基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶-2与卵巢上皮性癌血管生成的关系

孙丽君 武军 李长江

新生血管不仅为肿瘤细胞的增殖提供养分，而且是肿瘤细胞进一步侵袭的重要途径。近年来研究表明基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein，MMPs)在肿瘤血管生成中起重要作用［1］。本文采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2的表达，探讨其与局部血管生成的关系，为临床上进一步了解卵巢上皮性癌肿瘤血管生成情况提供帮助。

1 资料与方法

1．1 一般资料 收集河北省唐山市人民医院1990至2005年卵巢上皮性癌初次手术切除标本存档蜡块75例(卵巢上皮性癌组)，年龄36～62岁，平均年龄48岁;术前未做过任何化疗和放疗。按WHO分类标准组织学分类，浆液性癌27例，粘液性癌19例，子宫内膜样癌16例，透明细胞癌13例。按照FIGO分期，Ⅰ期19例，Ⅱ期17例，Ⅲ期23例，Ⅳ期16例。随机选取同期卵巢良性肿瘤样本15例作为卵巢良性肿瘤组，年龄21～70岁，平均年龄39岁;因其他妇科良性疾病而行手术治疗并在术中进行卵巢活检的样本12例作为对照组，年龄38～58岁，平均年龄46岁。

1．2 试剂 即用型鼠抗人MMP-9及MMP-2单克隆抗体(克隆号56-2A4)、SP免疫组化超敏染色试剂盒、二氨基联苯氨(DAB)，均由美国Maxim公司生产，购自福州迈新生物技术有限公司。

1．3 方法 采用免疫组化SP法检测卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2的表达情况，步骤按说明书操作。MMP-9及MMP-2免去抗原修复步骤。MMP-9及MMP-2用DAB显色。用已知阳性片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替第一抗体作为阴性对照。

1．4 结果判断标准 MMP-9及MMP-2的判断标准参照江忠清等［2］的方法。

1．5 统计学分析 应用SPSS 10．0统计软件，计数资料采用χ2检验，计量资料以¯x±s表示，两变量间的关系用线性相关分析，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌、卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织的表达 MMP-9在正常组阳性表达2例，阳性率16．67%，良性组阳性表达8例，阳性率54．45%，恶性组阳性表达62例，阳性率82．67%，MMP-2在正常组阳性表达2例，阳性率16．67%，良性组阳性表达6例，阳性率40．00%，恶性组阳性表达67例，阳性率89．33%，从正常卵巢组织到卵巢良性肿瘤组再到卵巢上皮性癌组，MMP-9及MMP-2阳性表达率显著升高(P ＜0．05)。

2．2 MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌和卵巢良性肿瘤组的表达与MVD的关系 在卵巢上皮性癌和卵巢良性肿瘤组中当MMP-9呈阴性表达时，MVD良性组中为(29±13)条，恶性组中为(39±18)条，当MMP-9呈阳性表达时，MVD良性组中为(33±6)条，恶性组中为(38±10)条，当MMP-9呈强阳性表达时，MVD良性组中为(51±12)条，恶性组中为(48±11)条。在卵巢上皮性癌和卵巢良性肿瘤组中当MMP-2呈阴性表达时，MVD良性组中为(21±10)条，恶性组中为(32±14)条，当MMP-2呈阳性表达时，MVD良性组中为(32±5)条，恶性组中为(38±11)条，当MMP-2呈强阳性表达时，MVD良性组中为(45±11)条，恶性组中为(47±11)条，由此可见，在卵巢上皮性癌和卵巢良性肿瘤组中当MMP-9及MMP-2呈阳性表达时，MVD显著升高(前者 P ＜0．01，后者 P ＜0．05)。线性相关分析显示MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌组中表达与MVD显著正相关(r=0．286，P ＜0．05)。

3 讨论

MMPs是蛋白水解酶中较为重要的一类，肿瘤细胞能分泌血管生成因子，如血管内皮生长因子(VEGF)等，可诱导内皮细胞产生MMPs［1］，可见肿瘤细胞除能分泌MMPs外，还通过分泌促血管生成因子间接促进血管内皮细胞产生MMPs，降解细胞外基质(ECM)和基底膜(BM)［3，4］，进而促进肿瘤新生血管的生成，MMP-9(92 kDa 4型胶原酶/明胶酶B)是MMPs中分子量最大的酶，以酶原形式分泌，需经活化后才能发挥作用，其主要功能就是降解4、5型胶原和明胶，与肿瘤血管生成和侵袭转移能力有关［5］。MMP-2是分子量为72 KDa的4型胶原酶，主要作用底物为4、5型胶原，主要由肿瘤细胞、成纤维细胞和炎性细胞分泌，研究表明其在肿瘤介导的细胞外基质降解中起关键作用［6］。而基底膜和基质的降解对血管生成所必须的内皮细胞迁移极为重要，MMP-2被认为是肿瘤血管生成关键因素之一［7］。MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌的表达与局部肿瘤血管生成的关系，国内少见报道。本文资料显示，从正常卵巢组织到卵巢良性肿瘤组再到卵巢上皮性癌组，MMP-9及MMP-2阳性表达率显著升高(P ＜0．05)。王喜梅等［8］报道，在卵巢上皮性癌中MMP-9阳性表达率显著升高(P＜0．05)。本文结果与王喜梅等［8］及国外研究［7］的相符，进一步证实了MMP-9及MMP-2在卵巢上皮性癌中过度表达，促进肿瘤性血管生成。故作者认为，卵巢上皮性癌中MMP-9及MMP-2表达高者，其肿瘤血管生成能力显著增强。由此可见，卵巢上皮性癌MMP-9及MMP-2表达增强，可能与卵巢上皮性癌的发生发展密切相关。因此，检测卵巢上皮性癌中MMP-9及MMP-2的表达有助于进一步了解其肿瘤血管生成情况，有一定的应用价值。

综上所述，血管生成与妇科肿瘤发生发展及治疗关系密切。明确卵巢上皮性癌中VEGF调节机制，特别是针对MMP-9及MMP-2与VEGF及其受体的研究，为临床上进一步了解卵巢上皮性癌肿瘤血管生成情况提供帮助，为通过抑制血管生成过程从而达到抑制癌瘤生长和转移提供理论依据。

1 Folkman J．Tumor angiogenesis:therapeutic implication．N Engl J Med，1971，285:1182-1186．

2 江忠清．宫颈癌MMP-9表达与肿瘤血管生成，癌细胞增殖及侵袭转移的关系．癌症，2003，22:178-184．

3 Chambers AF，Matrisian LM．Changing views of the role of Matrix metalloproteinases in metastasis．J Natl Cancer Inst，1997，89:1260-1270．

4 Ray JM，Stetle-Stevenson WG．The role of matrix metalloproteinases and their inhibitors in tumer invasion，metastasis and angiogenesis．Eur Respir J，1994，7:2062-2072．

5 Aznavoorian S，Murph AN，Stetler-Stevenson WG，et al．Molecular aspects of tumer cell invasion and metastasis．Cancer，1993，71:1368-1383．

6 封国生，谭毓铨．基质金属蛋白酶及4型胶原酶在胃癌中表达及其意义．中华外科杂志，2000，38:775-777．

7 Rothenberg ML，Nelson AR，Hande KR．New drugs on the horizon:matrix metallop roteinase inhibitors．Stem Cells，1999，17:237-240．

8 王喜梅，孙雷，郑仁恕，等．应用组织微阵技术研究MMP-9与TIMP-1在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义．肿瘤防治研究，2005，32:484-486．