红花注射液颈动脉灌注治疗脑梗死的疗效及对大鼠脑线粒体影响的研究

徐开蕾， 范华昌， 刘龙民， 王庆军

(上海中医药大学普陀临床医学院，上海200062)

我国是脑血管病的高发区之一，近年来脑梗死的发病率呈上升趋势［1］，严重威胁中老年人的健康和生存质量，因此对脑梗死的治疗日益受到国内外医学界的重视。寻找安全有效的新技术新方法，开拓中药给药新途径，提高脑梗死的疗效，是临床研究的重点。我科开展了中药红花注射液经颈动脉灌注治疗脑梗死的临床研究，取得较为满意的疗效，同时采用动物实验的研究方法，从脑神经细胞线粒体能量代谢和氧化呼吸角度，探讨了红花注射液颈动脉灌注治疗脑梗死的作用机制，为临床进一步开拓应用提供依据。现报道如下。

1 临床观察

1.1 病例选择 选取的80例观察对象均为2006年3月－2008年12月由急诊收治的急性脑梗死患者，其中男性44例，女36例;年龄45～80岁，平均(62.03±9.06)岁;治疗前病程4 h～3 d，平均(1.5±0.7)d;其中肌力 0°48 例，I°12 例，II°15 例，III°5例;伴有高血压病56例，冠心病34例，糖尿病11例，高脂血症37例，高黏血症55例。随机分为治疗组及对照组各40例。两组病例条件经统计学处理无显著差异(P＞0.05)。

1.2 诊断标准 全部病例均符合1995年全国第四届脑血管病学术会议制定的诊断标准［2］。纳入标准:经临床与头颅CT或头颅MRI确诊为脑梗死;符合中医诊断标准，明确为中风中经络［3］范畴。排除标准［1］:凡有以下一项者作为排除病例:(1)大面积脑梗死、短暂性脑缺血发作、脑出血、出血性梗死;(2)严重心脏病、神志昏愦、意识障碍、精神病以及患有癫痫、过敏性疾病史者;(3)穿刺部位附近有炎性病灶者;(4)血压、血糖控制不理想者;(5)合并肺部及气管感染者;(6)年龄在80岁以上、生命体征不稳定及体质较差者。

1.3 治疗方法

1.3.1 一般处理 对两组合并症予常规对症处理。

1.3.2 治疗组 采用颈动脉灌注给药方法，将红花注射液(哈尔滨圣泰药业生产，批号Z23020819，药物含量:每1 mL注射液相当于红花原生药0.5 g)20 mL加入0.9%氯化钠注射液60 mL中以4 mL/min的滴速进行颈动脉加压灌注，每日治疗1次，隔日使用，共治疗10次。

对照组 红花注射液20 mL加入0.9%氯化钠注射液500 mL中，每日1次，静脉滴注20日。

1.4 疗效评定标准 用药前后两组的神经功能缺损评分，参照1995年全国第四届脑血管病学术会议制定的标准［2］。按基本痊愈、显著进步、进步、无变化、恶化进行疗效评定。

1.5 实验室检查 两组患者均在治疗前后测定血、尿常规、肝肾功能、血液流变学、纤维蛋白原以及心电图等。

1.7 结果

1.7.1 两组临床疗效比较 经20日治疗，治疗组显效率80.0%，总有效率95.0%，对照组显效率47.5%，总有效率70.0%，两组治疗后疗效比较差异有显著意义(P＜0.01)，见表1。

表1 两组临床疗效比较/例(%)

1.7.2 两组治疗后肌力变化比较 治疗前两组肌力比较无差异(P＞0.05)，具有可比性。治疗后两组肌力见表2，治疗组肌力改善明显优于对照组(P＜0.01)。

表2 两组治疗后肌力比较/例

1.7.3 两组血液流变学指标比较 血液流变学各项指标改善以治疗组显著(P＜0.05～0.01)，其中纤维蛋白原及血浆比黏度治疗后与对照组相比改变尤为明显(P＜0.01)，见表3。

表3 两组治疗前后血液流变学指标比较(±s)

表3 两组治疗前后血液流变学指标比较(±s)

