非洛地平片在人体内药动学与药效学的相关性研究

李文艳，杨佳，姚佳晨，钱忠直，毕开顺

（1.上海市浦东新区公利医院药剂科，上海市 200135；2.沈阳药科大学药物分析教研室，沈阳市 110016；3.国家药典委员会，北京市 100061）

非洛地平（Felodipine）是第2代二氢吡啶类钙离子拮抗药，通过抑制小动脉平滑肌细胞外钙的内流，增加冠状窦血流量，降低全身及冠状动脉血管阻力，使血压下降，具有长效、不良反应少等优点[1～3]，临床上用于轻、中度高血压的治疗。现笔者采用液-质联用法对非洛地平的血药浓度进行测定并研究其药动学，另监测受试者在服药后规定时间的动脉血压和心率（HR）等药效指标，研究非洛地平的体内药动学及药效学过程的相关性。

1 材料

1.1 仪器

2010EV LC-MS联用仪（日本岛津公司）；CAY-1型液体快速混合器（北京长安仪器厂）；WM-2H型无油压缩机（天津医疗仪器厂）；TGL-16C离心机、TDL-40B离心机（上海安亭科学仪器厂）；SK250H超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；TG-328A分析天平（上海天平仪器厂）；欧姆龙上臂式血压计（日本欧姆龙株式会社）。

1.2 试药

非洛地平片（北京协和药厂，规格：每片10 mg，批号：H19980034，有效期：20100331）；非洛地平对照品（中国药品生物制品检定所，纯度：99.7%，有效期：2011年8月）；内标：尼莫地平对照品（中国药品生物制品检定所，纯度：99.8%，有效期：2011年5月）；甲醇为色谱纯，乙醚、正己烷、氢氧化钠为分析纯，水为双重蒸馏水。

2 方法

2.1 色谱及质谱条件

色谱柱：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），保护柱（大连中汇达公司）；流动相：甲醇-0.1%甲酸（84∶16）；流速：0.8 mL·min－1；柱温：30 ℃ 。离子源：电喷雾离子化（ESI）源；电喷雾离子化（CDL）温度：250℃；加热块温度：200℃；雾化气（N2）流速：1.5 L·min－1；检测电压：1.6 kV；正离子方式检测；扫描方式：选择离子监测（SIM）；用于定量分析的离子分别为m/z 406（非洛地平）和m/z 441（尼莫地平）。在选定的色谱条件下，血浆中非洛地平峰形良好，与内源性杂质分离完全。非洛地平和内标尼莫地平的保留时间分别为6.4、4.4 min。LC-MS色谱图见图1。

图1 LC-MS色谱图A.空白血浆；B.空白血浆+5 μg·L－1非洛地平对照品+内标；C.受试者服药4 h后血浆样品+内标；1.非洛地平；2.尼莫地平Fig 1 LC-MS chromatogramA.blank plasma；B.blank plasma+5 μg·L－1felodipine control+internal standard；C.plasma sample of 4 h after medication；1.filodipine；2.nimodipine

2.2 试验溶液的制备

准确称取非洛地平对照品适量，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制备成相当于非洛地平浓度为200 mg·L－1的贮备液。另准确称取尼莫地平对照品适量，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制备成相当于尼莫地平浓度为50 mg·L－1的贮备液，再稀释成浓度为20 μg·L－1的内标溶液。

2.3 血浆样品处理

取血浆500 μL，置于10 mL具塞试管中，依次加入内标溶液50 μL、1.0 mol·L－1NaOH溶液100 μL、乙醚-正己烷（4∶1）2.5 mL，涡旋混合3 min，4000 r·min－1离心5 min，取上清液置于另一试管中，空气吹干，残留物加甲醇100 μL溶解，超声（58 kHz，250 W）1 min，涡旋1 min，12000 r·min－1离心3 min，取上清液20 μL进样分析。

2.4 标准曲线的制备

取空白血浆500 μL，加入非洛地平对照品贮备液适量，制备成相当于非洛地平浓度为 0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg·L－1的模拟血浆样品，按“2.3”项下方法操作，进样分析，记录色谱。以待测物浓度（C）为横坐标，待测物与内标的峰面积比值（A）为纵坐标，用加权（W＝1/X2）最小二乘法进行回归，得回归方程为：A＝0.1940C+0.02935（r＝0.9948）。结果表明，非洛地平血药浓度在0.2～20.0 μg·L－1范围内线性关系良好，定量下限为0.2 μg·L－1。

2.5 回收率及精密度试验

分别制备0.5、2.0、10.0 μg·L－13种浓度的模拟血浆样品各6份，按“2.3”项下方法操作；另除不加系列对照品溶液和内标溶液外，其他按“2.3”项下方法操作，残留物以相应浓度的系列对照品溶液溶解，进样分析，以2种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。3种浓度下平均提取回收率分别为81.9%、82.7%、88.9%，RSD分别为14.4%、11.5%、14.9%。另分别于同日内连续测定5次及5 d内每日测定1次，计算日内和日间精密度，结果日内、日间RSD均小于14.3%，符合人体药动学研究的要求。

2.6 药动学研究

2.6.1 受试者选择：10名男性健康受试者，年龄（22±3）岁，体质量（70±5）kg，身高170～175 cm。全面体格检查结果良好，血、尿常规，肝、肾功能及心电、心率、血压均在正常范围内。试验前14天及试验期间未服用其它任何药物。试验期间禁烟酒。所有受试者在入组前均签署知情同意书，该知情同意书和试验方案经辽宁中医药大学附属第二医院伦理委员会讨论批准通过。

