金龙胶囊对肺腺癌A549生长能力的影响的研究

吕永丰 陈清霞 梁丹

肺癌是我国第一大癌，其治疗方法多样，但其中不少治疗方法存在着不同程度的副作用，中医药在预防不良反应方面有明显优势。金龙胶囊(JinLong Capsule，JCL)由鲜守宫、鲜金钱、白花蛇等动物药组成，具有中医整体调节、扶正荡邪、滋阴、破瘀散结、解郁通络及中药“生者尤良”的优点［1］。经多年治疗肿瘤的临床经验及实验室研究表明，其对多种肿瘤都有良好的治疗作用。大量临床研究表明，金龙胶囊具有抑制肿瘤生长、抑制肿瘤复发转移、合并放化疗解毒增效，肿瘤镇痛，增强机体免疫功能，增强机体抗病能力等功效。本实验拟采用肺腺癌A549进行JCL抑制肺癌细胞生长研究［2］。

1 材料与方法

1.1 药物制备 JLC金龙胶囊是我国第一个正式批准使用的鲜动物药制剂，为守宫、蕲蛇等鲜动物制剂，由北京建业公司提供。其呈黄色粉末状，易潮解，每次临用前用蒸馏水配成混悬液备用。

1.2 细胞培养 人肺腺癌细胞株A549(中山医科大学动物实验中心提供)。实验设置4组:对照组(A)、低剂量组(B)、中剂量组(C)和高剂量组(D)。将液氮保存的A549细胞冻存管放入37℃恒温箱中，融化后低速离心，去上清，PBS液漂洗一次，接种于培养瓶中，使用10%胎牛血清的RPMI 1640培养基，放置于5%CO2，恒温37℃培养箱中培养，当细胞生长达到对数生长期后，取对数生长细胞进行实验。将细胞悬液调整为了5×105/ml，接种于24孔培养板，每孔2 ml。实验各组含不同浓度的JCL(低剂量组0.01 mg/ml，中剂量组0.02 mg/ml，高剂量组0.04 mg/ml)，对照组不加药，每组设6个平行孔。

1.3 细胞生长曲线绘制 采用细胞计数法与给药第1～7天每日检测各组细胞浓度。每孔重复检测三个样本，取均数记录为每天的数据。

1.4 凋亡指数检测 采用原位末端标记法(TUNEL法)，检测肿瘤细胞凋亡，检测程序按TUNEL试剂盒说明书进行，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替TUNEL反应液作阴性对照。

2 结果

细胞生长曲线(图1、2):给药组生长曲线明显较对照组平缓，并与给药剂量呈显著相关性。

A549细胞体外培养

各组生长曲线比较

凋亡指数(AI)=(凋亡细胞数/瘤细胞总数)×100%。凋亡细胞形态要符合下述特点:①单个细胞;②胞质呈桔红色且收缩;③胞核致密深染色或为核碎片;④周围无炎症反应及坏死。JLC对A459细胞凋亡指数的影响从实验结束后的可见:给药组凋亡指数明显高于对照组，凋亡指数与给药剂量呈正相关，差异有统计学意义见表1。

通过以上结果发现，JLC对肺癌A549细胞的增殖能力有显著抑制作用并能诱导肿瘤细胞凋亡，作用呈剂量相关性。

3 讨论

金龙胶囊是我国第一个正式批准使用的鲜动物药制剂，以守宫、白花蛇等为原料，经超低温破碎及冻融处理，使细胞内各种有效成分充分释放，并在低温下迅速进行生化技术处理而制成。临床广泛用于肺癌、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、白血病等的治疗［3］。金龙胶囊的抗癌原理，目前认为是使Th细胞上调，Ts细胞下调，提高抗癌免疫力，其功效为补益气血，破瘀散结，解毒通络［4］。

表1 JLC对A549细胞凋亡指数的影响

化疗是治疗晚期恶性肿瘤的重要手段之一，但化疗的严重毒副作用往往是患者难以坚持治疗的主要原因。金龙胶囊能增加巨噬细胞产生TNF的能力，具有提高免疫功能和抗肿瘤的双重作用［5］。同时有药理学研究证明，金龙胶囊可减轻CTX对肝脏及造血系统的毒性反应［6］。国内多家综合性医院联合对300例原发性肝癌患者进行了双盲、对照试验，结果同样证实金龙胶囊能提高患者CD4+T细胞，降低CD8+T细胞，其在免疫调节方面有非常有效地作用。同时大量临床研究表明，金龙胶囊具有抑制肿瘤生长、抑制肿瘤复发转移、合并放化疗解毒增效，肿瘤镇痛，增强机体免疫功能，增强机体抗病能力等功效。本研究从细胞学角度对JLC在肺癌的治疗进行了初步探索，结果发现一定浓度的JLC有显著的抑瘤杀瘤作用，并有显著的剂量相关性。由此，我们可以预见金龙胶囊在肺癌治疗领域将有光明的前景，但是中成药成分复杂，治疗机理多样，还需要研究者们不断地深入探讨。

［1］程艳红.生者尤良 金龙无量-我国首例抗癌鲜动物药金龙胶囊上市后再评价获突破性进展.首都医药，2004，13:44-45.

［2］林显敢，谢德荣，姚和瑞，等.金龙胶囊对晚期非小细胞肺癌患者CD4/CD8和自然杀伤细胞活性的影响.新医学，2003，34:8-9.

［3］赵冬梅，石永进，关大创，等.“金龙胶囊”抑制HL-60细胞生长并诱导细胞凋亡.中国医药学报，2002，17(6):346-348.

［4］贾立群，李学，万冬桂，等.金龙胶囊的免疫双向调节作用.北京医学，2005，27(9):550-552.

［5］郝仙娣，周哲，李树新.金龙胶囊抑瘤及配合化疗减毒作用的观察.中国肿瘤临床与康复，1998，5(增刊):40-42.

［6］郝仙娣，周哲，李树新.金龙胶囊对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究.中国肿瘤临床与康复，1998，5:37-39.