中医药治疗慢性疮疡实验研究概况

慢性疮疡包括中医所称的“臁疮”、“褥疮”、“顽疮”等疾患,是临床难治性疾病之一。它的严重性和发病率的增加引起国内外学者的高度重视。其主要病理机制是局部有效循环血量相对不足, 局部组织营养状态差,抵抗力低下，在此基础上出现反复感染形成恶性循环，故创面难以愈合。中医药治疗慢性难愈性溃疡具有自身的优势和特点，近年来很多学者对中药治疗疮疡的作用进行了实验性的研究，在揭示外用中药愈创的机制方面已初见成效。

1 促进创面的血液循环和对血管生成的影响

局部有效循环血量不足是慢性溃疡难以愈合的直接原因，因而促进创面的血液循环对于促进创面愈合非常重要。

张颖等[1]研究发现枳实提取物可以改善血液循环，调和气血的作用,有消滞散瘀、通经止痛之功，从而有利于伤口愈合。洪晓华等[2]研究表明表明，归知糖疽颗粒有促进糖尿病大鼠皮肤溃疡模型皮肤溃疡创面愈合的作用，降低血糖、改善微循环障碍作用是其治疗该病的关键。席建元等[3]通过实验证实改善局部血液循环,是象皮生肌散促进家兔皮肤溃疡模型生肌长皮作用的机理之一。阙华发等[4]探讨补研究提示补益气血方剂如四君子汤、四物汤和八珍汤均能上调血管内皮因子表达水平,诱导血管新生,在一定程度上改善局部组织的缺血状态,促进创面修复愈合。韩旭等[5]研究发现，蜂蜡软膏能明显提高SD大鼠慢性皮肤溃疡创面新生毛细血管数，从而后改善创面微循环，加速组织修复过程。

2 对创面生长因子的作用

表皮细胞生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子-β、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子等在创伤愈合过程具有重要的作用,它们可以影响创伤修复过程中细胞的增殖、迁移、细胞外基质的合成和释放等，生长因子含量的减少将影响愈合过程[6-8]。

复黄生肌愈创油膏,是唐汉钧教授长期治疗慢性皮肤溃疡的经验方,王林扬等[9]探讨了其对醋酸可的松造成SD大鼠慢性皮肤溃疡模型碱性成纤维细胞生长因子mRNA的生成、表皮细胞生长因子mRNA表达水平的影响，结果表明其促进慢性皮肤溃疡创面修复的机制与其上调碱性成纤维细胞生长因子mRNA的生成、表皮细胞生长因子mRNA表达水平，促进细胞增殖有关。裴宪武等[10]通过观察不同创面的组织学变化、碱性成纤维细胞生长因子的表达和创面的愈合率来探讨紫草油促进创面愈合的分子生物学机制，结果提示紫草油可能是通过提高创面组织碱性成纤维细胞生长因子的表达来完成创面的修复过程。宋清华等[11]观察到，积雪草主要成分积雪甙可以促进血管内皮细胞生长因子 mRNA的表达,有利于伤口的愈合。王振宜等[12]用生肌化瘀方对SD大鼠背部全层皮肤缺损创面TGF-β1、TGF-β3水平进行动态影响研究，结果发现生肌化瘀方有调节创面TGF-β1、TGF-β3分泌的作用，以益于加速创面愈合、减少瘢痕形成。温肾健脾方由黄芪、茯苓、肉桂、当归、刺五加组成, 曹永清等[13]研究其对慢性创面愈合的影响及可能作用机制，结果提示：温肾健脾方有促进大鼠慢性难愈创面修复的作用,其机制与调节细胞周期,上调EGF、TGF-β1细胞因子蛋白表达水平。

3 对金属蛋白酶及Ⅰ、Ⅲ型胶原的研究

国内外对慢性皮肤溃疡治疗的研究多着眼于各种生长因子，但是临床试用的效果并不理想，其主要原因是慢性难愈性创面中有大量的蛋白酶，如金属酶，分解了伤口细胞分泌的内源性生长因子或给予的外源性生长因子。在创面组织愈合中,胶原代谢的结果直接影响创面的修复质量,其中起主要作用的是Ⅰ、Ⅲ型胶原。Ⅰ型胶原起支架作用,Ⅲ型胶原决定胶原纤维的直径大小和弹性好坏,Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的比值关系到最终的修复结果[14]。

