].三部,北京:化学工业出版社,2005.34

[2]李湘鸣,漆德瑶.SPSS10.0生物医学使用指导[M].南京:东南大学出版社,2005.107-115