心脉龙对缺血再灌注损伤兔的保护作用

田昆仑 杨志华

大理学院基础医学院生理学与病理生理学教研室，云南 大理 671000

缺血后再灌注，不仅不能使组织、器官的功能恢复，反而加重机能结构的损害，目前研究认为其发生与体内超氧化物岐化酶（superoxide dismutase，SOD）活力，一氧化氮（nitric oxide,NO）水平变化有关［1，2］。心脉龙注射液（Xinmailong injecrion,XML）是我院药学院发明的国家二类新药（中药），其在临床上主要用于改善缺血导致的微循环障碍，对缺血再灌注方面的影响，目前研究尚少，本研究旨在探讨心脉龙注射液对低血容量休克缺血再灌注兔的保护作用及其机制。

1 材料和方法

1.1 动物模型

健康家兔16只，雌雄不限，体重1.8～2.5kg，本院动物室提供。3%戍巴比妥钠（30mg/kg）耳缘静脉注射麻醉，分离一侧颈总动脉，肝素化后（800цg/kg）颈总动脉插管连接三通和血压测定装置（PC-lab多道生物信号分析系统）。

分离双侧输尿管并插管，计数每分钟尿量。经三通管放血使血压在10min内由正常的16.2kpa降至5.3kpa，维持30min，失血量占总血量的50%。经颈外静脉快速回输自体血液的20mL生理盐水，外加100mL液体补充手术丢失的水分（1h内输完）。

1.2 分组和标本采集

输入自体血和等量盐水（I-R+NS）。分别于失血前（before ischemia，BI），I-R后30min、1h、2h、颈外静脉取血测定血浆SOD活力、NO代谢产物亚硝酸盐/硝酸盐（）含量、血液pH值，并计数相应时段每分钟尿量（mL/min）。

1.3 检测方法

SOD活力测定用黄嘌呤氧化酶法，试剂盒购自南京建程生物工程研究所。NO含量测定用比色法：待测血浆经沉淀蛋白质后，同Griess试剂进行重氮偶氮反应，其产物在548nm处有最大吸收峰，用亚硝酸盐做标准，721B型分光光度计测定含量，间接反应NO水平。

1.4 统计处理

数据均以±s表示，组内=组间比较采用t检验判断差异显著性。

2 结果

2.1 I—R时血浆含量变化及SM对其影响

2.2 I—R时血浆SOD活力变化及SM对其影响

表1 XML对血浆SOD活力的影响Tab 1 effect of xinmailongi injection on SOD activity of plasma(Nu/Ml，n＝8)

表2 XML对血液PH值的影响Tab 2 effect of xinmailong injection on blood pH（n＝8）

将兔随机分两组，XML组：缺血30min，再灌注时颈外静脉快速输入自体血和20mL生理盐水（XML加入生理盐水中，1.5ML/kg）（I-R+SM）。对照组：缺血30min，再灌时

由表1可见，I—R后30min、1h、2h均较BI明显下降(p＜0.01，P＜0.001）。SM注射液可有效防止SOD活力下降，I—R后1h已有所增加，2h明显高于对照组（p＜0.01）表1。

2.3 I—R时血浆pH值变化及XML对其影响

由表2可见，I—R克引起血液pH下降，对照组I—R2h已由BI7.34±0.02降至7.18±0.09（p＜0.01）。SM可防止pH值已开增高，2hpH值显著高于对照组（p＜0.01）。

2.4 尿量变化（mL/min）

缺血前，对照组0.15±0.03；XML组0.13±0.04，两组比较无明显差异（p＞0.05）.I-R30min,两组均无尿，XML组委0.05±0.03，两组比较有显著差异（p＜0.01）；I-R2h，对照组仍无尿，XML组0.08±0.02，两组比较有非常显著差异（p＜0.001）。

3 讨论

实验结果提示，免缺血再灌注后血浆NO-2／NO-3含量和SOD活力均逐渐下降；SM能够阻止NO-2／NO-3水平下降；增加pH值，改善循环血液状态，使尿量增加。

有研究证明［1，2］缺血再灌注时由于大量自由基产生，使SOD消耗增多，活力下降，同时使血管内皮细胞受损伤，NO合成释放减少，灭活加快，加之缺血氧致酸中毒，NO浓度进一步下降。NO为血管内皮细胞释放的内皮细胞衍生舒张因子，正常情况下不断产生进入血管平滑肌细胞激活鸟苷酸环化酶，使细胞内游离Ca2+水平降低，平滑肌松弛，血管舒张［3］。病理情况下，NO合成释放减少，灭活增加，血中NO浓度降低，输血管作用减弱，缩血管作用增加，使血管壁增厚，管腔狭窄，血流减少，加之血小板聚集，粘附并释放大量活性物质，导致微循环障碍，内脏血流减少，出现少尿或无尿。故缺血再灌注后血浆NO含量和SOD活力下降，互为因果，造成恶性循环。

心脉龙注射液是我院药物研究所研制的国家二类新药，有研究报道心脉龙注射液能抑制缺氧/缺糖诱导的神经细胞凋亡及钙超载，有神经细胞保护作用[4、5]，同时有对抗氧自由基、减少脑出血时神经细胞凋亡的作用和对缺血再灌注心肌有保护作用[3、4]。因此，心脉龙注射液通过增加血浆SOD活力，增强机体抗氧化能力。NO含量增加可以抑制纤维蛋白原与血小板结合，防止血小板粘附损伤的内皮或沉积在损伤的血管壁上，组织血小板与其它细胞聚集，同时解聚已聚合的血小板，而被激活的血小板能释放5-羟色胺，促进血管内皮细胞释放血管舒张因子NO[1]。NO本身具有抑制白细胞粘附、中和氧自由基而拮抗过氧化作用[5]，同时扩张血管，改善血液循环状态。试验中观察到XML组再灌注1h，家兔尿量明显增强，表明内脏血供开始恢复；血液pH值由再灌注后30min7.24±0.07逐渐增至7.31±0.04，也提示缺血再灌注后引发的酸中毒有所纠正。实验结果提示，心脉龙注射液对缺血再灌注兔有一定保护作用。

[1] Hazem A,Irce PG,Carhal JK.Nitric oxide(Endonthelium derived relaxing factor)attenuates revascularization induced lung in jury[J].J Surg Res，1994（57）：39－43.

[2] Suznki J.The protective effect of combined administration of anti-oxidants and perfluorchemicals on cerebral iachemia[J］.Stroke，1984（15）：672－674.

[3] Vallance P,Collier J,Moncada S.Effects of endothelial derived＆127;nitric oxide on peripheral arteriolar tone in man［J］.Lancet，1989（8670）：997－999.

[4] 田昆仑，苏娟，等.心脉龙注射液对肝缺血/再灌注损伤脂质过氧化的[J].中华临床医药杂志，2003，17(4)：7－8.

[5] 田昆仑，苏娟，等.心脉龙注射液对骨骼肌缺血/再灌注损伤的保护作用[J].中外健康文摘，2008，5(3)：331－333.