注:治疗前后比较，*P＜0.05，**P ＜0.01;对照组比较，△P ＜0.05，△△P＜0.01。

治疗前 治疗后指 标 对照组(n=40)治疗组(n=40)治疗前 治疗后全血黏度/(mps)切变率1 200 5.95±0.56 5.17±0.47* 5.93±0.58 4.51±0.52**△2 30 6.36±0.68 6.07±0.62 6.39±0.70 5.53±0.61*3 5 9.63±1.13 8.46±1.45* 9.65±1.12 7.48±0.85**△4 20.85±1.74 17.93±1.86* 20.91±1.75 15.60±1.67**△血浆黏度值 2.59±0.64 2.12±0.59* 2.62±0.65 1.54±0.38**△△红细胞比容/% 54.27±6.53 51.46±7.20 54.25±6.36 47.85±8.09*红细胞聚集指数 2.31±0.52 1.89±0.46* 2.35±0.56 1.61±0.38**△纤维蛋白原/(g/L) 5.30±1.77 4.99±1.41 5.35±1.75 3.04±1.52 1**△△

1.8 不良反应 两组病例在治疗过程中均未发生任何不良反应。

2 实验研究

2.1 材料与分组 将健康SD大鼠，体重280～300 g，随机分为 5 组，参照 Zea Longa［4］制备大鼠脑梗死再灌注(MCAO/R)模型。A组，正常组;B组，颈动脉灌注红花注射液组;C组，颈动脉灌注生理盐水组;D组，腹腔注射红花注射液组;E组，单纯脑梗死组。模型建立成功后除正常组外每组分别在6、24、72 h 3个时相点观察各项指标的变化。

2.2 药物的配置 根据前期临床应用验证结果，红花注射液成人安全有效剂量为每次20 mL，结合人和本实验用大鼠的体重换算，大鼠的用药剂量为每次3 mL。在大鼠大脑中动脉线栓成功后，采用微量注射泵颈动脉灌注配置的红花注射液3 mL/次或生理盐水3 mL/次。

2.3 方法与结果

2.3.1 红花注射液颈动脉灌注对脑梗死大鼠神经功能的影响 根据 Zausinger［5］六分制评分标准评分，观察动物的意识状况、呼吸频率、幅度及肢体活动情况。于再灌注6、24、72 h后进行神经功能缺损评分。取评分为1～4分入选。结果显示:脑梗死后，B、C、D、E组于6 h神经功能均出现神经缺损体征，但无显著性差异(P＞0.05)。24 h(D组除外)、72 h，B组的神经功能评分与C组、D组及E组相比，均有明显差异(P＜0.05～0.01);D组于72 h与C组、E组相比，差异显著(P＜0.05)，见表4。

2.3.2 红花注射液颈动脉灌注对脑梗死大鼠脑皮质线粒体腺苷酸含量的影响 参照第三军医大学高原系病理生理学实验室方法［6］。研究数据显示，大鼠缺血再灌注后各时相点，B、C、D、E组与正常A组相比，脑皮质线粒体内ATP、AMP、ATP+ADP及总腺苷酸池含量均有明显降低。而B组在实施颈动脉灌注红花注射液后，明显遏制了线粒体内腺苷酸含量的降低，于再灌注后24 h、72 h，上述线粒体腺苷酸池含量均有明显上升，与C组、E组相比，差异非常显著(P＜0.01);其中ATP含量于再灌注后24 h、72 h与D组相比亦有明显改善，差异显著(P＜0.05～0.01)，见表5。

表4 红花注射液颈动脉灌注对脑梗死大鼠神经功能的影响(±s，n=8)

表4 红花注射液颈动脉灌注对脑梗死大鼠神经功能的影响(±s，n=8)

注:B组vs C组、D组、E组，*P＜0.05，**P＜0.01;D组vs C组、E组，△P＜0.05。

组 别 缺血再灌注时间6 h 24 h 72 h A 1.5±0.5 2.5±0.5* 2.6±0.5**△D 1.6±0.5 2.9±0.6 3.1±0.5*E 1.6±0.5 2.4±0.7* 2.5±0.5 5.0±0.0 5.0±0.0 5.0±0.0 B 1.6±0.5 3.3±0.7 3.6±0.5 C**△