2.6.2 试验方案及血样采集：10名受试者禁食12 h后于次日早晨8∶00时空腹用温开水200 mL单剂量吞服非洛地平片10 mg，并于服药后4 h统一进餐。于服药前0 h及服药后0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24、48 h时各抽取静脉血5 mL，分离血浆，于－20℃冰箱保存，供血药浓度测定用。

2.6.3 数据处理：用DAS2.0药动学模块程序处理药-时数据。

2.7 药效学研究

2.7.1 药效指标的选择：选择收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、HR和平均动脉压（MAP）作为药效测定的指标。

2.7.2 药效测定：药效数据分别于服药前0 h及服药后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、10、12、24、48 h时测定，即每次采血的同时测定受试者卧位SBP、DBP、HR和MAP，取其平均值作为药效结果。

3 结果

3.1 药动学结果

10名健康受试者单剂量口服非洛地平片10 mg后，平均血药浓度测定结果见表1。用DAS2.0药动学模块程序处理药-时数据，显示其符合二室模型，平均药动学参数见表2。

表1 非洛地平不同时间点的平均血药浓度测定结果（n＝10，±s）Tab 1 Mean plasma concentrations of filodipine in 10 healthy volunteers at different time point（sn＝10，±s ）

表1 非洛地平不同时间点的平均血药浓度测定结果（n＝10，±s）Tab 1 Mean plasma concentrations of filodipine in 10 healthy volunteers at different time point（sn＝10，±s ）

C/μg∙L-1 00.69±0.241.46±0.731.86±0.802.66±0.684.14±1.555.06±1.525.84±1.234.07±0.872.64±0.781.87±0.791.36±0.730.84±0.470.26±0.07时间/h 00.511.522.5346810122448

3.2 药效学结果

10名健康受试者单剂量口服非洛地平片10 mg前、后的平均药效学结果见表3。

3.3 血药浓度与药效相关性

以不同时间血药浓度平均值（Y），分别对ΔSBP（X1）、ΔDBP（X2）、ΔHR（X3）、ΔMAP（X4）的平均值进行回归分析，得回归方程分别为：Y＝－3.284+0.7007X1（r1＝0.614，P＜0.01）；Y＝－4.354+1.368X2（r2＝0.9856，P＜0.01）；Y＝9.305+1.3252X3（r3＝0.9077，P＜0.01）；Y＝0.9336+0.4044X4（r4＝0.5686，P＜0.01）。其中ΔSBP＝SBPt－SBP0，即服药后不同时间测得的SBP平均值减去服药前测得的SBP平均值的绝对值。其它药效指标类推。

表2 10名健康受试者口服非洛地平片10 mg后的平均药动学参数（n＝10，±s）Tab 2 Mean pharmacokinetic parameters of filodipine in 10 healthy volunteers after oral administration of 10 mg filodipine table（tn＝10，±s ）

表2 10名健康受试者口服非洛地平片10 mg后的平均药动学参数（n＝10，±s）Tab 2 Mean pharmacokinetic parameters of filodipine in 10 healthy volunteers after oral administration of 10 mg filodipine table（tn＝10，±s ）

±s 3.88±0.355.94±1.4561.73±15.5467.62±16.090.73±0.3315.43±4.15参数tmax/h Cmax/μg·L－1 AUC0～48/μg·h·L－1 AUC0～∞/μg·h·L－1 Ka/h－1 t1/2/h x

表3 10名健康受试者口服非洛地平片10 mg前、后的平均药效学结果（n＝10，±s）Tab 3 Mean pharmacodynamic indexes in 10 healthy volunteers after oral administration of 10 mg filodipine table（tn＝10，±s ）

表3 10名健康受试者口服非洛地平片10 mg前、后的平均药效学结果（n＝10，±s）Tab 3 Mean pharmacodynamic indexes in 10 healthy volunteers after oral administration of 10 mg filodipine table（tn＝10，±s ）

时间/h 00.511.522.5药效346810122448 SBP/mmHg 109±6110±11109±10108±8112±6112±7113±9108±9106±8107±11114±7111±11114±7113±8 DBP/mmHg 81±786±1376±777±1176±774±776±872±1067±1372±974±1278±981±1181±10 HR/次·min-1 80±1274±880±1379±1182±1375±672±774±976±975±577±675±971±874±5 MAP/mmHg 90±494±587±1287±888±687±486±487±880±684±1387±1089±692±892±10

服药后的药效指标与未服药时的相应指标进行统计分析，结果发现用药2、2.5、3、4、8 h的DBP均有明显下降（0.01＜P＜0.05），用药6 h的DBP有显著下降（P＜0.01）。

4 讨论

本文以获得的试验数据进行药效学/药动学关联模型研究[4，5]，研究中发现非洛地平的药动学符合二室模型；药效学不符合典型的S形Emax模型[6]，药动学和药效学不符合直接连接和间接连接的药效学/药动学关联模型[7]，说明模型机制不适于非洛地平药物的血药浓度与效应研究。

本文对非洛地平在不同时间的血药浓度与SBP、DBP、HR、MAP进行相关回归分析，相关系数分别为0.6146、0.9856、0.9077、0.5686，因而药效与血药浓度的相关性依次为DBP＞HR＞SBP＞MAP，提示临床医师应用非洛地平时是否得到满意疗效，应首先分析DBP的变化情况，并考察HR的变化。

本研究发现服用非洛地平2～8 h时间范围内，DBP下降明显（P＜0.05或P＜0.01），从而可以初步确定非洛地平的有效血药浓度约为2.64～5.84 μg∙L－1。本研究结果可指导临床应用非洛地平的血药浓度监测和疗效观察分析。

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