董莉等[15]采用体外养创面肉芽组织成纤维细胞，以乳鼠皮肤成纤维细胞作对照，加入生肌方、化瘀方及生肌化瘀方大、小剂量药物血清，检测成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结果表明，生肌方能够明显提高创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原含量；化瘀方能够降低创面成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原含量，生肌化瘀方大、小剂量组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与正常组比较差异均无显著性，因此认为生肌化瘀方能够促进创面修复，其可能的作用机理是通过调节Ⅰ、Ⅲ型胶原的比值来调控Ⅰ、Ⅲ型胶原代谢，达到创面愈合及抑制瘢痕生长的目的。袁亮等[16]以生肌红粉膏作为中医祛腐生肌法的代表药,对家兔创伤感染性创面模型进行换药,动态对比观察祛腐药在换药过程中对创面金属蛋白酶-1，金属蛋白酶-3(MMP-1、MMP-3)、细胞凋亡、创面溶菌酶含量的影响。观察发现:生肌红粉膏能够提高创面MMP-1、MMP-3、创面溶菌酶含量、并促进创面成纤维细胞原位凋亡。从而认为其祛腐生肌的可能机理是促进金属蛋白酶MMP-1、MMP-3的活性,增强巨噬细胞溶菌酶作用以及刺激局部细胞凋亡等,促进局部腐烂坏死组织的清除,从而达到祛腐作用。盛巡等[17]通过观察Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值,并观察金属蛋白酶-1、-13(MMP-1、-13)、金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平及MMP-1、-13与TIMP-1比值来研究疡愈涂剂促进糖尿病迟缓愈合伤口的修复作用及其分子机制，研究表明疡愈涂剂可能通过调节影响胶原代谢的MMPs(金属蛋白酶)、TIMPs(金属蛋白酶抑制剂)表达平衡,促进胶原的合成和沉积,从而加速创面的愈合。

4 调控创面修复过程中TGF-β1信号转导分子修复基因Smad3等的表达

生长因子(表皮细胞生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子-β、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子)参与调控创伤修复的全过程。生长因子通过与细胞膜上特定的高亲和性受体结合而启动其活性,然后通过信号转导而发挥作用[18]。

秦海洸等[19]采用改良付氏大鼠模型为研究对象, 研究补虚祛瘀法促进慢性难愈性创面愈合的机理,实验发现动物造模给药第18天时,复黄生肌愈创油膏组TGF-β1表达明显高于生理盐水组,而修复蛋白Smad3分子的表达明显低于生理盐水组, 作者认为复黄生肌愈创油膏在瘢痕形成重塑期的是通过对TGF-β1→Smad3信号转导通路的调控作用,来促进创面的修复。阙华发等[20]以糖尿病大鼠背部全层皮肤缺损开放性创面为模型，探讨益气化瘀方(生黄芪、太子参、桃仁、地龙为主)对糖尿病溃疡大鼠Smad3、Smad4表达的影响，蛋白质印迹(Western blot)检测结果显示，益气化瘀中药能明显促进糖尿病溃疡大鼠的创面愈合，下调Smad3、Smad4的表达水平是其作用机制之一。

5 对纤维结合蛋白(fibronectin, FN)的影响

FN是一种高分子糖蛋白, 与胶原具有特别的亲和力，参与伤口愈合的全过程，FN含量的提高有利于创伤愈合。

黄灶华等[21]通过实验研究发现,复黄膏可使创伤大鼠伤口愈合时间明显缩短,还可显著提高创伤大鼠血清及肉芽组织中纤维结合蛋白含量,提示该药对血清及肉芽组织中FN含量有一定的调节作用,其提高血清及肉芽组织中的FN含量可能是促进伤口愈合的机制之一。曹永清等[13]研究发现, 温肾健脾方亦可促进间质FN的表达。