2.3.3 红花注射液颈动脉灌注对脑梗死大鼠脑皮质线粒体氧化呼吸活性的影响 参照Clark J B等建立的氧电极法［7］。观察线粒体呼吸态的变化，根据记录仪连续记录的氧耗曲线，计算加入ADP后耗氧速率(III态呼吸，ST3)、ADP消耗完后耗氧速率(IV态呼吸，ST4)、呼吸控制率(RCR)=ST3/ST4以及氧化磷酸化效率(OPR)。结果显示，脑缺血再灌注后各时相点，B、C、D、E组与正常A组相比，ST3、RCR及OPR均呈明显下降的趋势(P＜0.05～0.01)，且ST4均有升高。但 B组与 C、D、E组相比，于再灌注后24 h(D 组除外)、72h，ST3、RCR 及OPR减少幅度明显减轻(P＜0.05～0.01);B组的ST4于24 h、72 h(C组除外)，与C、E两组相比无显著升高，有统计学意义(P＜0.05)，而红花注射液不同给药途径的B组与D组在各个时相点相比，a=0.05检验水准均无统计学意义，见表6。

表5 红花注射液颈动脉灌注对脑梗死大鼠后脑皮质线粒体腺苷酸含量的影响(±s，nmol/mg pro，n=6)

表5 红花注射液颈动脉灌注对脑梗死大鼠后脑皮质线粒体腺苷酸含量的影响(±s，nmol/mg pro，n=6)

注:B、C、D、E组vs A 组，*P ＜0.05，**P ＜0.01;B 组 vs C、D、E 组，△P＜0.05，△△P ＜0.01;D、E 组 vs C 组，#P ＜0.05，##P ＜0.01;D 组 vs E组，＄P＜0.05，＄＄P＜0.01

组别 时相点 ATP ADP AMP ATP+ADP 总腺苷酸池含量A 3.781±0.199 3.315±0.577 6.024±0.552 7.096±0.724 13.120±0.436 B 6 h 2.835±0.366** 2.993±0.207 4.336±0.498** 5.829±0.555* 10.164±1.047**24 h 2.419±0.150** 3.299±0.308 4.147±0.701** 5.718±0.307** 9.865±0.760**72 h 2.285±0.138** 2.849±0.774 3.895±0.467** 5.134±0.693** 9.030±0.668**C 6 h 2.674±0.315** 2.755±0.806 4.296±0.491** 5.429±1.030** 9.724±1.412**24 h 1.723±0.238**△△ 2.633±0.514 2.532±0.166**△△ 4.356±0.741**△△ 6.888±0.836**△△72 h 1.439±0.149**△△ 2.320±0.309* 2.857±0.292**△△ 3.760±0.397**△△ 6.617±0.364**△△D 6 h 2.639±0.459** 2.948±0.256 4.353±0.606** 5.587±0.586** 9.940±1.159**24 h 2.090±0.071**△# 3.022±0.338 3.721±0.210**## 5.111±0.377** 8.833±0.489**72 h 1.960±0.115**△△## 2.786±0.502 3.268±0.545** 4.746±0.547**# 8.013±0.936**#E 6 h 2.149±0.250**△ 3.292±0.324 3.292±0.335**△#＄ 5.442±0.561** 8.733±0.807**24 h 1.502±0.178**△△＄＄ 2.421±0.446*△ 2.767±0.421**△△＄ 3.923±0.597**△△ 6.690±0.771**△△72 h 1.288±0.117**△△＄＄ 2.159±0.157** 2.465±0.385**△△＄ 3.448±0.237**△△＄＄ 5.913±0.541**△△＄＄

表6 缺氧对大鼠脑皮质线粒体氧化呼吸功能的影响(±s，n=6)

表6 缺氧对大鼠脑皮质线粒体氧化呼吸功能的影响(±s，n=6)

