高效液相色谱法测定七味柏苓片中盐酸小檗碱和五味子乙素的含量

2010-02-07谢晓燕张忠君于春英

中成药 2010年9期

关键词：乙素小檗五味子

谢晓燕，张忠君，于春英

(1.长春中医药大学，吉林长春 130117;2.一汽总医院，吉林长春 130000;3.吉林大药房;吉林长春130000)

长期以来，医院制剂存在着申报手续简单、质量标准普遍偏低的问题，这样就导致了制剂生产过程的质量控制以及成品出厂检验过程中，都缺少质量控制的指标。因此我们对我院制剂的质量标准重新进行了修订，作为内控质量标准来控制制剂成品的质量。

七味柏苓片为我校附属医院院内制剂，主要用于治疗妇女湿热内蕴所致的带下症。本实验在其原有质量标准中增加了黄柏和五味子的含量测定，即采用高效液相色谱法检测盐酸小檗碱和五味子乙素的含量，结果表明该方法先进、具有可操作性，能够控制该制剂的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器:LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-10 Avp紫外检测器，UV-3000型紫外分光光度仪(日本岛津)。

1.2 试药:盐酸小檗碱对照品及五味子乙素对照品购于中国药品生物制品检定所(批号为0713-200107、765-9202);七味柏苓片由本院制剂室制备(批号为20070401、20070402、20070403);乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 盐酸小檗碱的含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的 Kromasil柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);乙腈-0.04%三乙胺溶液(40∶60)为流动相;检测波长270 nm;流速0.8 mL/min;柱温:30℃。

2.1.2 对照品溶液的制备称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(100∶1)混合溶液50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，用甲醇-盐酸(100∶1)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 mL，蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，上中性氧化铝柱(100～200目，内径1.5 cm，高5 cm)，用甲醇洗脱，收集洗脱液于25 mL量瓶中，收集至刻度，摇匀，即得。

2.1.4 阴性样品溶液的制备按供试品溶液制备时的取样量，折算成除黄柏外，处方中其余药材的取样量，按制备工艺制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液，即得。

2.1.5 线性关系考察精密吸取对照品溶液 2、4、8、10、15 μL注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=4 447 748.61X－57 993.56，r=0.999 9，结果表明对照品在0.073 6～0.552 0 g范围内，呈良好线性关系。

2.1.6 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，每隔一定时间进样一次，依法测定，RSD为0.66%(n=5)。

2.1.7 精密度试验精密吸取对照品溶液10 μL，分别进样5次，依法测定，记录峰面积积分值，计算，考察精密度，RSD为0.46%(n=5)。

2.1.8 重复性试验精密称取同一批样品，共5份，依法独立测定，RSD为1.75%。

2.1.9 回收率试验精密称取同法测定的已知含量样品，精密加入对照品溶液适量，依法测定，平均回收率为97.44%，RSD为1.96%(n=5)。结果见表1。

2.1.10 样品测定取3批样品，按2.1.3项制备供试品溶液，每批3份，分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批样品中盐酸小檗碱的含量，结果见表2，图1～3。

2.2 五味子乙素的含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱选择十八烷基硅烷键合硅胶为填

表1 盐酸小檗碱回收率试验结果

表2 3批样品盐酸小檗碱含量测定结果(n=3)

图1 盐酸小檗碱对照品HPLC图

图2 供试品HPLC图

图3 阴性对照HPLC图

充剂的 ZORBAX-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);甲醇－0.1%磷酸溶液－四甲基氢氧化铵(82∶18∶0.1)为流动相;检测波长:254 nm;流速:0.8 mL/min;柱温:30℃。

2.2.2 对照品溶液的制备称取五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解于100 mL量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备取本品20片，除去包衣，研细，取约0.5 g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿80 mL回流提取4 h，氯仿液蒸干，残渣加甲醇溶解于5mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 阴性样品溶液的制备按供试品溶液制备时的取样量，折算成除五味子外处方中其余药材的取样量，按制备工艺制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液，即得。

2.2.5 线性关系考察精密吸取对照品溶液 2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL 注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=2 805 703X－13 505，r=0.999 9，结果表明对照品在0.336 25～2.017 5 g范围内，呈良好线性关系。

2.2.6 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，每隔一定时间进样一次，依法测定，RSD为0.64%(n=5)。

2.2.7 精密度试验精密吸取对照品溶液6 μL，分别进样5次，依法测定，记录峰面积积分值，计算，考察精密度，RSD为0.45%(n=5)。

2.2.8 重复性试验精密称取同一批样品，共5份，依法独立测定，RSD为1.01%。

2.2.9 回收率试验精密称取同法测定的已知含量样品，精密加入对照品溶液适量，依法测定，平均回收率为98.29%，RSD为2.66%(n=5)。结果见表3。

2.2.10 样品测定取3批样品，按2.2.3项制备供试品溶液，每批3份，分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算3批样品中五味子乙素的含量，结果见表4，图4～6。