6 对创面氨基酸含量的影响

创面营养对于愈合起一定作用，不可忽视。王林扬[22]研究复黄生肌愈创油膏促愈作用，发现复黄生肌愈创油膏组肉芽组织中天冬氨酸、苏氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸11种氨基酸含量与模型组相比, 差异有显著性意义，提示复黄生肌愈创油膏可能是通过影响肉芽组织中有关氨基酸的含量以促进创面的良好愈合。

7 调节创面免疫功能

机体免疫功能的增强有利于创面的愈合.罗宇慧等[23]通过金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌感染所致的大鼠疮疡模型,证实祛腐生肌软膏可增加补体C3、IgA及IgM的含量，增加脓性分泌物中溶菌酶含量，并增加胸腺指数及脾脏指数的作用，从而增强机体免疫功能，促进创面的愈合。马忠丽等[24]发现，敛疡散对实验动物的特异性免疫和非特异性免疫功能均具有增强作用,表现为巨噬细胞百分率和吞噬指数均明显地提高,这是其对慢性皮肤溃疡的修复的作用机制之一。

8 对溶菌酶、pH值的影响

钟勇萍等[25]将实验性家兔进行疮疡造模，探讨复方苍耳虫油膏促进疮疡愈合的机理，实验结果表明，复方苍耳虫油膏能有效地改善疮面pH值,增加疮面溶菌酶含量,加速愈合。昌兰芳等[26]用黄及疮疡膏对大鼠疮疡模型进行治疗研究，观察脓液溶菌酶的含量、脓液的变化及伤口的愈合情况，结果表明，黄及疮疡膏能显著提高脓液溶菌酶的含量，促进脓液排出，加速伤口愈合，为有效的疡科外用药。

9 其它研究

张甘霖等[27]研究发现血余蛋黄油能够促进表柔比星致小鼠皮肤溃疡疮面结痂,缩短愈合时间;其作用机制与其能够促进疮面表皮细胞及胶原修复,降低疮面组织脂质过氧化损伤,提高抗氧化能力有关。李萍[28]等观察疡愈涂剂对链脲佐菌素(STZ)引起的糖尿病大鼠伤口细胞增殖及体外对成纤维细胞增殖迁移的作用，与模型组相比,不同剂量的疡愈涂剂均能明显缩短STZ诱发糖尿病大鼠复合创伤后创面的愈合时间,提高创面愈合率，疡愈涂剂细胞核增殖抗原(PCNA)表达明显高于模型组，从而得出结论:疡愈涂剂可能通过促进糖尿病大鼠创面成纤维细胞的增殖,从而加速创面的愈合。董建勋等[29]采用“激素干预—皮肤缺损—细菌感染”复合因素叠加法制备慢性皮肤溃疡大鼠模型。实验观察大鼠一般生活行为,检测创面分泌物溶菌酶含量,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血栓素B2(TXB2)含量及组织病理改变，结果发现与模型组比较,传统回阳生肌膏及其脂质体凝胶治疗组创面分泌物溶菌酶含量显著升高(P<0.05或P<0.01);血清中TNF-α和TXB2的含量显著下降(P<0.05或P<0.01);创面肉芽组织增多,胶原合成旺盛,皮肤结构趋于完整。

10 结语

纵观上述文献，中医药促进创面愈合等方面实验研究发现中医药创面愈合的主要作用机制可能是通过调控生长因子的合成和分泌,促进细胞分裂增殖,刺激创面新生血管形成,改善创面的血液循环,调控胶原的合成及代谢,调控创面修复过程中TGFβ1信号转导分子修复基因Smad3的表达,调节创面修复基质形成,营养创面等发挥其多靶点、多环节、多层次的综合调控作用,促进创面愈合。研究资料表明,中医药具有肯定的促进溃疡面愈合的作用,为慢性疮疡的中医药防治研究开辟了新的途径。但目前大多研究尚处于起步阶段,中药促进溃疡面愈合作用机制及其药效物质基础尚有待进一步阐明,今后应加强中医药促中医药促进创面生理性修复及组织再生的研究,并从细胞学、分子学等多个水平作更为深入的研究和探讨，以期全面阐明中药治疗疮疡的作用机理,为中医药临床治疗提供更多的科学实验根据。

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