衰老模型大鼠下颌下腺组织结构的改变

葛志华 李俊玫 高福禄 王春艳

衰老模型大鼠下颌下腺组织结构的改变

葛志华 李俊玫 高福禄 王春艳

目的 观察衰老大鼠下颌下腺组织结构形态学改变。方法 D-半乳糖诱导大鼠衰老模型,取下颌下腺制备组织切片。光学显微镜下计算腺实质、脂肪和纤维间质的相对体积比。结果 正常组腺实质相对体积比明显高于模型组(P＜0.01);模型组脂肪和纤维间质含量明显高于正常组(P＜0.01)。结论 D-半乳糖模型大鼠下颌下腺腺实质成分伴随衰老逐渐减少而被脂肪和纤维间质所替代。

衰老大鼠;下颌下腺;组织结构

下颌下腺为三大唾液腺之一,是具有内、外双重分泌功能的腺体,70%的唾液和近 50种生物活性物质由颌下腺分泌,它的功能已远远超过一般消化腺的范畴,在内环境自稳机制中发挥其独特的作用[1]。多年来,人们从各个角度对其进行了深入的研究,但从抗衰老的角度对下颌下腺增龄性改变的研究却少有报道。本实验采用 D-半乳糖诱发亚急性衰老模型,以定量组织学技术,观察衰老大鼠下颌下腺组织结构的变化与衰老的关系,为预防衰老性涎腺疾病奠定形态学的研究基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物的选择及分组 选用 8周龄清洁级SD雌性大鼠 20只,体重 180～220 g,实验大鼠购自河北省实验动物中心,合格证编号：605106,饲养室温度(22±2)℃,相对湿度 50%～70%,随机分为正常组和模型组,每组 10只。

1.2 仪器 VT1000S振荡切片机,德国 LEICA公司;OLYM-PUS光学显微镜,日本;ULTRACUTE超薄切片机,奥地利。

1.3 模型的建立及 2组动物的处理方法 正常组大鼠正常喂60 d。模型组大鼠腹腔注射 6%D-半乳糖(300mg◦kg-1◦d-1),1次 /d,连续 60 d。

1.4 取材、固定及染色 大鼠经 10%水合氯醛(0.3 ml/100mg)腹腔注射麻醉后,开胸,经左心室插管入主动脉,0.9%氧化钠溶液冲净血液后,用 4%多聚甲醛进行灌注固定(HE染色)、取双侧下颌下腺,常规方法制备 HE染色切片。

1.5 定量组织学方法 在光学显微镜下观察 HE染色切片进行定量组织学研究。根据文献中介绍的随机点计数立体学方法[2,3],用含 100点的目镜网格,400倍视野下进行计数,分别计算各视野内的腺实质(包括导管及腺泡)、脂肪和纤维性间质(包括血管、神经和胶原纤维)所占的点数。分别计算出每张切片上各种组织成分的点数在总点数中所占比例,表示下颌下腺内各种成分的相对体积比。

1.6 统计学分析 应用 SPSS 11.0统计软件,计量资料以±s表示,组间比较行两样本比较的 t检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HE染色组织学形态观察 正常组下颌下腺各级导管及腺泡细胞密集,边界清晰,无萎缩及塌陷。颗粒曲管(granular convoluted tubule,GCT)、纹状管管腔较大,管壁上皮排列整齐,其顶部胞质呈深红色,为嗜酸性分泌颗粒。浆液性腺泡较多,细胞质着深紫红色,细胞核椭圆形,位于基部。粘液性腺泡数量较少,细胞质着浅紫兰色,核为扁圆形,位于细胞基底部(图1)。模型组下颌下腺与正常组相比有明显形态学改变,腺叶、导管及各种腺泡均呈不同程度的萎缩,间隙增宽(图2)。GCT数目减少,有的部位失去管腔结构,细胞排列不整齐,呈簇状堆集。腺组织趋于减少,结缔组织明显增加,可见血管及纤维增多。

2.2 定量组织学结果 2组腺实质相对体积比比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。2组纤维间质和脂肪体积比比较,差异亦有统计学意义(P＜0.01),模型组明显高于正常组。伴随衰老,脂肪和纤维间质含量逐渐增多,脂肪和纤维间质的平均体积比在正常组分别为(2.4±0.8)%和(15.8±1.7)%,模型组分别上升为(10.8±3.2)%和(29.3±2.5)%。见表 1。

图1 正常组大鼠下颌下腺(HE×400)

图2 模型组大鼠下颌下腺(HE×400)

