膜突蛋白Moesin在AGEs刺激小鼠各器官磷酸化及其机制研究

黄巧冰 李巧琴 王陵军 郭晓华 陈 波 李 强

南方医科大学基础医学院病理生理教研室,广州,510515

目的:探讨糖基化蛋白终产物(AGEs)刺激对小鼠各器官膜突蛋白(Moesin)磷酸化水平变化及其机制。方法:D-葡萄糖与小鼠白蛋白(MSA)共同孵育8周,经过滤透析制备成含有AGEs 72.50 U/mg蛋白的AGE-MSA,而对照组天然MSA中只含有AGEs 0.85 U/mg蛋白。将C57 BL/6雌性小鼠随机分成(1)对照组:每天定时腹腔注射天然MSA10 mg/kg体重,连续注射7天;(2)AGE组:每天定时腹腔注射AGEMSA 10 mg/kg,连续注射7天;(3)SB203580+AGE组和Y27632+AGE组:在给予AGE-MSA前30min,分别预先腹腔注射p38 MAPK抑制剂SB203580(1 mg/kg),或ROCK抑制剂Y27632(5 mg/kg),连续7天。制备模型后,取小鼠的眼球、大脑、心脏、肝脏、肾脏进行石蜡包埋、切片,通过免疫组织化学对各脏器Moesin及其磷酸化表达水平的变化进行观察比较;用Western blot检测Moesin及其磷酸化水平的变化,并观察p38 MAPK和ROCK磷酸化的改变;用伊文思蓝漏出法分别检测活体小鼠视网膜血管通透性和血脑屏障的功能变化。分别分离视网膜血管和脑微血管。结果:免疫组化结果表明,对照组Moesin主要表达在各脏器的微血管内皮细胞;AGEs刺激、p38MAPK抑制剂SB203580或ROCK抑制剂Y27632预处理后再给予AGE-MSA刺激均不影响Moesin蛋白的表达;AGE组各脏器血管内皮细胞的磷酸化Moesin的着色明显加深;SB203580或Y27632预处理后再给予AGEs可明显减轻磷酸化Moesin的着色。Western blot结果显示AGE组视网膜血管和脑微血管Moesin蛋白表达没有明显变化,但是磷酸化Moesin的含量明显增加,用p38 MAPK和ROCK抑制剂抑制了二者的磷酸化后,AGE组的磷酸化 Moesin变化被阻断。AGE-MSA刺激导致伊文思蓝视网膜血管和血脑屏障中的漏出明显增多,分别是对照组的2.8倍和2.7倍;用p38 MAPK和ROCK抑制剂预处理小鼠,可以明显减轻视网膜通透性的增高和血脑屏障功能的障碍。结论:Moesin磷酸化对血管内皮细胞功能有明显的影响;AGEs刺激导致小鼠各脏器内皮细胞Moesin蛋白的磷酸化,p38 MAPK和ROCK两条信号途径参与了Moesin磷酸化过程。