注:B、C、D、E 组 vs A 组相比，*P＜0.05，**P ＜0.01;B组vs C、D、E组，△P ＜0.05，△△P＜0.01。

组别 时相点ST3 ST4(nmolO/min/mg pro) (nmolO/min/mg pro)RCR OPR(nmolATP/min/mg pro)A 301±12.558 B 6 h 54.2±4.195** 7.996±0.955 5.936±0.44* 131.212±8.358**66.791±5.232 7.215±0.853 9.375±1.397 160.24 h 56.516±5.588** 8.740±0.817 6.795±1.081** 135.639±13.410**72 h 49.117±4.983** 9.226±0.473 6.094±0.866** 117.881±12.958**C 6 h 49.275±3.039** 8.568±0.678 5.764±0.282* 118.260±7.294**24 h 45.616±2.037**△△ 11.151±1.625**△ 3.985±0.649**△△ 104.678±4.888**△△72 h 33.352±7.318**△△ 11.950±3.235** 2.939±0.888**△△ 80.046±17.564**△△D 6 h 51.468±3.586** 8.938±0.937* 5.829±0.888** 123.523±8.607**24 h 49.472±1.763**△△ 10.152±1.674** 5.02±0.680**△ 120.098±3.459**72 h 35.417±4.965**△△ 11.924±1.684** 2.877±0.867**△△ 80.055±17.329**△△E 6 h 46.277±2.604**△ 8.484±0.650 5.312±0.331** 111.065±6.249**△△24 h 46.366±4.19**△△ 11.253±1.1**△ 4.166±0.661**△△ 111.279±10.056**△△72 h 43.607±14.365**△△ 12.831±1.463**△ 4.958±2.881**△△ 85.002±11.915**△△

3 讨论

本实验讨论的脑梗死属于中医“中风”范畴，其发病常由于气血逆乱、瘀血阻滞所致，不论病因如何，病机主要在于“血瘀”［1］498－499，瘀血阻滞，窍络痹阻，乃致脑髓受损。故本实验以活血祛瘀，通经行滞为治疗大法，正如《医宗必读》所云:“治风先治血，血行风自灭”。红花为菊科植物红花(Cacthamus tinctorinus L)的干燥花，在祖国传统医学中被认为是活血化瘀之要药，上至《金匮要略》、《本草纲目》均有详细记载。红花中所含的红花黄色素(Safflor yellow.Sy)具有扩冠、降压、抗血栓、耐缺氧、免疫抑制等多种药理功效［8］。

通过颈动脉直接给药，药液可经颈总动脉直接注入病变侧脑内，在单位时间内更有效地发挥药物作用，避免全身用扩血管药物引起的稀释及偷漏现象［1］393。观察发现，当灌注 5 ～10 min 后，80%以上病人瘫侧肢体即出现麻、胀、蚁行、欲动感和不自主活动，一般用药一次后患侧肢体肌力均有不同程度的改善。本组治疗结果表明，颈动脉灌注治疗总有效率95%明显高于静脉对照组70%(P＜0.01)，并使血液流变学得到明显改善。

实验研究发现，红花注射液颈动脉灌注组与其他模型组相比，神经功能缺损症状明显减轻，且能明显遏制大鼠脑线粒体腺苷酸含量的降低，于再灌注后24 h或及72 h，脑皮质线粒体ATP、AMP、ATP+ADP及总腺苷酸池含量均有明显上升，ST3、RCR及OPR下降幅度明显减少。说明对脑梗死早期合理实施红花注射液颈动脉灌注治疗，可显著改善因缺血、缺氧所致的脑线粒体氧化磷酸化功能下降，纠正能量代谢紊乱和减少呼吸氧耗，在一定程度上保护线粒体功能和结构的完整，从而实现对脑组织的保护作用，减轻脑梗死的损伤程度甚至再缺血的可能。有效减轻了神经细胞凋亡及坏死的程度，促使脑水肿消除，故使瘫痪的肢体较快恢复生理功能，取得满意效果。我院实施颈动脉灌注治疗过程中，严格遵照操作规范，治疗病例中未发现不良反应。

综上所述，中药红花注射液经颈动脉灌注治疗急性脑梗死不失为安全有效的给药途径，可明显提高脑梗死的疗效，有助于致残后的恢复而改善生活质量，可望成为进一步提高脑梗死患者生存率、生存质量的新的治疗手段。

［1］王新志，韩群英，陈贺华.中华实用中风病大全［M］.北京:人民卫生出版社，1996.

［2］全国第四届脑血管病学术会议.各类脑血管疾病诊断要点及临床神经功能缺损程度评分标准(1995)［J］.中华神经科杂志，1996，29(6):379－383.

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［4］Zea L E，Weinstein P，Carson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20(1):84－89.

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