循环肿瘤细胞计数在胃癌患者中的临床应用

王礼泉，王玉华，崔进贝

（山东省潍坊市人民医院，山东潍坊 261041）

胃癌是一种严重威胁人民身体健康的疾病，可发生于任何年龄，但以40～60岁多见，男多于女（约为2∶1）。 血行播散是肿瘤转移的重要途径，肿瘤细胞可以通过血液循环抵达任何组织和器官，随着肿瘤细胞的不断增殖，部分细胞失去相互附着的能力从肿瘤母体脱离，降解、浸润周围组织进入到血液或淋巴系统中。这些自发或因诊疗操作进入外周血循环的肿瘤细胞被称为CTCs[1-3]。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2009年8月～2010年3月在潍坊市人民医院就诊的胃癌患者50例，胃溃疡患者50例，健康志愿者50例，其中，男性98例，女性52例，平均(47±13)岁，各组间性别、年龄无明显差异。

1.2 实验方法

1.2.1 标本采集及核细胞提取 清晨空腹采集确诊胃癌患者、胃溃疡患者、健康志愿者静脉血各10 ml；加入淋巴细胞分离液，密度梯度离心方法分离单个核细胞。

1.2.2 免疫磁性微珠制备[4,5]磁珠经60Co照射灭菌，加HAbl8，磁场中除上清，除去未结合的单抗，PBS封闭磁珠，4℃保存备用。

1.2.3 单个核细胞的免疫磁性标记[6-8]按照每10 ml血标本加入300 μl免疫磁珠的比例，将标本分离所得的单个核细胞与磁珠混匀，4℃孵育30 min，用分离缓冲液制成1 ml细胞悬液备用。

1.2.4 免疫磁性分离 将标记的细胞悬液通过磁性分离柱，并用缓冲液冲洗柱子；将磁性分离柱从磁场中移开，用稀释缓冲液洗脱柱内细胞；将收集的细胞液离心后加入缓冲液1 ml，光镜下细胞计数，取3个视野的平均值，计算外周血中癌细胞的浓度。

1.3 统计学方法

本研究采用SPSS 13.0软件对数据进行分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

50例胃溃疡患者及50例健康的志愿者外周血中未发现 CTCs，胃癌患者 CTCs数目为（16.40±8.15）。

3 讨论

随着纳米技术扩展应用，纳米免疫磁珠为肿瘤细胞生物诊断技术提供了分离手段，其原理是基于细胞表面抗原以及某种蛋白与连有免疫磁珠的特异性单抗相结合，外加磁场后通过抗体与免疫磁珠相连细胞和蛋白吸附而滞留在磁场中，由于免疫磁珠表面的单抗只结合含有特异性抗原的细胞和蛋白，从而达到与其他种类的细胞和蛋白相分离的目的。此种分离技术将抗原抗体反应的高度特异性和免疫磁珠的富集分离作用相结合，达到特异性的生物活性物质和细胞的富集和分离效果，使其在临床医学诊断上具有广阔的应用前景[9]。

绝大多数胃癌患者无明显体征，部分患者有上腹部轻度压痛。位于幽门窦或胃体的进展期胃癌有时可扪及肿块，肿块常呈结节状、质硬，当肿瘤向邻近脏器或组织浸润时，肿块常固定而不能推动，女性患者在中下腹扪及肿块，常提示为krukenbe瘤可能。转移途径：直接播散是浸润型胃癌可沿黏膜或浆膜直接向胃壁内、食管或十二指肠发展。癌肿一旦侵及浆膜，即容易向周围邻近器官或组织如肝、胰、脾、横结肠、空肠、膈肌、大网膜及腹壁等浸润。癌细胞脱落时也可种植于腹腔、盆腔、卵巢与直肠膀胱陷窝等处。淋巴结转移占胃癌转移的70%，胃下部癌肿常转移至幽门下、胃下及腹腔动脉旁等淋巴结，而上部癌肿常转移至胰旁、贲门旁、胃上等淋巴结。晚期癌可能转移至主动脉周围及膈上淋巴结。由于腹腔淋巴结与胸导管直接交通，故可转移至左锁骨上淋巴结。部分患者外周血中可发现癌细胞，可通过门静脉转移至肝脏，并可达肺、骨、肾、脑、脑膜、脾、皮肤等处。

本研究发现50例胃溃疡患者及50例健康的志愿者外周血中未发现 CTCs，胃癌患者 CTCs 数目为（16.40±8.15），仅在胃癌患者检测出CTCs，循环肿瘤细胞的检测有助于发现早期肿瘤患者的微转移，重新确定临床分期，监测术后患者肿瘤复发与转移，评估预后，选择个体化的治疗策略；同时为胃癌的早期筛查提供新的方法。

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