3 讨论

下颌下腺为三大唾液腺之一,传统的观念认为下颌下腺为外分泌腺,自从 1936年以来人们陆续在下颌下腺中发现和提纯了神经生长因子(NGF)、上皮生长因子(EGF)等近 50种生物活性物质,其中有些因子完全达到激素的标准。原位杂交技术的应用,使人们发现在鼠下颌下腺 GCT细胞内有 EGFmRNA、NGFmRNA等表达,证明下颌下腺内许多生物活性物质是由下颌下腺 GCT细胞自身合成分泌的[1],它的功能已远远超过一般消化腺的范畴。因此认为下颌下腺是具有外分泌和内分泌双重功能的腺体。

表1 2组大鼠下颌下腺不同组织相对体积比较n=10,%,±s

表1 2组大鼠下颌下腺不同组织相对体积比较n=10,%,±s

组别 纤维间质 脂肪 腺实质正常组 15.8±1.7 2.4±0.8 81.8±1.6模型组 29.3±2.5 10.8±3.2 59.9±2.4 t值 13.999 8.133 23.754 P值 0.000 0.000 0.000

光镜下,正常下颌下腺实质由分泌部和导管组成,分泌部以浆液性腺泡为主,导管的组成则因不同物种而异,包括人在内的大多数动物其导管包括闰管、纹状管和小叶间导管;而在啮齿类(主要是大鼠和小鼠)动物则是由闰管、颗粒曲管、纹状管和小叶间导管组成[2]。动物一生中腺体的体积未增加,腺实质成分相对体积的减少量,实际上表示了腺实质成分随增龄而真正减少的量。这种腺体内功能单位的丧失可能与老年人涎腺功能的改变有关。本研究结果表明,与正常组相比,模型组腺实质的平均体积减少,而腺体内脂肪组织含量却随衰老而增多(P＜0.01),腺体内的纤维间质也逐渐增多(P＜0.05)。可见,下颌下腺实质成分随龄丧失的体积,由于腺体内脂肪和纤维间质含量的逐渐增加得到了适当的补充,从而维持了下颌下腺的体积基本不变。这与葛志华等[3,4]的糖尿病时,与正常组比较,下颌下腺组织间质增多,细胞缩小,血管内皮生长因子(VEGF)水平提高,C-fos在腺实质细胞中分泌减少的结论是相符合的。

上述研究结果再次证实下颌下腺随着年龄的增长,实质成分逐渐减少,脂肪和纤维间质的量逐渐增加[5,6]。也就是说,功能性的腺实质逐渐被脂肪和纤维组织所替代,这也是人类涎腺组织学上增龄性改变的规律。对于深入理解和研究下颌下腺功能对机体的影响及对衰老病人涎腺功能减退性疾病的预防、治疗具有重要意义。

1 于海忠,赵淑敏,葛志华.D-半乳糖衰老大鼠下颌下腺超微结构的改变 .河北医药 ,2009,31：1287-1288.

2 贾雪梅,熊惠平,齐易祥.颌下腺的研究进展.解剖学杂志,2000,23：184-186.

3 葛志华,王春艳,张俊川,等,VEGF在 db/db自发性糖尿病小鼠下颌下腺的表达.河北医学,2001,7：1057-1060.

4 葛志华,高福禄,王春艳,等.C-fos在 db/db自发性糖尿病小鼠下颌下腺的表达.中国组织化学与细胞化学杂志,2006,15：559-561.

5 Waterhouse JP.Replacement of functional parenchymal cells by fat and connective tissue in human submandibular salivary glands：an agerelated change.JOral Pathol,1973,2：16.

6 Scott J.Ouantitative age changes in the histological structure of human submandibular salivay glands.Arch Oral Biol,1977,22：221.

The changes in organizationa l structure of submandibu lar gland in aging rats induced by D-galactose

GE Zhihua＊,LIJunmei＊,GAO Fulu,et al.＊Office of Science and Reseach,Affiliated Hospital of Chengde Medical College,Hebei,Chengde 067000,China

Ob jective To observe themorphological changes of the organizational structure of submandibular glands of aging rats induced by D-galactose.M ethods D-galactose senescencemodel was used in this research.The submandibu lar glands were made into tissue sections.Under light microscope,the relative tissue ratio of parenchyma,adipose tissue and interstitial fiber of submandibular gland was calculated.Results the relative volume ratio of thegland parenchyma components in normal submandibular glandswas significantly higher than that inmodelgroup,and the ratio of lipid and interstitial fibre in model group was significantly higher than that in normal group.Conclusion The evident alterations of histomorphology occur in submandibu lar gland with aging progress.The gland parenchyma components decrease singnificantly and it is replased by adipose tissue and interstitial fiber.

aging rats;submandibular gland;organizational structure

R 781.7

A

1002-7386(2010)06-0661-02

项目来源：河北省科学技术研究与发展计划项目 (编号：09276102D-7)

067000 河北省承德市,承德医学院附属医院科研处(葛志华、李俊玫);河北师范大学(高福禄);承德医学院组胚教研室(王春艳)

王春艳,067000 承德医学院组胚教研室;E-mail：ycw 23922@163.com

2010-01-27)