Diego血型基因在江西地区汉族人群中的频率分布

肖 莉，吴 红，李国良，孙 瑜，熊 莉，唐 绮

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

195 5 年Layrisse等在委内瑞拉的1例新生儿溶血病患儿母亲血清中发现抗Dia，12年后，Thompson发现了对偶的抗Dib[1]，Dia和Dib都能引起输血反应与新生儿溶血病[1]。本研究采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术，随机检测江西汉族献血者Diego血型的Dia和Dib基因分型，取得了相应基因频率资料，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 DNA样本 受检样品取自江西地区汉族随机无偿献血者200名。ACD抗凝全血300μl，使用美国TBG公司试剂盒抽提基因组 DNA，DNA浓度在60ng/μl左右，分离纯化的DNA于-20℃冻存备用。

1.2 Dia和Dib抗原基因分型 采用PCR-SSP技术特异性扩增基因片段，试剂盒由美国GT公司提供，分别鉴定Dia和Dib基因，基因分型特异性引物PCR反应内对照引物的顺序见表1。

表1 分型特异性引物及内对照引物顺序

1.3 扩增条件 95℃ 5min；95℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 90s 循环30次，72℃5min，扩增产物直接点样于2%的琼脂糖凝胶电泳，使用0.5×TBE缓冲液，以10V/cm 20min，凝胶成像分析仪记录拍照结果，每管设有内对照引物，产生429bp的产物，用于监测PCR反应是否正常。特异性扩增产物为139bp和129bp，根据是否产生特异性扩增产物指定相应基因型。

1.4 统计分析 Hardy-Weinberg平衡验证采用χ2检验。

2 结果

共检测200例，查出2种基因表现型，分别为Dia-b+196例，和 Dia+b+4 例，Dia+b-及 Dia-b-未检测出，Dia基因频率 0.01，Dib基因频率0.99。χ2检验观察值与期望值无显著差异(P＞0.05，见表2)，符合Hardy-Weinberg分布。

表2 江西地区人群Diego血型系统分布

2 讨论

Diego血型系统的抗Dia和Dib抗原均能引起输血反应与新生儿溶血病[1]，两种抗原相比较，抗Dia有很强的表达，可以引起新生儿溶血病，而抗Dib比较少见。因此在输血反应原因分析时应考虑到Diego血型系统的不配合性。

本次调查Diego血型系统在江西地区分布结果表明，Diego血型表现型为Dia-b+196例，和Dia+b+4例，Dia+b-及Dia-b-未检测出，Dia基因频率0.01，Dib基因频率0.99，与国内文献[2]报道相符。Dia+b-及Dia-b-未检测出可能与我们此次检测标本量有关，亦可能是本地区不存在这两种表现型，有待今后做进一步的验证。

[1]刘达庄.免疫血液学[M].上海科技出版社,2002:81-82.

[2]刘孟黎.Diego血型基因在西安地区汉族人群中的频率分布[J].西安交通大学学报,2003,24(4):348-349.